豬偽狂犬病的診斷及其防制

劉繼漢 王小全

摘 要：豬偽狂犬病是由偽狂犬病毒引起的一種高度接觸性傳染病，可引起仔豬大量發(fā)病死亡，母豬流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙，育肥豬生長發(fā)育緩慢等，嚴(yán)重危害豬群健康，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。為了提高豬偽狂犬病的診斷及防制效果，本文主要從病原學(xué)、流行病學(xué)、發(fā)病機(jī)理、臨床癥狀、病理變化、診斷和防制七個(gè)方面對豬偽狂病進(jìn)行了闡述總結(jié)。

關(guān)鍵詞：豬偽狂病；診斷；防治

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies vims，PRV）引起的一種高度接觸性，以繁殖障礙為主要癥狀的傳染性疾病。20日齡以下的仔豬感染率和死亡率可達(dá)100%，成年豬在感染后多數(shù)耐過，不發(fā)病呈現(xiàn)隱性感染過程，但是，長期帶毒排毒。偽狂犬病最早發(fā)生于美國， 60年代之前，豬被PRV感染后的癥狀比較溫和，在養(yǎng)豬業(yè)中沒有造成重大經(jīng)濟(jì)損失。然而在60-70年代，出現(xiàn)了PRV的強(qiáng)毒株，豬場暴發(fā)PR的數(shù)量顯著增加，并且各種日齡的豬都可以被感染，而且癥狀和造成的損失明顯加劇?，F(xiàn)在全球范圍內(nèi)都有PR的流行。近30年以來，在我國PR疫情也頻繁暴發(fā)，不僅對我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，還嚴(yán)重制約著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。

一、病原學(xué)

1.偽狂犬病病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)

PRV屬于皰疹病毒科（Herpesviridae）甲型皰疹病毒亞科（Alphaheresvae）的豬皰疹病毒1型（Suls Herpes 1），屬于DNA病毒。病毒粒子呈橢圓或圓形，有囊膜的成熟病毒粒子直徑約為180nm，沒有囊膜的粒子直徑大約為110—150nm。囊膜表面有呈放射排列的纖突結(jié)構(gòu)，長大約8—10nm，DNA的分子量為87×106。成熟的病毒粒子分四層，最外層是脂質(zhì)雙層囊膜，囊膜上鑲嵌著病毒編碼的蛋白，多為糖蛋白。病毒囊膜內(nèi)面是一層非晶體蛋白樣結(jié)構(gòu)。

2.偽狂犬病毒培養(yǎng)特性

PRV是一種具有泛嗜性的病毒，他能在多種細(xì)胞內(nèi)增殖，如豬腎傳代細(xì)胞（PK-15）、牛腎、兔腎、猴腎細(xì)胞和羊、犬的腎細(xì)胞，雞胚成纖維細(xì)胞、Hela細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞等。主要差別在敏感度不同，在豬腎和兔腎細(xì)胞上最為敏感。在雞胚和多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞上形成嗜酸性包涵體，在豬腎、兔腎細(xì)胞形成蝕斑。

3.偽狂犬病毒理化特性

偽狂犬病毒對熱具有一定的抵抗力。在44.5℃時(shí)5h仍有活性，在25℃于干草、樹枝、食物中可存活10-30d，-8℃可存活46d，在肉中可存活5周以上。在60℃條件下可存活30-60min，在80℃條件下可存活3min，在100℃條件下可存活1min。病毒對外界抵抗力較強(qiáng)，在污染的豬舍能存活1個(gè)多月，日光直射6-8h可使病毒失活。對脂溶劑如丙酮、氯仿、乙醚、酒精等高度敏感，對消毒劑無抵抗力。應(yīng)用0.5%次氯酸鈉、3%酚類10分鐘就能使病毒滅活。碘酊、季胺鹽及酚類復(fù)合物能迅速有效地殺滅PRV。經(jīng)過6小時(shí)0.6%Na0H溶液浸泡還不能使PRV完全滅活。PRV的最適PH值為6-8，過酸或過堿的環(huán)境能使其很快滅活。

二、流行病學(xué)

