• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    纖維蛋白膠復(fù)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白與VEGF修復(fù)兔橈骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究

    2013-08-23 09:32:30肖裕華李紹琴潘文峰李建飛陳宗和
    實(shí)用臨床醫(yī)學(xué) 2013年6期
    關(guān)鍵詞:骨組織斷端成骨

    肖裕華 ,李紹琴 ,潘文峰 ,李建飛 ,陳宗和

    (1.江西省人民醫(yī)院骨一科,南昌 330006;2.上高縣中醫(yī)院骨科,江西 上高 336400)

    骨缺損修復(fù)治療一直是臨床上的難題之一,目前尚無妥善的解決方法。隨著組織工程學(xué)的發(fā)展,骨組織工程技術(shù)為骨缺損的修復(fù)提供了新的方法。目前大部分研究集中于支架性骨修復(fù)材料,但其需要手術(shù)切開才能應(yīng)用,不適用于只需要非手術(shù)治療的骨折,且修復(fù)材料內(nèi)部的再血管化問題一直未得到有效的解決[1]。纖維蛋白膠(FS)具有良好的生物相容性和可注射性。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)可誘導(dǎo)誘導(dǎo)性骨源性前體細(xì)胞向確定性骨源性前體細(xì)胞分化[2]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是促進(jìn)血管生長最重要的生長因子,對骨折愈合過程中的血管增生發(fā)揮著重要的作用。筆者的前期研究表明,用可注射的FS為載體復(fù)合BMP和VEGF具有良好的誘導(dǎo)大鼠異位成骨作用[2]。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上探索以FS為載體復(fù)合BMP和VEGF的新型骨修復(fù)材料修復(fù)兔橈骨節(jié)段性缺損,通過X線攝片觀察測量、生物力學(xué)測試、組織形態(tài)學(xué)觀察等手段,評價(jià)其修復(fù)的效果,為其臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料的制備

    FS(廣州倍秀生物技術(shù)有限公司)抑胰肽酶溶液內(nèi)分別加入rhBMP-2(北京華宇泰克生物工程公司)和VEGF(美國Ebioscience公司)。

    1.2 可注射型組織工程骨的構(gòu)建

    注射型組織工程骨由溶液Ⅰ和Ⅱ組成。溶液Ⅰ,為催化劑溶液,其成分為 CaCl2(40 mmol·mL-1)、凝血酶(400 U·mL-1)及 VEGF 和 rhBMP-2 凍干粉用重蒸水溶液組成;溶液Ⅱ?yàn)橐砸蛛拿溉芤喝芙饫w維蛋白原(80 mg·mL-1)。使用時(shí)以雙聯(lián)注射器分別吸入溶液Ⅰ、Ⅱ,注入體內(nèi)后約25 s形成黏稠果凍狀凝膠。rhBMP-2的濃度為2.5 mg·L-1,VEGF的濃度為0.3 mg·L-1。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動物分組、模型的建立及藥物處理

    健康的新西蘭大白兔24只,雌雄不拘,3個(gè)月齡,體質(zhì)量為2.0~2.5 kg,由南昌大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)部提供。隨機(jī)分為A、B、C 3組,每組8只,編號分籠飼養(yǎng)。采用速眠新、氯胺酮和阿托品復(fù)合液肌內(nèi)注射麻醉。麻醉成功后,將動物仰臥固定于兔臺上,術(shù)區(qū)備皮消毒,鋪無菌巾。以雙側(cè)前肢橈骨中段為中心行約3 cm直切口,切開皮膚鈍性分離皮下組織,于肌間隙暴露橈骨,線鋸取骨,連同骨膜切除造成約10 mm節(jié)段骨缺損,缺損區(qū)用無菌干紗布填塞止血,建立兔橈骨節(jié)段性缺損模型。

    A組將FS+VEGF+BMP經(jīng)正常皮膚注射骨缺損處、B組將FS+BMP經(jīng)正常皮膚注射骨缺損處、C組將FS注射骨缺損處,各組根據(jù)骨缺損大小,植入相應(yīng)材料體積約0.5 mL。逐層縫合切口,術(shù)后3 d連續(xù)肌內(nèi)注射青霉素40萬U·d-1。每組均于術(shù)后6、12周各處死4只動物取材(骨缺損處)。

