柯瑾 梁玲 朱培芳 周田婷 喬宏亮 熊磊
摘要:目的 建立香訶止瀉顆粒劑提取分離和成型工藝條件。方法 采用L9(3)4正交設(shè)計法水提分離工藝進行考察,并通過單因素考察建立顆粒劑成型工藝。結(jié)果 香訶止瀉顆粒劑提取分離工藝優(yōu)選為:12倍水,浸泡2.5 h,煎煮3次,每次1.0 h,合并煎液,藥液濃縮至相對密度0.8,10 000 r/min高速離心30 min,得上清液。成型工藝優(yōu)選為:上清液濃縮至相對密度1.0,按藥輔比1:1.5加入輔料混勻后,泵速1.0mL/min,進風(fēng)口溫度130℃,出風(fēng)口溫度90℃,噴霧制備細粉,用95%乙醇為潤濕劑制備軟材后,擠出制粒。結(jié)論 優(yōu)化的提取、分離和成型工藝合理、可行、穩(wěn)定可控,可為申報醫(yī)療機構(gòu)制劑奠定基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞:香訶止瀉顆粒劑;葛根素;離心分離;噴霧干燥
中圖分類號:R284.2 文獻標志碼:A 文章編號:1007-2349(2018)07-0065-04
Study on Extraction,Isolation and Formation of Xianghe-Made Anti-Diarrhea Granules
KE Jin LIANG Ling ZHU Pei-fang YIN Na ZHOU Tian-ting QIAO Hong-liang XIONG Lei
(1. Yunnan Unversity of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650500;
2. Puer Songmao Diancao Liuwei Pharmaceutical co. LTD,Puer 665000;
3. Julin Zixin Banruo Pharmaceutical Group Limited,Qingshi132300)
【Abstract】Objective:To establish the conditions of extraction,isolation and formation of Xianghe-made anti-diarrhea granules. Methods:The L9(3)4 orthogonal design method was used to investigate the extraction and isolation processes. And the granule formation process was established through one factor investigation method. Results:The extraction and isolation processes of Xianghe-made anti-diarrhea granules were indicated as follows:resolve Xianghe in 12 times of water; soak it for 2.5 hours,boil it for an hour,repeat for 3 times and combine the liquid,concentrate the decoction to relative density as 0.8,centrifuge it at 10 000 r/min for 30 minutes to obtain the supernatant. The formation process was preferred as follows:concentrate the supernatant to a relative density of 1.0,adjust the ratio of drug component to auxiliary component as 1 to 1.5 with 1.0mL/min of pump speed,set the air inlet temperature as 130℃,and the outlet temperature as 90℃ to spray and make fine powder,wet the soft material with 95% ethanol and form granules. Conclusion:The optimized extraction,isolation and formation processes are reasonable,feasible,stable and controllable,and can lay the foundation for the application of officially medical agents.
