燈盞花素自乳化軟膠囊溶出度研究

湯秀梅 張惠玲 田霞 孔美江 劉波

摘要：目的 建立燈盞花自乳化軟膠囊的溶出度測定方法。方法 采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱;以甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長335 nm。應(yīng)用槳法，以磷酸鹽緩沖液（pH6.8）為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，對燈盞花素軟膠囊中野黃芩苷進(jìn)行了溶出度測定。結(jié)果 野黃芩苷的線性范圍為17μg/mL～838μg/mL線性關(guān)系良好r=0.9991，回收率97.8%。采用試驗(yàn)確定的方法，燈盞花素軟膠囊在40 min溶出達(dá)80%。結(jié)論 研究燈盞花素自乳化軟膠囊溶出度方法準(zhǔn)確、可靠，可用于燈盞花素自乳化軟膠囊的溶出度檢測。

關(guān)鍵詞：燈盞花素自乳化軟膠囊;溶出度

中圖分類號：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1007-2349（2018）08-0070-03

Study on Dissolution Rate of Breviscapine Self-emulsifying Soft Capsule

TANG Xiu-mei，ZHANG Hui-ling，TIAN Xia，KONG Mei-jiang，LIU Bo

（Yunnan Institute of Materia Medica，Yunnan Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and National Medicine

New Drug Creation Enterprise，Innovation and Research Center of Yunnan Baiyao Group，Kunming 650000，China）

【Abstract】Objective：To establish a method for the determination of dissolution rate of Breviscapine self-emulsifying soft capsules.Methods：The octadecylsilane bonded silica gel was used as the column，the methanol-0.1% phosphoric acid solution（35：65）as the mobile phase，1.0 mL/min of flow rate and 335 nm of detection wavelength.The dissolution method was carried out on the Breviscapine soft capsule by using the paddle method with phosphate buffer（pH6.8）as the dissolution medium and the rotation speed was 50 r·min-1.Results：The scutellarin had a linear range of 17μg/mL to 838μg/mL，with a good t linear relationship，r=0.9991，and 97.8% of recovery rate.Though experiment determination method，Breviscapine soft capsules were dissolved up to 80% at 40 min.Conclusion：The method of dissolution rate of Breviscapine self-emulsifying soft capsule is accurate and reliable，and it can be used for the dissolution test of Breviscapine self-emulsifying soft capsule.

【Key words】Breviscapine self-emulsifying soft capsule，dissolution rate

燈盞花素自乳化軟膠囊是以燈盞花素為原料制成的軟膠囊劑型。燈盞花素具有活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)的功能。用于腦絡(luò)瘀阻，中風(fēng)偏癱，心脈痹阻，胸痹心痛;中風(fēng)后遺癥及冠心病心絞痛證候者。提高藥物的生物利用度，更好的發(fā)揮藥效，采用自乳化技術(shù)，研制燈盞花素自乳化軟膠囊。控制其質(zhì)量，建立溶出度的測定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 708～DS自動溶出儀;Agilent 1200高效液相色譜儀;BSA224s～cw 電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;甲醇（色譜純，默克公司）;其余為分析純;野黃芩苷對照品（購于中國食品藥品檢定研究院，批號110842-200403）燈盞花素軟膠囊（批號：20131101，20131102，20131103，云南省藥物研究所提供）

2 方法與結(jié)果

2.1 對照溶液的制備 取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加磷酸鹽緩沖液（PH6.8）制成每1mL中含80ug的溶液，作為對照品溶液。

2.2 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）為流動相;流速為每分鐘1 mL。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)算不低于4000。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品，照溶出度測定法（《中國藥典》2010年版二部附錄XC第二法），以磷酸鹽緩沖液（PH6.8）500 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)40 min時(shí)，取溶液濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液;

2.4 溶出介質(zhì)的選擇 燈盞花素在水中幾乎不溶，分別選用PH4.5醋酸鹽溶液、PH6.8磷酸鹽溶液、0.25%十二烷基硫酸鈉溶液、0.5%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)[4]，測定結(jié)果溶出度分別為18.7%，83.9%，28.0%，15.9%;燈盞花素軟膠囊在PH6.8磷酸鹽溶液溶出量最高，選用PH6.8磷酸鹽溶液為溶出液。

2.5 溶出介質(zhì)體積的選擇 考慮到溶出度測定的準(zhǔn)確度，燈盞花素軟膠囊每粒含燈盞花素40 m，溶出介質(zhì)500 mL，溶出液的濃度80 ug/mL。燈盞花素在磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）中溶解度為4.6 mg/mL[5]，其在500 mL的磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）中的飽和溶解量超過每粒所含藥物量（40 mg）的10倍，達(dá)到漏槽條件，確定溶出介質(zhì)500 mL。

2.6 溶出度測定方法的驗(yàn)證

2.6.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取燈盞花軟膠囊的空白輔料適量，按供試品溶液的制備方法制備陰性，分別取對照品溶液、溶出液，以及陰性樣品溶出液分別進(jìn)樣分析。色譜圖如圖所示，被測組分分離效果較好，所用溶劑和輔料對溶出檢測結(jié)果無影響，野黃芩苷達(dá)到基線分離，理論板數(shù)為4000。

A.陰性樣品;B.對照品;C.樣品;