    1.4 大體標(biāo)本觀察

    術(shù)后觀察動物飲食、日?;顒幽芰靶g(shù)后傷口愈合情況。觀察組織工程骨的表面變化、骨痂形成、骨缺損修復(fù)情況及周圍組織反應(yīng)。

    1.5 組織學(xué)觀察

    各組于術(shù)后6、12周分別取4只兔標(biāo)本 (包括植入體、受體界面遠(yuǎn)近端各0.5 cm),小心剝離界面區(qū)組織,所取標(biāo)本置于10%甲醛液中固定24 h,10%硝酸脫鈣2 d,水洗,系列脫水,常規(guī)石蠟包埋,縱切,厚度5 μm,HE染色,光鏡下觀察各組缺損再生性修復(fù)情況。

    1.6 X線檢查

    曝光條件為40 kV,50 mA,0.2 s,距離為60 cm。拍攝兔橈骨正位X線片,觀察術(shù)區(qū)骨修復(fù)情況。阻射密度以同一X線片骨缺損臨近正常骨區(qū)域相同面積皮質(zhì)骨密度為100、相同面積X線片底色設(shè)為0測量的骨缺損阻射密度相對值表示。

    1.7 生物力學(xué)測試

    取A、B組術(shù)后12周骨缺損愈合的尺、橈骨各8根于萬能材料實(shí)驗(yàn)機(jī)上行抗扭轉(zhuǎn)、垂直壓縮及三點(diǎn)彎曲試驗(yàn),計(jì)算機(jī)記錄測試數(shù)據(jù)并繪制力位移曲線,根據(jù)曲線計(jì)算其扭轉(zhuǎn)剛度、壓縮剛度、最大折斷力及抗折彎剛度。C組無骨性愈合標(biāo)本,未行生物力學(xué)檢測。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 一般情況

    術(shù)后1~3 d所有兔精神、飲食稍差,活動少,無畏寒、發(fā)熱征象,全身未見皮疹,手術(shù)切口無明顯紅腫、滲液等。4 d后精神好轉(zhuǎn),飲食正常,活動增加。

    2.2 大體標(biāo)本觀察

    術(shù)后6周A組骨缺損的斷端出現(xiàn)硬度較多的類骨樣組織;B組骨缺損斷端類骨樣生成較少,纖維組織量較多;C組均為較致密的纖維組織。術(shù)后12周A組骨缺損區(qū)已完全修復(fù),新生骨直徑較鄰近宿主骨直徑大小較一致,完全離斷后發(fā)現(xiàn)髓腔已再通(封四圖1A);B組可見骨缺損部位有連續(xù)性新骨生成,但直徑較鄰近宿主骨部分略纖細(xì)(封四圖1B);C組僅在骨缺損斷端見少量新生骨,缺損區(qū)域填充大量纖維組織(封四圖1C)。

    2.3 組織學(xué)觀察

    術(shù)后6周,A、B、C 3組骨缺損處纖維蛋白凝膠均大部分降解吸收。A組新生組織周圍見新生血管豐富,纖維組織下有大量新生骨組織,明顯鈣鹽沉積,可見骨小梁結(jié)構(gòu),部分區(qū)域有髓腔樣結(jié)構(gòu)形成(封四圖2A)。B組新生組織為纖維組織充填,新生血管不如A組豐富,有散在片狀骨小梁結(jié)構(gòu),骨細(xì)胞較多,骨組織較少(封四圖2B)。C組新生組織為纖維組織結(jié)構(gòu),成纖維細(xì)胞豐富,未見成骨(封四圖2C)。術(shù)后12周,A組為成熟骨組織結(jié)構(gòu),骨基質(zhì)豐富,骨細(xì)胞縮小,可見少量破骨細(xì)胞,骨髓腔貫通,可見造血細(xì)胞(封四圖3A)。B組骨組織成熟度較A組稍差,髓腔結(jié)構(gòu)不完整(封四圖3B)。C組仍以纖維結(jié)締組織為主,中間僅見少量島狀或片狀骨組織(封四圖 3C)。

