洋桔梗葉盤(pán)組織培養(yǎng)技術(shù)研究

代勇 楊迪

洋桔梗，又名草原龍膽，為草原龍膽屬1～2年生草本植物，原產(chǎn)美國(guó)、墨西哥，因其花型優(yōu)美，花色各異，深受世界人民的喜愛(ài)，用于生產(chǎn)栽培的洋桔梗種苗主要從日本等國(guó)進(jìn)口，成本高，風(fēng)險(xiǎn)大，受制于人，進(jìn)而影響了我國(guó)洋桔梗切花的大規(guī)模推廣種植。因此，我們開(kāi)展了洋桔梗組培培養(yǎng)技術(shù)研究，旨在通過(guò)組培快繁技術(shù)，探尋洋桔梗的快速繁殖、規(guī)?；a(chǎn)以及珍貴種質(zhì)資源的保存的新途徑。

1 試驗(yàn)材料

供試材料為洋桔梗品種“麗莎” ，由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所提供。

2 試驗(yàn)方法

采集洋桔梗健康植株的葉片，將其置于燒杯中，按程序進(jìn)行漂洗和消毒。將葉片橫切成2～3段，整理成5mm×5mm大小的葉盤(pán)后，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中（表1、表2）。誘導(dǎo)基本培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，附加細(xì)胞分裂素（BA、TDZ、2-ip），生長(zhǎng)素（NAA），蔗糖30 g/L，瓊脂2.5g/L，培養(yǎng)基的pH值為5.8。每個(gè)處理組合接種葉盤(pán)30片，重復(fù)3次，培養(yǎng)條件為25℃，光照16h/d。40 d后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率，并觀察記錄幼苗的生長(zhǎng)狀況

將葉盤(pán)上誘導(dǎo)產(chǎn)生的長(zhǎng)約1.5～2cm的不定芽接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加不同生長(zhǎng)素（見(jiàn)表3），40 d后統(tǒng)計(jì)生根率。

選取健壯的生根植株和玻璃化植株各30株，洗凈根部瓊脂，然后將其移栽到裝有花卉專(zhuān)用營(yíng)養(yǎng)土的缽中，覆蓋透明薄膜，于幼苗室培養(yǎng)5d后，逐步去掉薄膜，10 d后移到溫室中，15d后統(tǒng)計(jì)存活率。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同激素配比對(duì)洋桔梗葉盤(pán)不定芽誘導(dǎo)的影響

將大小約為5mm×5mm的洋桔梗葉盤(pán)接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，約10 d左右，多數(shù)處理葉盤(pán)的切口邊沿出現(xiàn)淡黃綠色的愈傷組織，20 d左右，有綠色芽點(diǎn)出現(xiàn)，25d芽點(diǎn)長(zhǎng)成不定芽，但也有葉盤(pán)切口形成的愈傷組織只是體積增大，并未產(chǎn)生芽點(diǎn)，或是沒(méi)有形成愈傷組織。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，隨著B(niǎo)A濃度的增加，不定芽的誘導(dǎo)數(shù)也隨之增加，但當(dāng)BA濃度為1mg/l時(shí)，植株出現(xiàn)嚴(yán)重玻璃化現(xiàn)象，故不定芽的誘導(dǎo)率也相對(duì)下降，且植株矮小，生長(zhǎng)狀態(tài)較差；隨著NAA濃度的增加，不定芽的誘導(dǎo)數(shù)量也隨之增加，但當(dāng)NAA濃度超過(guò)0.05mg/l時(shí)，不定芽的誘導(dǎo)數(shù)量開(kāi)始下降；當(dāng)BA為0.5mg/l，NAA為0.05mg/l時(shí)，不定芽的誘導(dǎo)數(shù)量達(dá)到最大，每葉盤(pán)產(chǎn)生的平均不定芽數(shù)為17.25，且植株長(zhǎng)勢(shì)良好。