圖1 燈盞花素軟膠囊中野黃芩苷測定圖

2.6.2 線性關(guān)系考察試驗(yàn) 精密稱取野黃芩苷對照品適量，加磷酸鹽緩沖液（PH6.8）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對照品母液（0.838 mg/mL），分別精密吸取對照品母液1 mL 置2 mL、5 mL、10 mL、50 mL的容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液（PH6.8）稀釋并定容至刻度，搖勻。精密吸取5μL，分別進(jìn)樣，以濃度（X）對峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=32040x-24.554，r=0.9991，燈盞花素在0.017 mg/mL～0.838 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品，照溶出度測定法（中國藥典2010版二部附錄X C 第二法溶出，分別測定野黃芩苷含量，測定結(jié)果顯示重復(fù)性好，溶出度平均值87.11%，RSD為1.35%。

2.6.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取溶出液分別于0h、1h、3h、6h、9h、12h、18h、24h進(jìn)樣測定，溶出液24 h無顯著性變化，溶出液較為穩(wěn)定，RSD值1.85%。

2.6.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密稱取野黃芩苷對照品20 mg至50 mL量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（PH6.8）溶解，稀釋至刻度，作為對照儲備液;分別精密量取對照儲備液1 mL、2 mL、3 mL溶液至10 mL量瓶中，再按處方比例加入空白輔料3 mg、6 mg、9 mg，用磷酸鹽緩沖液（PH6.8）稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液;另取上述對照儲備液用磷酸鹽緩沖液（PH6.8）稀釋并制成每1 mL含0.08 mg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取上述對照品溶液和供試品溶液，分別進(jìn)樣，按外標(biāo)法計(jì)算，即得，實(shí)驗(yàn)結(jié)果回收率95%-105%之間，平均值97.8%，

2.6.6 范圍試驗(yàn) 分別精密稱取供試品0.5粒、1粒、1.5粒量各3份，照溶出度測定法溶出分別測定，RSD為1.74%。

2.6.7 中間精密度 3位不同人員對同一批供試品分別照溶出度溶出，Agilent1200，LC-2010A，Agilent1100不同高效液相進(jìn)行檢測，測定結(jié)果溶出度分別為，96.6%，94.1%，96.6%：RSD為2.64%。

2.6.8 耐用性實(shí)驗(yàn) 分別改變色譜條件中的流速為0.8 mL/min，1.0 mL/min，1.2 mL/min;柱溫：20℃，30℃，40℃;流動相：甲醇—0.1%磷酸溶液（37：63），甲醇—0.1%磷酸溶液（35：65），甲醇—0.1%磷酸溶液（33：67）：柱子：Ecosil-C18，Kromasi 100-5 C18，Agilent Zorbax SB-C18，分別進(jìn)樣溶出液、對照品溶液，試驗(yàn)結(jié)果顯示，測定條件有微的變動時(shí)，所用溶劑和輔料對溶出檢測結(jié)果無影響，野黃芩苷峰分離度均1.5以上。

2.7 3批樣品的溶出度測定 照溶出度測定法30 min的溶出度，測定3批樣品（批號：20131101，20131102，20131103），測定結(jié)果見表1。

表1 3批樣品溶出度測定結(jié)果

根據(jù)測定結(jié)果顯示3批溶出度均大于80%，確定溶出度限度為標(biāo)示量的80%。

3 討論

溶出度是控制藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)，燈盞花素難溶性物質(zhì)，生物利用度低，采用自乳化技術(shù)，增加燈盞花素溶解度，建立溶出度測定方法，更有效控制軟膠囊質(zhì)量。

溶出轉(zhuǎn)速和溶出時(shí)間的選擇，實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)速分別為 50轉(zhuǎn)/min、75轉(zhuǎn)/min和100轉(zhuǎn)/min，分別在10、20、30、40、50和60 min的時(shí)間點(diǎn)取樣，測定不同轉(zhuǎn)速，不同時(shí)間的溶出度。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，轉(zhuǎn)速50轉(zhuǎn)/min燈盞花素軟膠囊樣品溶出度與75轉(zhuǎn)/min溶出結(jié)果相近;轉(zhuǎn)速100轉(zhuǎn)/min溶出速度太快，10 min達(dá)最大濃度，不利于溶出度區(qū)分控制，確定轉(zhuǎn)速50轉(zhuǎn)/min;溶出度在40 min，50 min，60 min溶出值基本一致，且達(dá)到最大值，確定溶出時(shí)間40 min。

溶出度的溶出液檢測方法采用高效液相色譜法，用高效液相色譜儀中的二極管陣列檢測器檢測得到野黃芩苷的最大吸收波長為335 nm，與文獻(xiàn)一致，所以確定用335 nm作為此方法的檢測波長。

檢測方法色譜條件流動相研究，參考中國藥典2010年版一部中“燈盞花素”含量測定方法及文獻(xiàn)資料測定方方法，進(jìn)行流動相的研究;流動相甲醇-0.1%磷酸溶液（40：60）[3]得到的野黃芩苷峰不能達(dá)到基線分離有拖尾峰;調(diào)整流動相甲醇-0.1%磷酸溶液野黃芩苷峰型達(dá)到基線分離，分離度達(dá)1.5以上，筆者選用甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）為溶出度檢測的流動相。

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（收稿日期：2018-03-19）