    2.4 X線表現(xiàn)

    術(shù)后6周:A組宿主骨與植入組織之間界面模糊,出現(xiàn)較多骨痂,骨缺損部位出現(xiàn)較多散在的密度增濃影;B組骨斷端出現(xiàn)骨痂量較少,骨痂不連續(xù),密度不高;C組可見清晰骨缺損區(qū),只在截骨斷端有少許骨痂形成。術(shù)后12周:A組骨缺損處的骨痂已完全骨化,直徑與宿主骨的直徑較一致,髓腔貫通。B組缺損區(qū)骨癡密度、數(shù)量增加,但直徑小于斷端宿主骨。C組骨缺損區(qū)依然清晰,部分?jǐn)喽擞不V股L。術(shù)后6、12周骨缺損修復(fù)的X線阻射密度值均為A組>B組>C組(P<0.05)。見表1。

    表1 各組骨缺損分析平均阻射密度值 x±s

    2.5 生物力學(xué)測試

    A組標(biāo)本壓縮、扭轉(zhuǎn)剛度及三點(diǎn)彎曲最大負(fù)荷生物力學(xué)表現(xiàn)均優(yōu)于B組(表2)。

    表2 A、B組術(shù)后12周標(biāo)本壓縮、扭轉(zhuǎn)剛度及三點(diǎn)彎曲最大負(fù)荷的比較 ±s

    表2 A、B組術(shù)后12周標(biāo)本壓縮、扭轉(zhuǎn)剛度及三點(diǎn)彎曲最大負(fù)荷的比較 ±s

    *P<0.05與B組比較。

    組別 n 壓縮剛度(N·m-1) 扭轉(zhuǎn)剛度(N·m-1) 最大負(fù)荷/N A 組 8 (305.32±4.78)×103* (89.41±1.64)×10-3*175.49±8.32*B 組 8 (265.41±5.63)×103 (75.39±1.75)×10-3 145.81±9.45

    3 討論

    BMP是一種高效的骨誘導(dǎo)生長因子,它能誘導(dǎo)血管周圍未分化間充質(zhì)細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化為成軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞,促進(jìn)骨細(xì)胞的生長增殖,進(jìn)而合成膠原,形成鈣化的骨組織,它可以促進(jìn)原位或異位骨的形成[3]。 研究[4]表明,BMP-2 是促進(jìn)骨形成和誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化最重要的細(xì)胞外信號分子之一,BMP-2/Smads/Runx2/Osterix信號通路和BMP-2/Smads/Msx2/Osterix信號通路是骨組織形成過程中間充質(zhì)細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞及骨細(xì)胞外基質(zhì)合成、分泌所必需的。BMP-2通過激活Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)節(jié)成骨基因轉(zhuǎn)錄而發(fā)揮其成骨作用。VEGF具有強(qiáng)的促血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂的作用,增加血管通透性及血管維持功能,有利于毛細(xì)血管的生成,為局部材料的降解及新骨的形成創(chuàng)造最佳的微環(huán)境;還能提高成骨細(xì)胞的活性和軟骨內(nèi)成骨,從而促進(jìn)骨形成,并且血管內(nèi)皮細(xì)胞和成骨細(xì)胞之間還存在生長因子分泌和旁分泌的相互關(guān)系[5]。有研究發(fā)現(xiàn),BMP和VEGF在骨愈合中對成骨有相互依賴及調(diào)控的作用[6]。但VEGF和BMP在體內(nèi)半衰期短,直接注人體內(nèi)易降解,故外源性單純給予上述蛋白的治療效果有限[7]。FS是一種具有多向生物活性的生物蛋白制劑,由纖維蛋白原、凝血酶及其他生物活性因子組成,具有止血、趨化及促細(xì)胞有絲分裂等特性,氯化鈣與抑肽酶是影響纖維蛋白凝固穩(wěn)定性的2種重要成分[8-9]。FS具有多孔的三維立體結(jié)構(gòu),細(xì)胞容易貼附,利于營養(yǎng)物質(zhì)的滲透及代謝產(chǎn)物的排出;還有良好的骨傳導(dǎo)性及可降解可塑性,容易與其他生物活性材料制成注射劑,操作十分簡便。