【Key words】Xianghe-made anti-diarrhea granules,puerarin,isolation by centrifugation,spray for drying
香訶止瀉顆粒劑源于云南省名中醫(yī)熊磊治療小兒泄瀉的臨床效驗方,臨床療效確切。本方具芳香化濕、運脾止瀉之功,主治小兒脾氣不運、濕濁內(nèi)阻之泄瀉[1]。由云南主產(chǎn)藥材藿香、葛根、訶子、石榴皮等9味中藥組成。中醫(yī)認為,泄瀉病變主要在脾胃,尤其與脾的運化功能失調(diào)關(guān)系密切[2]。脾主升清,胃主降濁,若脾胃失常,清氣不升,濁氣不降,清濁相并,下走大腸則至泄瀉。前人亦有“無濕不成瀉”、“濕多成五瀉”之說,故治療上總以運脾化濕為基本原則[3]。
香訶止瀉湯中藿香味辛、性微溫、入脾胃經(jīng),具有芳香化濁,化濕止嘔之功[4];訶子性平、味酸澀,酸能收斂,澀能止瀉[5],與藿香共為君藥,兩藥相配,共湊健脾化濕、溫胃化濁、澀腸止瀉之功,且有標本兼治之妙。葛根味辛甘、性涼,入脾胃經(jīng),具有生津止渴,升陽止瀉之功[6],茯苓健脾利水滲濕[7],車前子滲濕止瀉,能“利小便實大便”[8],三藥共為臣藥。其余藥物能行氣、化濕、消痞,分別針對嘔吐、痞脹、疼痛等泄瀉伴隨癥狀起輔助治療作用。諸藥合用,共湊健脾除濕、運脾化濁、行氣止痛、溫中固澀之效,使?jié)袢テ⑦\則腹瀉自愈。 劑型選擇為療效確切、服用方便、便于攜帶、成本低、口感好、兒童順應(yīng)性好的顆粒劑,既保持了傳統(tǒng)的中醫(yī)藥用藥特色,又能最大限度地提取并保留處方中藥物的有效成分,發(fā)揮處方的綜合治療作用。同時顆粒劑還具備性質(zhì)穩(wěn)定、質(zhì)量可控、便于規(guī)模化生產(chǎn)等優(yōu)點,是醫(yī)療機構(gòu)制劑常用劑型[9]。本研究應(yīng)用新型干燥方法-噴霧干燥,該方法成型快速,輔料用量小,制得顆粒劑流動性和溶化性良好[10]。
1 材料與方法
1.1 材料與儀器 所用中藥材均選用《中國藥典》(2015版一部)收載的正品。廣藿香(批號:150201);訶子(批號:151101);葛根(批號:150101);石榴皮(批號:150301);茯苓(批號:150101);車前子(批號:151001);白術(shù)(批號:151201);山楂(批號:150326);仙鶴草(批號:151201)均購自云南泰華豐功藥業(yè)有限公司。葛根素對照品(批號:151102,成都普菲德生物技術(shù)有限公司)。甲醇(色譜純,默克股份兩合公司);磷酸、乙醇(分析純,天津市大茂化學(xué)試劑廠);純凈水(娃哈哈公司)。
Agilent1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司);C18色譜柱(ZOR BAX SAX-C18 4.6×250 mm,5 μm);高速離心機(上海手術(shù)器械廠);十萬分之一分析天平(上海菁海儀器有限公司);電子秤(余姚市金諾天平儀器有限公司);超聲波清洗機(YL-040S型,上海冠特超聲儀器有限公司);電子調(diào)溫電熱套(PHTW型,鞏義市器華儀器有限責(zé)任公司)。
1.2 實驗方法
1.2.1 葛根素含量測定方法考察
1.2.1.1 色譜條件 C18色譜柱(ZOR BAX SAX-C18,4.6×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-水(25:75);檢測波長:250 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 mL/min。理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于4 000。