PRV的易感動(dòng)物種類較多，羊、犬、牛、豬、貓、兔、鼠、水貂、熊、狐等動(dòng)物都能在自然條件下感染發(fā)病。各日齡的豬都易感，是PRV病毒的天然宿主、貯存者和傳染源。人對PRV無易感性。PRV可以通過交配、精液、母體胎盤等途徑垂直傳播給子體，而母體的免疫球蛋白不能夠通過胎盤屏障，所以PRV病毒對子體的感染是致命的。PRV也可以水平傳播，主要經(jīng)消化道和呼吸道傳播，病毒可通過直接接觸傳播，更容易間接傳播。PRV可從鼻分泌物和唾液中排出在空氣中形成氣溶膠，使易感豬群受到感染。也可通過其他媒介如靴子、衣服、飼料、運(yùn)輸工具等傳播。被污染的飼料、帶毒的鼠、羊等動(dòng)物也可以傳播該病。

該病的發(fā)生具有一定的季節(jié)性，多在寒冷的季節(jié)發(fā)生，但其他季節(jié)也時(shí)有發(fā)生，因?yàn)榈蜏馗欣谠摬《镜拇婊睢?/p>

三、發(fā)病機(jī)理

病毒首先在扁桃體、咽部上皮組織內(nèi)增殖，然后通過嗅神經(jīng)和舌咽神經(jīng)等到達(dá)脊髓，又進(jìn)一步增殖后擴(kuò)散到整個(gè)大腦，引起神經(jīng)細(xì)胞感染，導(dǎo)致腦和脊髓炎癥。并且通過人工感染家兔證實(shí)，該病毒系沿神經(jīng)干傳播。

在自然條件下，PRV感染的最初部位是咽部上皮和扁桃體，隨后病毒由淋巴管擴(kuò)散至局部淋巴結(jié)，當(dāng)病毒被舌咽神經(jīng)、三叉神經(jīng)和嗅神經(jīng)末梢攝入后，有囊膜的病毒粒子或者無囊膜的核衣殼沿軸突逆行至三叉神經(jīng)，并至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，然后在腦橋和脊髓中復(fù)制，再侵入小腦和大腦。

偽狂犬病毒還可以通過病變局部白細(xì)胞的攝入或細(xì)胞表面的吸附作用，然后由白細(xì)胞經(jīng)血液循環(huán)將病毒帶到機(jī)體各個(gè)部位，尤其是孕畜的胎盤組織，然后侵入胎兒，導(dǎo)致流產(chǎn)或產(chǎn)死胎。

四、臨床癥狀

動(dòng)物種類、年齡和偽狂犬病毒毒株毒力不同，其臨床癥狀也有所差異。PRV主要嗜侵神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，不同日齡的生豬感染后呈現(xiàn)的癥狀存在差異，哺乳仔豬和斷奶仔豬常見神經(jīng)癥狀，育肥豬和成年豬常見呼吸癥狀。

1.仔豬臨床癥狀

仔豬潛伏期較短，感染后的癥狀最重，15日齡內(nèi)仔豬多屬于最急性型，死亡率可達(dá)100%，臨床表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀不明顯，出現(xiàn)高熱、流涎、食欲廢絕、嘔吐、腹瀉、呼吸困難、精神沉郁、肌肉震顫等，接著出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)機(jī)能失調(diào)、間歇性抽搐、昏迷、衰竭死亡等。隨日齡增加，仔豬的死亡率逐漸下降。

2.成年豬臨床癥狀

成年豬常不發(fā)生死亡，主要表現(xiàn)為增重減緩，耐過后呈現(xiàn)長期隱性感染帶毒和排毒，成為本病的主要傳染源。育肥豬的潛伏期一般為3-5天，表現(xiàn)為發(fā)育障礙和增重減緩，死亡率一般不超過3%，發(fā)生混合感染或繼發(fā)感染時(shí)，死亡率較高。種豬主要表現(xiàn)不育，母豬臨床癥狀體溫升高至40.5℃～41℃，食欲不振，妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎、弱仔，并且以產(chǎn)死胎為主；在妊娠初期，母豬可在感染20天左右發(fā)生流產(chǎn)，在妊娠后期，常發(fā)生母豬產(chǎn)死胎、木乃伊胎或者產(chǎn)出弱胎。公豬常發(fā)生睪丸腫脹、萎縮等癥狀，精液品質(zhì)下降。