    筆者的前期實(shí)驗(yàn)研究表明,F(xiàn)S復(fù)合VEGF和BMP具有良好的誘導(dǎo)異位成骨的作用,其機(jī)制可能是FS天然的網(wǎng)狀微觀結(jié)構(gòu)有助于BMP、VEGF的附著和BMP、VEGF與靶細(xì)胞接觸,利于BMP和VEGF的緩慢釋放。因此,隨著FS的降解,在植入材料的周圍形成了一個(gè)BMP濃度梯度,增加了BMP和VEGF與靶細(xì)胞作用的時(shí)間,并且FS作為生物性材料,其內(nèi)部良好的微環(huán)境及大分子蛋白可保護(hù)BMP和VEGF不發(fā)生非特異性蛋白水解,從而使其骨誘導(dǎo)活性及促進(jìn)增殖活性得以最大限度地發(fā)揮。本研究在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,利用FS成形前各成分為液體的特性,復(fù)合BMP和VEGF,在體外構(gòu)建出可注射狀的組織工程骨用于修復(fù)兔橈骨缺損。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,從組織學(xué)方面觀察,術(shù)后6周A組新生組織周圍見豐富的新生血管,纖維組織下有大量新生骨組織,明顯鈣鹽沉積,可見骨小梁結(jié)構(gòu),部分區(qū)域有髓腔樣結(jié)構(gòu)形成。這表明本方法構(gòu)建的組織工程骨體內(nèi)植入后有較好的促細(xì)胞增殖作用和血管化作用。而B組新生血管不如A組豐富,有散在片狀骨小梁結(jié)構(gòu),骨細(xì)胞較多,骨組織較少。C組僅形成纖維組織,未見骨細(xì)胞,新生血管較少。表明VEGF促進(jìn)新生血管組織的生長,一方面給細(xì)胞帶來豐富的營養(yǎng),可促進(jìn)細(xì)胞的成活和增殖,另一方面也利于其他部位的間充質(zhì)細(xì)胞聚積于骨缺損部位。同樣,在X線檢測和生物力學(xué)檢測方面,A組修復(fù)兔橈骨缺損的效果明顯優(yōu)于B組及C組。

    綜上所述,F(xiàn)S復(fù)合BMP和VEGF修復(fù)骨缺損的效果理想,明顯優(yōu)于只復(fù)合BMP及單純應(yīng)用FS的效果,說明VEGF+BMP促進(jìn)骨生長具有協(xié)同作用。同時(shí),這種新型可注射型組織工程骨材料有望在臨床得到廣泛應(yīng)用。

    [1] Kanczler J M,Ginty P J,White L,et al.The effect of the delivery of vascular endothelial growth factor and bone morphogenic protein-2 to osteoprogenitor cell populations on bone formation[J].Biomaterials,2010,31(6):1242-1250.

    [2] 李建飛,肖裕華,李紹琴,等.纖維蛋白膠復(fù)合VEGF和BMP誘導(dǎo)異位成骨的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué),2010,11(7):8-10.

    [3] Srouji S,Ben David D,Lotan R,et al.Slow-release human recombinant bone morphogenetic protein-2 embedded within electrospun scaffolds for regeneration of bone defect:in vitro and in vivo evaluation[J].Tissue Eng Part A,2011,17(3/4):269-277.

    [4] 符來想,程迅生.負(fù)載BMP-2組織工程骨修復(fù)骨缺損的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2013,19(4):590-593.

    [5] Kaigler D,Wang Z,Horger K,et al.VEGF scaffolds enhance angiogenesis and bone regeneration in irradiated osseous defects[J].J Bone Miner Res,2006,21:735-744.