1.2.1.2 對照品溶液的制備 取葛根素對照品適量,30%乙醇溶解,超聲30 min,制成每1 mL含51 μg的溶液,0.45 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。
1.2.1.3 供試品溶液制備 按處方比例稱取1倍量的藿香、訶子、葛根等藥材,按一定條件進行煎煮,所得藥液過濾、濃縮、定容至250 mL,精密吸取1.5 mL,置蒸發(fā)皿中水浴蒸干,放冷。用30%乙醇溶液溶解并轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中,超聲30 min,放冷,補足減失重量,用0.45 μm微孔濾膜過濾,續(xù)濾液即為供試品溶液。
1.2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液1、2、4、8、12、20 μL進樣,按照“1.2.1.1”項下的色譜條件測定峰面積,以葛根素峰面積(Y)對其含量(X)進行線性回歸,
1.2.1.5 精密度考察 精密吸取對照品溶液10 μL,重復(fù)進樣6次,記錄葛根素峰面積。
1.2.1.6 穩(wěn)定性考察 精密吸取對照品和供試品溶液各10 μL,分別于0、2、4、8、12 h進樣測定,記錄葛根素峰面積。
1.2.1.7 重現(xiàn)性考察 按“1.2.1.3”項下方法制備供試品溶液,平行6份,記錄峰面積,測定含量。
1.2.1.8 加樣回收率考察 精密量取9份供試品溶液,每份4 mL(濃度為54.40 μg/mL),置10 mL棕色容量瓶中,分別加入葛根素對照品溶液適量,按供試品溶液制備方法處理,測定,記錄峰面積,計算含量。
1.2.2 提取工藝研究
1.2.2.1 吸水率測定 按處方量稱取藥材110 g,共3份,每份加入8倍量水浸沒,室溫放置,分別于100,110,120,130,140,150,160 min用4號篩濾去水分,稱定藥材重量。計算吸水率=(藥材濕重-藥材干重)÷藥材干重×100%。
1.2.2.2 提取條件考察[11] 以收膏率和葛根素含量綜合指標,通過正交實驗設(shè)計,考察加水倍數(shù)(A)、煎煮時間(B)和煎煮次數(shù)(C)工藝條件,因素水平表見表1。綜合評分=收膏率÷0.2191×0.3+葛根素含量÷0.5141×0.7。
表1 提取正交因素水平表
1.2.3 分離工藝考察 以收膏率降低比率為評價指標,通過正交實驗設(shè)計,考察提取液相對密度(A)、離心轉(zhuǎn)速(B)和離心時間(C)工藝條件,因素水平表見表2。收膏率降低比率=(分離前收膏率-分離后收膏率)÷分離前收膏率×100%,分離前收膏率為照“1.2.2.2”條件制備后測定為21.4%。
表2 離心因素水平表
1.2.4 顆粒成型工藝考察[12]
1.2.4.1 制粒方法考察 以細粉得率和制粉情況為綜合評價指標,考察干浸膏粉濕法制粒、稠浸膏濕法制粒和噴霧干燥制粒。
1.2.4.2 藥液濃縮程度考察 將離心后的物料濃縮至相對密度分別為0.8、0.9、1.0、1.1、1.2,按藥輔比(干浸膏:輔料)1:2加入濃縮液中,混合后按噴霧速度0.5 mL/min,進口溫度120 ℃,出口溫度90 ℃進行噴霧制粒,考察濃縮程度對噴霧細粉得率和噴霧情況的影響。
1.2.4.3 泵速(進料速度)的考察 將離心后的物料濃縮至一定相對密度,照“1.2.4.2”,泵速分別為0.5、1.0、1.5、2 mL/min,考察噴霧速度對噴霧細粉得率和噴霧情況的影響。
1.2.4.4 噴霧溫度的考察 將離心后的物料濃縮至一定相對密度和泵速,照“1.2.4.2”,進口溫度分別按100、110、120、130、140、150 ℃,考察噴霧溫度對噴霧細粉得率和噴霧情況的影響。
1.2.4.5 輔料用量考察[13] 按上述優(yōu)化的噴霧條件,對藥輔比1:1、1:1.5、1:2進行考察,以確定最佳藥輔比。輔料為糊精-糖粉=1:2的混合物,前期對該比例進行考察,糊精比例高易導(dǎo)致顆粒劑溶液澄明度低,糖粉不僅可以作填充劑亦可作矯味劑,按該比例制備顆粒劑不僅成型性、溶化性良好,而且甜度適中,矯味效果理想。
