蛹蟲草菌絲液體培養(yǎng)基中碳氮源的研究試驗

代勇

蛹蟲草（Cordceps milharisc（L）Linr）又稱北冬蟲夏草，屬子囊菌綱，肉座菌目，麥角菌科，蟲草屬。天然蟲草資源十分匱乏，半人工栽培生產(chǎn)周期長，技術不易掌握。通過液體深層培養(yǎng)法可獲得與天然蟲草化學成分相近的菌絲體，還可獲得次生代謝產(chǎn)物，還能大大縮短生產(chǎn)周期。所以，通過液體發(fā)酵培養(yǎng)蟲草菌絲是獲得蟲草產(chǎn)品的重要手段，現(xiàn)將碳氮源對蛹蟲草菌絲生長影響的試驗報告如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 蛹蟲草斜面固體菌種，遼東學院實驗中心微生物實驗室提供。

1.1.2 主要儀器 LDZX-F50立式電熱高壓蒸汽滅菌鍋，超凈工作臺，Hps-160bs-Ⅱ恒溫恒濕培養(yǎng)箱等。

1.1.3 培養(yǎng)基 （1）種子平板培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀2g，瓊脂20g，水1000ml，pH自然。（2）液體發(fā)酵基礎培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂1g，鹽酸硫胺素15mg，水1000ml， pH自然。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種活化 將斜面固體菌種接種在種子平板培養(yǎng)基上，在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)20～22℃培養(yǎng)一周，菌絲長滿后轉色備用。

1.2.2 不同碳源對菌絲生長量的影響試驗 分別以葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉等量替代基礎培養(yǎng)基中的葡萄糖制備培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基分裝在250ml三角瓶內(nèi)，每瓶100ml，各處理五次重復，所有培養(yǎng)基常規(guī)滅菌。在無菌條件下，用打孔器取活化菌種接到液體培養(yǎng)基內(nèi)，20～22℃，130r/min，震蕩培養(yǎng)一周后將發(fā)酵液過濾，菌絲用蒸餾水沖洗干凈與60℃條件下烘干后稱重。

1.2.3 碳源濃度試驗 選定可溶性淀粉為最佳碳源，分別以10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L濃度制備培養(yǎng)基。與1.2.2相同方法接種、培養(yǎng)、過濾、烘干、稱重。

1.2.4 氮源試驗 以蛋白胨、牛肉膏、酵母浸膏、檸檬酸氫二銨為氮源。方法與碳源相同。

2 結果分析

2.1 不同碳源對菌絲生長量的影響試驗

通過表1可知，不同碳源對蛹蟲草菌絲產(chǎn)量有較大影響。其中以可溶性淀粉培養(yǎng)菌絲產(chǎn)量最高，干重為0.2091g/100mL，蔗糖次之，麥芽糖產(chǎn)量最低。對結果進行方差分析后可知，各處理除麥芽糖和乳糖之間差異不顯著外，其余都表現(xiàn)為極顯著。

2.2 碳源濃度試驗

在以菌絲干重為指標確定以可溶性淀粉為最佳碳源后，分別以10g/L，15g/L，20g/L，25g/L，30g/L五個同濃度培養(yǎng)了蛹蟲草菌絲，試驗結果表明，在試驗濃度范圍內(nèi)菌絲的產(chǎn)量隨可溶性淀粉濃度的升高而增多。到20g/L濃度時菌絲產(chǎn)量最高，到25g/L濃度時菌絲產(chǎn)量增加不明顯，以后濃度菌絲生長均呈停滯趨勢。

2.3 不同氮源對菌絲生長量的影響

由表3可看出，以酵母膏為氮源培養(yǎng)蛹蟲草菌絲與其他氮源相比菌絲產(chǎn)量最高。各處理之間除蛋白胨和牛肉膏之間差異不顯著外，其余個處理均達到了極顯著。對菌絲產(chǎn)量的影響由大到小依次是：酵母膏﹥蛋白胨﹥牛肉膏﹥檸檬酸氫二銨。

2.4 氮源濃度試驗

酵母膏濃度試驗結果表明：在試驗濃度范圍內(nèi)，菌絲產(chǎn)量隨酵母膏濃度升高而增加，在濃度為5g/L時菌絲產(chǎn)量出現(xiàn)高峰值，其后產(chǎn)量稍有下降但不明顯，所以將最佳濃度確定為5g/L。

試驗結果表明在蛹蟲草菌絲液體發(fā)酵培養(yǎng)培養(yǎng)基中，碳源以可溶性淀粉最為適宜，且適宜濃度為20g/ L；氮源以酵母膏最為適宜，適宜濃度為5g/L；本試驗結果雖經(jīng)本人重復驗證，但也僅供讀者參考之用。

（作者單位：113006撫順市農(nóng)業(yè)技術推廣中心）