    [6] Kempen D H,Lu L,Heijink A,et al.Effect of local sequential VEGF and BMP-2 delivery on ectopic and orthotopic bone regeneration[J].Biomaterials,2009,30(14):2816-2825.

    [7] 瞿向陽,蔣電明,安洪,等.復(fù)合 rhVEGF+rhBMP-2促進(jìn)犬異體脫蛋白骨關(guān)節(jié)磷骨水泥的成骨研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,32(5):484-488.

    [8] Le G L,Go E,Ag E,et al.Influence of calcium chloride and aprotinin in the in vivo biological performance of a composite combining biphasic calcium phosphate granules and fibrin sealant[J].J Mater Sci Mater Med,2007,18(8):1489-1495.

    [9] Le Nihouannen D,Saffarzadeh A,Aguado E,et al.Osteogenic properties of calcium phosphate ceramics and fibrin glue based composites[J].J Mater Sci Mater Med,2007,18(2):225-235.

    猜你喜歡
    骨組織斷端成骨
    全子宮切除術(shù)后陰道斷端裂開:病例分析及文獻(xiàn)回顧
    經(jīng)典Wnt信號通路與牙周膜干細(xì)胞成骨分化
    子宮切除術(shù)后陰道斷端裂開的預(yù)后因素:巢式病例對照研究
    硅+鋅+蠶絲 印度研制出促進(jìn)骨組織生成的新型材料
    山東陶瓷(2019年2期)2019-02-17 13:08:24
    鈦夾板應(yīng)用于美學(xué)區(qū)引導(dǎo)骨組織再生1例
    糖尿病大鼠Nfic與成骨相關(guān)基因表達(dá)的研究
    液晶/聚氨酯復(fù)合基底影響rBMSCs成骨分化的研究
    長期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素對大鼠骨組織中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL表達(dá)的影響
    30例Ⅰ型成骨不全患者股骨干骨折術(shù)后康復(fù)護(hù)理
    捆扎鋼絲結(jié)合縫線引導(dǎo)指屈肌腱斷端回縮的臨床應(yīng)用
    av中文乱码字幕在线| 中国美女看黄片| 亚洲国产色片| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久久久国产网址| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 悠悠久久av| 精品一区二区免费观看| 欧美激情在线99| 麻豆乱淫一区二区| 欧美高清成人免费视频www| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 插逼视频在线观看| 99热网站在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲久久久久久中文字幕| 不卡视频在线观看欧美| 国产三级在线视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产成人aa在线观看| 天堂网av新在线| 九九在线视频观看精品| 亚洲美女视频黄频| 六月丁香七月| 国产精品永久免费网站| 国产精品国产高清国产av| 无遮挡黄片免费观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲成人久久爱视频| 中文字幕久久专区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 日韩欧美三级三区| 日本一二三区视频观看| 久久久a久久爽久久v久久| 国产视频一区二区在线看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 色播亚洲综合网| 国产精品伦人一区二区| 看免费成人av毛片| 在线观看一区二区三区| 亚洲五月天丁香| 晚上一个人看的免费电影| 国产免费男女视频| 婷婷色综合大香蕉| 欧美zozozo另类| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国内精品一区二区在线观看| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 久久亚洲国产成人精品v| 大型黄色视频在线免费观看| 淫秽高清视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 特级一级黄色大片| eeuss影院久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产v大片淫在线免费观看| 久久久久久久久久成人| 五月伊人婷婷丁香| 卡戴珊不雅视频在线播放| 如何舔出高潮| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 婷婷亚洲欧美| 免费av毛片视频| 亚洲高清免费不卡视频| 国产高清三级在线| 免费在线观看影片大全网站| 欧美性猛交黑人性爽| 国产美女午夜福利| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲性夜色夜夜综合| 少妇熟女欧美另类| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 欧美一区二区精品小视频在线| 国产黄a三级三级三级人| 夜夜爽天天搞| 久久人人爽人人片av| 精品一区二区三区av网在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 久久精品国产自在天天线| 99热这里只有是精品在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 欧美中文日本在线观看视频| 校园春色视频在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产av麻豆久久久久久久| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产午夜福利久久久久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产成人91sexporn| 欧美一区二区亚洲| 人妻少妇偷人精品九色| 