實(shí)驗(yàn)表明，BA，TDZ和2-ip對(duì)不定芽的誘導(dǎo)作用依次增強(qiáng)，而且隨著細(xì)胞分裂素濃度的增加，除了2-ip外，每葉盤(pán)能產(chǎn)生的不定芽數(shù)也隨之增多。當(dāng)2-ip濃度為0.5mg/l時(shí)，每葉盤(pán)產(chǎn)生的不定芽數(shù)最多，為2.9。

3.2 不同生長(zhǎng)素對(duì)植株生根的影響

通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，NAA和IBA都具有促進(jìn)植物生根的作用，但NAA較IBA更利于愈傷組織的產(chǎn)生。在含有NAA的1/2MS培養(yǎng)基中，幼苗先在基部形成淡黃綠色的愈傷組織，后從愈傷組織上長(zhǎng)出不定根，當(dāng)NAA濃度為0.1mg/L時(shí)，根的誘導(dǎo)率為76%，平均根數(shù)為3.3條，平均根長(zhǎng)為1.8cm，隨著NAA濃度的增加，形成的愈傷組織就越多，從愈傷組織上產(chǎn)生的不定根也就越多，而且細(xì)小，根系也有玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生，不定根很容易隨愈傷組織一起從莖基部脫落，故根的生長(zhǎng)狀況未統(tǒng)計(jì)。

在含有IBA的生根培養(yǎng)基中，根系主要是從莖基部產(chǎn)生，并且隨著IBA濃度的增加，根的數(shù)量及根長(zhǎng)度也先增加后降低。當(dāng)IBA濃度為0.1mg/L時(shí)，根的誘導(dǎo)率為82%，平均根數(shù)為3.1條，平均根長(zhǎng)為1.9cm；當(dāng)IBA濃度為0.5mg/L時(shí)，根的誘導(dǎo)率為94%，平均根數(shù)為4.6條，平均根長(zhǎng)為2.8cm；當(dāng)IBA濃度為1.0 mg/L時(shí)，根的誘導(dǎo)率為88%，平均根數(shù)為3.6條，平均根長(zhǎng)為2.2cm。因此，洋桔梗植株最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5mg/l

綜上所述，根據(jù)實(shí)驗(yàn)可知，我們對(duì)在含有不同激素配比的培養(yǎng)基中，洋桔梗葉盤(pán)不定芽的誘導(dǎo)分化進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著B(niǎo)A濃度的增加，不定芽的誘導(dǎo)數(shù)目也隨之增加，但過(guò)高的BA濃度，如本試驗(yàn)中當(dāng)BA濃度為1mg/l時(shí)，植株會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象，植株的生長(zhǎng)狀態(tài)也較差。隨著NAA濃度的增加，不定芽的誘導(dǎo)數(shù)量也隨之增加，但當(dāng)NAA濃度超過(guò)0.05mg/l時(shí)，不定芽的誘導(dǎo)數(shù)量開(kāi)始下降，這表明：BA/NAA的比例對(duì)不定芽的誘導(dǎo)至關(guān)重要，決定不定芽產(chǎn)生的數(shù)目和狀態(tài)。其它研究認(rèn)為，NAA是一種作用性極強(qiáng)的生長(zhǎng)素，低濃度的NAA有利于根的形成，過(guò)高濃度更利于愈傷組織的誘導(dǎo)，本試驗(yàn)亦證明了這一結(jié)論。

在只含有細(xì)胞分裂素（BA，TDZ和2-ip）的培養(yǎng)基中，無(wú)論是愈傷組織量，還是不定芽誘導(dǎo)的數(shù)目，均少于在含有細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素兩種激素的培養(yǎng)基中兩者的數(shù)量，這表明：細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素兩者的結(jié)合使用，對(duì)愈傷組織及不定芽的誘導(dǎo)具有重要作用；單獨(dú)使用細(xì)胞分裂素，不利于愈傷組織和不定芽的誘導(dǎo)。此外，由于BA，TDZ和2-ip三種細(xì)胞分裂素的活性依次增強(qiáng)，其產(chǎn)生的不定芽的數(shù)量也隨之增多。

（作者單位：1.113006遼寧省撫順市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心；2.150040東北林業(yè)大學(xué)）