五、病理變化

該病常無特征性病變，眼觀一般看不到病變或病變很輕微。一般可見漿液性纖維壞死性鼻炎，但只有劈開頭骨，暴露整個(gè)鼻腔后才能觀察到。剖檢上呼吸道可見扁桃體壞死，淋巴結(jié)腫脹出血，漿液性纖維化壞死性鼻炎，病變可延至喉氣管部；在下呼吸道可見肺水腫，散在性小葉性肺炎。缺乏被動(dòng)免疫的幼齡豬可見胃腸粘膜的卡他性或出血性炎癥，肝臟和脾以及漿膜面下可見散在的黃白色壞死灶。中樞神經(jīng)系統(tǒng)剖檢癥狀表現(xiàn)為腦膜充血、出血、水腫，腦脊髓液增多等，彌散性非化膿性腦膜腦炎是其主要組織學(xué)病變，有明顯的血管套及膠質(zhì)細(xì)胞壞死。通過腦神經(jīng)細(xì)胞、鼻咽粘膜、脾及淋巴結(jié)的淋巴細(xì)胞的鏡檢可見核內(nèi)酸性包涵體。流產(chǎn)的母豬有輕微的子宮內(nèi)膜炎，子宮壁水腫。檢查胎盤，可見壞死性胎盤炎。感染胎兒或新生豬的肝臟和脾臟一般有壞死灶，肺和扁桃體有出血性壞死灶。

六、豬偽狂犬病的診斷

因PR無特征性剖檢變化，給該病的診斷帶來了難度。臨床中必須結(jié)合流行病學(xué)，根據(jù)發(fā)病豬的主要臨床癥狀做初步診斷，并采用實(shí)驗(yàn)室診斷方法進(jìn)行確診。同時(shí)還要注意與流行性乙型腦炎病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、細(xì)小病毒等病因引發(fā)的母豬繁殖障礙相區(qū)別。

1.臨床檢查與病理組織學(xué)檢查

成年豬沒有明顯癥狀，母豬僅表現(xiàn)流產(chǎn)或產(chǎn)死胎，仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，肌肉震顫，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)四肢劃水樣運(yùn)動(dòng)，體溫升高達(dá)41℃～42℃。取PR病例的腦和脊髓做成組織切片，HE染色后觀察呈現(xiàn)非化膿性腦炎變化。在神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞可檢出A型核內(nèi)包涵體。

2.病毒分離和鑒定

采集患病動(dòng)物的腦組織和扁桃體組織，用磷酸鹽緩沖液（PBS）制成10%懸液，經(jīng)無菌生理鹽水稀釋后接種到豬腎傳代細(xì)胞（PK-15和IBRS-2）或雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）等敏感細(xì)胞。接種后24-72h內(nèi)觀察是否有細(xì)胞病變，若無明顯細(xì)胞病變，則再盲傳3代后觀察。將病變細(xì)胞用HE染色，判定的標(biāo)準(zhǔn)是鏡檢時(shí)是否有嗜酸性的核內(nèi)包涵體。從敏感性和特異性上來考慮，PRV的分離常常被認(rèn)為是該病診斷的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”。

3.兔體接種試驗(yàn)

由于兔子對PRV強(qiáng)毒最敏感，因此，除接種細(xì)胞觀察細(xì)胞病變外，還可以用直接將病料接種家兔這一種快速、準(zhǔn)確的診斷方法。具體方法是將病毒懸液經(jīng)過10min離心（2000r/min），然后取2ml上清液經(jīng)過肌肉或腹側(cè)皮下接種家兔，通常36～48h內(nèi)會(huì)在注射部位出現(xiàn)劇癢，病兔啃咬注射部位皮膚，導(dǎo)致皮膚脫毛、破皮和出血，繼之出現(xiàn)四肢麻痹，臥地不起，最后角弓反張，抽搐而亡，可以診斷為PR。

4.血清學(xué)診斷

（1）中和試驗(yàn)。血清中和試驗(yàn)又稱為微量血清中和試驗(yàn)，是病毒檢測的經(jīng)典方法之一，也是大多數(shù)國家檢測偽狂犬病的法定方法之一。該方法敏感性高、特異性強(qiáng)，因此被列為世界動(dòng)物衛(wèi)生組織法定的鑒定偽狂犬病毒的診斷方法。