久久久久精品国产欧美久久久| 少妇熟女aⅴ在线视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久午夜福利片| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 成人午夜高清在线视频| 日本三级黄在线观看| 一级黄色大片毛片| 国产一区亚洲一区在线观看| 最近在线观看免费完整版| av专区在线播放| 日韩精品青青久久久久久| 舔av片在线| 男人狂女人下面高潮的视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲av.av天堂| 国产成人影院久久av| 午夜精品一区二区三区免费看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 精品久久国产蜜桃| 啦啦啦啦在线视频资源| 看十八女毛片水多多多| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久久久性生活片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 婷婷六月久久综合丁香| 禁无遮挡网站| 97超碰精品成人国产| 国产精品无大码| 性插视频无遮挡在线免费观看| 天堂影院成人在线观看| 我的老师免费观看完整版| 久久久久久久午夜电影| 久久草成人影院| 一级黄色大片毛片| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久久性生活片| 亚洲色图av天堂| av免费在线看不卡| 精品欧美国产一区二区三| 真人做人爱边吃奶动态| 久久精品国产自在天天线| 高清毛片免费观看视频网站| 免费观看精品视频网站| 亚洲国产精品sss在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 露出奶头的视频| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 久久久久免费精品人妻一区二区| 91av网一区二区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美一区二区亚洲| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 两个人的视频大全免费| 91在线精品国自产拍蜜月| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 男女边吃奶边做爰视频| 中出人妻视频一区二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 日韩强制内射视频| 高清毛片免费看| 久久精品91蜜桃| 色综合站精品国产| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲成人av在线免费| 99热只有精品国产| 色视频www国产| 成年版毛片免费区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 校园春色视频在线观看| ponron亚洲| 校园人妻丝袜中文字幕| 十八禁国产超污无遮挡网站| 午夜福利18| 性插视频无遮挡在线免费观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲图色成人| 人妻夜夜爽99麻豆av| 偷拍熟女少妇极品色| av黄色大香蕉| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲精品国产av成人精品 | 丝袜美腿在线中文| 亚洲三级黄色毛片| av国产免费在线观看| 99久国产av精品国产电影| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 精品日产1卡2卡| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久精品94久久精品| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲精品亚洲一区二区| 99riav亚洲国产免费| 97超碰精品成人国产| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品一区www在线观看| 看免费成人av毛片| 久久久久久久午夜电影| 中文在线观看免费www的网站| 嫩草影视91久久| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲三级黄色毛片| 久久这里只有精品中国| 亚洲成a人片在线一区二区| 波野结衣二区三区在线| 99九九线精品视频在线观看视频| 性欧美人与动物交配| 久久亚洲国产成人精品v| 22中文网久久字幕| 热99在线观看视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品无大码| 亚洲七黄色美女视频| 中文字幕免费在线视频6| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲av成人av| 一区二区三区四区激情视频 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 俺也久久电影网| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美人与善性xxx| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲av免费在线观看| 日本一二三区视频观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | 欧美性感艳星| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品一区二区免费欧美| 国内精品一区二区在线观看| 男人舔奶头视频| 国产精品,欧美在线| 99riav亚洲国产免费| 成人亚洲精品av一区二区| 色综合色国产| 国产 一区精品| 国产高清有码在线观看视频| 国产视频内射| 中文字幕av在线有码专区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美色欧美亚洲另类二区| 久久久久久久久久成人| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 一个人免费在线观看电影| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产成人91sexporn| 99久久精品国产国产毛片| 中文字幕久久专区| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美一区二区亚洲| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日本成人三级电影网站| 哪里可以看免费的av片| 