1.2.4.6 潤濕劑的考察 由于本處方中成分粘性較強,故僅考慮潤濕劑種類的篩選。將噴霧干燥的細粉,分別用純凈水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇制軟材后擠出制粒,考察潤濕劑種類。
2 結(jié)果與討論
2.1 葛根素含量測定方法考察
2.1.1 線性考察 葛根素峰面積和含量的回歸方程:Y= 4167X-6.4036,r=1.0000,表明進樣量0.051-1.02 μg范圍內(nèi),葛根素峰面積與進樣量有良好的線性關(guān)系,結(jié)果見圖1。
圖1 葛根素對照品線性關(guān)系
2.1.2 精密度考察 RSD為0.16%,實驗結(jié)果表明儀器的精密度較好。
2.1.3 穩(wěn)定性考察 對照品溶液RSD 0.38%,供試品溶液RSD 0.29%,說明對照品、供試品溶液12 h以內(nèi)穩(wěn)定。
2.1.4 重復(fù)性考察 6份供試品溶液的平均含量為59.49 μg/mL,其RSD值為0.78%。說明該方法重現(xiàn)性良好。
2.1.5 加樣回收率考察 該測定方法準確可靠,結(jié)果見表3。
表3 加樣回收率實驗結(jié)果
2.2 提取工藝考察
2.2.1 吸收率考察 吸水率為117.8%,而且浸泡150 min后,藥材吸水率無明顯變化,故藥材浸泡時間為150 min,結(jié)果見圖2。
圖2 浸泡時間對藥材吸水率的影響
2.2.2 正交實驗結(jié)果 由表4可知影響提取效果因素順序為C>A>B,即:煎煮次數(shù)>加水倍數(shù)>煎煮時間。提取工藝的最佳條件為:A3B2C3組合,即用12倍量水煎煮3次,每次1.0 h。
表4 正交實驗結(jié)果
2.3 分離工藝考察 由表5可知影響分離工藝因素的順序為藥液相對密度>離心轉(zhuǎn)速>離心時間。精制工藝的最佳條件為:A1B3C3,即:藥液濃縮至相對密度為0.8,用10 000 r/min的高速離心機離心30 min。
表5 離心正交實驗結(jié)果
2.4 顆粒成型工藝考察
2.4.1 制粒方法考察 干浸膏粉按1:2藥輔比與輔料混勻后,加入適當無水乙醇,形成高粘度團塊,無法擠出制粒;該水提物濃縮至相對密度為1.2時,變?yōu)楣麅鰻畛砗癜肓黧w,加入輔料后,亦形成高粘度團塊,無法制粒。噴霧干燥制得細粉后用無水乙醇潤濕,軟材粘度適宜,可擠出制粒,故確定制粒方法為噴霧制粒。
2.4.2 藥液濃縮程度考察 濃縮程度低,制??尚行粤己?,但是周期較長得率較低;濃縮程度高,制粒過程中易粘壁,得率較低。故將離心分離液濃縮至相對密度1.0,噴霧干燥效果較佳,結(jié)果見表6。
表6 藥液濃縮程度對制粒影響結(jié)果
2.4.3 泵速考察 泵速慢,不易粘壁,但是周期很長;泵速快則容易粘壁導(dǎo)致得率較低。泵速按1 mL/min,噴霧制粒的效果較佳、效率高,結(jié)果見表7。
表7 泵速對制粒影響結(jié)果
2.4.4 噴霧溫度考察 噴霧溫度高利于水分干燥,但是溫度過高會導(dǎo)致顆粒溶化后的澄明度不良,故干燥溫度較佳的為130 ℃,結(jié)果見表8。
表8 噴霧溫度對制粒影響結(jié)果
2.4.5 藥輔比例考察 噴霧制粒藥輔過低顆粒易吸潮導(dǎo)致流動性不好,同時兼顧節(jié)省成本,最終選用藥輔比為1:1.5制粒,結(jié)果見表9。
表9 噴霧溫度對制粒影響結(jié)果
2.4.6 潤濕劑種類考察 純凈水、25%乙醇、50%乙醇和75%乙醇制徳軟材粘度過大,無法擠出制粒,而95%乙醇所制軟材,軟硬適度,擠出制粒后,顆粒得率達到87.5%,故確定95%乙醇為潤濕劑。
3 結(jié)論
香訶止瀉顆粒劑提取分離工藝優(yōu)選為:12倍水,浸泡2.5 h,煎煮3次,每次1.0 h,合并煎液,藥液濃縮至相對密度0.8,10 000 r/min高速離心30 min。成型工藝優(yōu)選為:分離液濃縮至相對密度1.0,按藥輔比1:1.5加入輔料混勻后,泵速1.0 mL/min,進風(fēng)口溫度130 ℃,出風(fēng)口溫度90 ℃,噴霧制得細粉后,用95%乙醇為潤濕劑制軟材后擠出制備顆粒劑。該工藝穩(wěn)定可控合理,所得顆粒劑流動性溶化性良好,不易吸潮。
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(收稿日期:2018-04-17)