（2） 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（常稱ELISA）具有快速、簡便、敏感、特異、可靠性好的特點(diǎn)，目前已成為國際上檢測豬PR的常規(guī)方法之一。這種方法具有特異性強(qiáng)、敏感性高的優(yōu)點(diǎn)，3～4h內(nèi)就可以得出試驗(yàn)結(jié)果，也適于大批量樣品的檢測，廣泛用于偽狂犬病的診斷。目前國際上有各種商品化ELISA檢測試驗(yàn)盒。

由于PRV存在gC、gE、gG等多個(gè)非必需糖蛋白基因，缺失這些基因的病毒突變株不會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的糖蛋白，同時(shí)病毒的增殖與免疫原性也不會(huì)受到影響。基因缺失疫苗免疫動(dòng)物后，機(jī)體將不會(huì)產(chǎn)生針對缺失蛋白的抗體。根據(jù)這一原理，自然感染野毒的血清學(xué)陽性豬與免疫豬可通過ELISA方法分開。

5.PCR診斷

PCR診斷是實(shí)驗(yàn)室主要診斷技術(shù)的一種，有敏感性高、特異性強(qiáng)、快速、簡便等優(yōu)點(diǎn)。采集患病動(dòng)物的鼻咽拭子或組織病料等材料，處理后擴(kuò)增豬偽狂犬病病毒的基因進(jìn)行確診。PCR與病毒分離鑒定相比，具有快速、敏感、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，也適用于大批量樣品的檢測。但試驗(yàn)的進(jìn)行需要較高的技術(shù)和設(shè)備支持，目前在我國基層獸醫(yī)單位推廣還存在困難。

七、豬偽狂病的防制

要控制偽狂犬病，必須提高管理，加強(qiáng)生物安全措施。比如：堅(jiān)持全進(jìn)全出制度、加強(qiáng)引種檢疫和日常監(jiān)測、嚴(yán)格進(jìn)行飼養(yǎng)管理及人員車輛流通管理、搞好環(huán)境衛(wèi)生、實(shí)施消毒及滅鼠工作等。主要包括以下幾個(gè)方面：

1.堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，培育健康種豬群

實(shí)行自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出、培育健康種豬群是豬場控制各種傳染性疾病最為有效的措施之一。新引進(jìn)的后備豬以及精液必須來自PRV野毒感染陰性豬場，并且預(yù)先經(jīng)過檢測PRV gE抗體為陰性。

2.加強(qiáng)疫苗免疫，制定科學(xué)的免疫程序

在豬偽狂犬病呈地方性流行的地區(qū)，實(shí)施廣泛的疫苗免疫接種。根據(jù)當(dāng)?shù)貍慰袢×餍星闆r制定科學(xué)的免疫程序。

3.定期檢測，及時(shí)淘汰野毒感染陽性豬

基因缺失苗的成功研制對該病的防制極為有利，借助ELISA試劑盒能鑒別接種疫苗的豬和受野毒感染的豬，從而能及時(shí)淘汰野毒感染豬。注射基因缺失苗的繁殖群每半年檢測一次，引種（包括精液）要來自偽狂犬病陰性豬場，新補(bǔ)充的后備豬隔離2周后檢測一次，野毒抗體陽性豬及時(shí)隔離淘汰。經(jīng)過2～3年的檢測淘汰，高陽性率豬場可轉(zhuǎn)成低陽性率豬場或陰性豬場。同時(shí)，可以了解豬群注射疫苗后后的免疫效果和野毒感染情況，對修訂豬群免疫程序具有重要意義。

4.加強(qiáng)生物安全防護(hù)措施

國內(nèi)外對于該病的凈化及防制經(jīng)驗(yàn)表明，只依靠免疫接種是不能夠凈化及防制豬偽狂犬病的，必須進(jìn)行監(jiān)測和淘汰陽性豬只，并結(jié)合嚴(yán)格的生物安全措施，才能有效防制該病。如嚴(yán)格控制人員出入，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，定期監(jiān)測，及時(shí)淘汰發(fā)病豬，選用高效消毒劑對豬舍、圈欄進(jìn)行定期消毒，并對養(yǎng)殖場內(nèi)外環(huán)境、設(shè)施器械、飼養(yǎng)用具、交通工具等進(jìn)行消毒；禁止在場內(nèi)飼養(yǎng)它種動(dòng)物如狗、貓、并對病死豬只、死胎、流產(chǎn)物等進(jìn)行無害化處理；定期進(jìn)行滅鼠、滅蠅等措施。

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