99热6这里只有精品| 国产精品99久久久久久久久| 日韩精品有码人妻一区| 日本一二三区视频观看| 亚洲成av人片在线播放无| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产成人aa在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 精品人妻视频免费看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 一区二区三区免费毛片| 直男gayav资源| 国产精品久久久久久久电影| 婷婷六月久久综合丁香| 淫秽高清视频在线观看| 如何舔出高潮| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 两个人的视频大全免费| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 校园春色视频在线观看| 久久精品91蜜桃| 久久精品影院6| 久久久色成人| 一本精品99久久精品77| 欧美最新免费一区二区三区| 我的女老师完整版在线观看| 欧美在线一区亚洲| 欧美国产日韩亚洲一区| 色综合色国产| 亚洲av免费在线观看| 最近手机中文字幕大全| 久久人妻av系列| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 插阴视频在线观看视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产乱人视频| 欧美一区二区亚洲| 日本三级黄在线观看| 国产高潮美女av| 国产精品精品国产色婷婷| 午夜精品国产一区二区电影 | 天天躁日日操中文字幕| 久久久精品大字幕| 永久网站在线| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲久久久久久中文字幕| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲国产欧美人成| 久久草成人影院| 精品熟女少妇av免费看| 成人特级av手机在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲无线在线观看| 91精品国产九色| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 嫩草影院精品99| 精品日产1卡2卡| 久久精品91蜜桃| 欧美日韩乱码在线| 国产色爽女视频免费观看| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲精品色激情综合| 国产精品伦人一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 长腿黑丝高跟| 免费在线观看成人毛片| 久久久欧美国产精品| 日韩精品青青久久久久久| 嫩草影院新地址| 亚洲av电影不卡..在线观看| av在线蜜桃| 国产高清有码在线观看视频| 国产精品久久久久久久久免| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 精品人妻视频免费看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久中文看片网| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 日韩精品中文字幕看吧| 乱人视频在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品久久久久久久久av| 老司机福利观看| av在线蜜桃| 岛国在线免费视频观看| 国产精品野战在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精品女同一区二区软件| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 免费看美女性在线毛片视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲av五月六月丁香网| 五月玫瑰六月丁香| 能在线免费观看的黄片| 午夜视频国产福利| 成人三级黄色视频| 国模一区二区三区四区视频| 成人美女网站在线观看视频| 国产午夜福利久久久久久| 久久久精品94久久精品| 色视频www国产| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 日韩三级伦理在线观看| 最近在线观看免费完整版| 免费看光身美女| 国产成人福利小说| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 22中文网久久字幕| 国产精品久久视频播放| 可以在线观看毛片的网站| 国产高清激情床上av| 六月丁香七月| 波多野结衣巨乳人妻| 深夜a级毛片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 特级一级黄色大片| 色哟哟·www| 欧美国产日韩亚洲一区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 天天躁日日操中文字幕| 欧美潮喷喷水| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲五月天丁香| 在线国产一区二区在线| 亚洲美女视频黄频| 美女高潮的动态| 永久网站在线| 国产精品精品国产色婷婷| 国产 一区 欧美 日韩| 无遮挡黄片免费观看| 99久国产av精品国产电影| 国产成人freesex在线 | 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲三级黄色毛片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 一个人免费在线观看电影| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 国产淫片久久久久久久久| av天堂中文字幕网| 一级毛片久久久久久久久女| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 悠悠久久av| 一区二区三区四区激情视频 | 成人一区二区视频在线观看| 国产一区二区三区av在线 | 中文字幕精品亚洲无线码一区| 一级黄色大片毛片| 午夜亚洲福利在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 香蕉av资源在线| 精品久久久久久成人av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲成a人片在线一区二区| 女同久久另类99精品国产91| 欧美激情在线99| 国产欧美日韩精品一区二区| 最新中文字幕久久久久| 最新在线观看一区二区三区| 国产成人精品久久久久久| 午夜亚洲福利在线播放| av黄色大香蕉| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 最近手机中文字幕大全| 亚洲av五月六月丁香网| 国产一区二区激情短视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 97超视频在线观看视频| 亚洲国产色片| 日本成人三级电影网站| 99国产精品一区二区蜜桃av| 日韩欧美在线乱码| 亚洲18禁久久av| 内地一区二区视频在线| 成人三级黄色视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 日韩欧美 国产精品| 精品久久久久久久末码| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 欧美性感艳星| 99久久精品一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 中文字幕免费在线视频6| 日韩欧美精品v在线| a级毛色黄片| 日本免费一区二区三区高清不卡| 一区二区三区免费毛片| 免费观看精品视频网站| 久久中文看片网| 在线播放国产精品三级| 在线观看一区二区三区| 麻豆乱淫一区二区| 大型黄色视频在线免费观看| 久久九九热精品免费| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产亚洲精品久久久com| 全区人妻精品视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产伦在线观看视频一区| 精品久久久久久久久av| 久久人妻av系列| 99久久精品热视频| 国产91av在线免费观看| 日本与韩国留学比较| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产成人a∨麻豆精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 少妇熟女欧美另类| 黄色配什么色好看| 18禁在线播放成人免费| 91在线观看av| 亚洲高清免费不卡视频| 日韩人妻高清精品专区| 午夜精品国产一区二区电影 | 综合色av麻豆| 亚洲av二区三区四区| av女优亚洲男人天堂| 亚洲欧美日韩无卡精品| 男女那种视频在线观看| 深爱激情五月婷婷| 熟女电影av网| 国产精品一二三区在线看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 日本爱情动作片www.在线观看 | 麻豆乱淫一区二区| 久久久成人免费电影| 美女被艹到高潮喷水动态| 日本爱情动作片www.在线观看 | 麻豆精品久久久久久蜜桃| 最新中文字幕久久久久| 亚洲丝袜综合中文字幕| 99国产精品一区二区蜜桃av| 我的老师免费观看完整版| 男人狂女人下面高潮的视频| 日韩三级伦理在线观看| 伦精品一区二区三区| 一本久久中文字幕| 亚洲精品一区av在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 丰满乱子伦码专区| 免费无遮挡裸体视频| 国产真实乱freesex| 深夜a级毛片| av在线老鸭窝| 欧美日韩乱码在线| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美3d第一页| 亚洲18禁久久av| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 最近手机中文字幕大全| 无遮挡黄片免费观看| 男女那种视频在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品一区二区三区人妻视频| 如何舔出高潮| 国产黄a三级三级三级人| 欧美激情久久久久久爽电影| 简卡轻食公司| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 丝袜喷水一区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久精品91蜜桃| 男人狂女人下面高潮的视频| 欧美精品国产亚洲| 大香蕉久久网| 热99re8久久精品国产| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美高清成人免费视频www| 欧美成人一区二区免费高清观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日韩欧美国产在线观看| 18禁在线播放成人免费| 国产午夜福利久久久久久| 久久草成人影院| 久久精品影院6| 99久久九九国产精品国产免费| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 黄色欧美视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 免费看日本二区| 99在线人妻在线中文字幕| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲人与动物交配视频| 久久精品国产清高在天天线| 国产精品99久久久久久久久| 午夜福利视频1000在线观看| 国产乱人视频| 成人二区视频| 日韩精品有码人妻一区| 九色成人免费人妻av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久这里只有精品中国| 黄色欧美视频在线观看| 久久久久久大精品| 一个人看视频在线观看www免费| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 中国国产av一级| 免费av观看视频| 天美传媒精品一区二区| 色综合色国产| 春色校园在线视频观看| 成人av一区二区三区在线看| 久久久久性生活片| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产在视频线在精品| 波多野结衣高清作品| 国产精品人妻久久久久久| 成人午夜高清在线视频| 熟女电影av网| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 男女啪啪激烈高潮av片| 一本精品99久久精品77| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产高潮美女av| 99久久成人亚洲精品观看| 日本免费a在线| 寂寞人妻少妇视频99o| 九九爱精品视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品一区二区性色av| 亚洲美女搞黄在线观看 | 伦理电影大哥的女人| 亚洲va在线va天堂va国产| 中文字幕av成人在线电影| 久久久国产成人精品二区| 看非洲黑人一级黄片| 欧美国产日韩亚洲一区| 日韩制服骚丝袜av| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品人妻久久久影院| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲精品国产av成人精品 | 亚洲av免费高清在线观看|