柞蠶雄蛾營養(yǎng)液對小鼠保肝降酶功能的研究

范作卿　鄒德慶　王娜　郭光　朱琳

摘要：為了解柞蠶雄蛾營養(yǎng)液保肝降酶的功能，采用谷丙轉氨酶活性檢測與病理組織學切片觀察的方法，研究柞蠶雄蛾營養(yǎng)液對四氯化碳中毒小鼠肝損傷的作用。結果表明：柞蠶雄蛾營養(yǎng)液大劑量組與小劑量組均可明顯降低四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉氨酶（ALT）水平，治療效果達顯著水平（P<0.05），與乙肝寧具有相同作用。通過肝組織切片觀察，柞蠶雄蛾營養(yǎng)液小劑量組可見部分肝細胞點狀壞死，有輕度肝損傷，而柞蠶雄蛾營養(yǎng)液大劑量組小鼠肝組織結構正常，肝細胞排列規(guī)則，未見炎癥。表明柞蠶雄蛾營養(yǎng)液能減少肝細胞變性、壞死的程度和范圍，對受損傷的肝組織具有明顯保護作用，且大劑量效果更佳。

關鍵詞：柞蠶雄蛾營養(yǎng)液；四氯化碳；保肝；谷丙轉氨酶；功能試驗

中圖分類號：S885.1：F307.5 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2018）08-0148-04

Study on Liver-Protecting Function of Tussah

Male Moth Nutrient Solution on Mice

Fan Zuoqing， Zou Deqing， Wang Na， Guo Guang， Zhu Lin

（Sericultural Research Institute of Shandong Province， Yantai 264002， China）

Abstract To understand the liver-protecting function of tussah male moth nutrient solution， the alanine transaminase （ALT） activity assay and histopathological observation were used to study the effect of tussah male moth nutrient solution on liver injury of mice induced by carbon tetrachloride poisoning. The results showed that the tussah male moth nutrition in high dose group and low dose group both could decrease ALT level in serum of poisoning mice. The therapeutic effect was significant compared with the carbon tetrachloride model group（P<0.05）. And its effect was the same as that of positive drug Yiganning. The histopathologic examination showed that there were partial necrosis of liver cells and mild liver injury in low dose group. While the liver tissue structure was normal in high dose group. The liver cells arranged regularly， and no inflammation occurred. Therefore， it indicated that the nutrient solution of tussah moth could reduce the extent of liver cell degeneration and necrosis， and had a significant protective effect on the injured liver， and high doses were better.

Keywords Tussah male moth nutrient solution； Carbon tetrachloride； Liver protection； Alanine transaminase （ALT）； Function test

我國柞蠶資源豐富，近年來對柞蠶雄蛾的綜合加工利用已引起人們的高度重視，柞蠶雄蛾的相關保健品及藥物已被證明具有增強機體免疫力[1]、降血脂[2]、抗腫瘤[3]等多種功能?，F已開發(fā)出一些食品、保健品和醫(yī)藥品，取得了較大的經濟效益和社會效益。例如“延生護寶液”系以雄蠶蛾為主藥，配以人參、鹿茸、驢腎、仙茅、肉桂等多味中藥而成，對男女腎虛引起的疾病有一定的防治作用[4]。新型中藥復方制劑——柞蠶雄蛾口服液具有明顯增強免疫力，降低過氧脂質（Lpo）含量的抗衰老作用[5]。柞蠶雄蛾營養(yǎng)液是山東省蠶業(yè)研究所研究團隊選用初羽化、未交尾的柞蠶雄蛾為原料，通過酒精浸泡后低溫減壓抽提得到的富含生物活性的保健產品，現已完成了其提取工藝研究及成分檢測[6，7]。柞蠶雄蛾營養(yǎng)液可明顯降低由半胱氨酸所致高脂血癥小鼠血清中的血脂四項水平，因而對于高脂血癥有良好的治療效果，經試驗證明其有效成分對小鼠的細胞免疫和體液免疫均具有明顯的增強作用，對單核吞噬細胞系統(tǒng)功能也有一定提升作用[2]，并且還可逆轉放療后荷瘤大鼠Th1/Th2 漂移狀態(tài)，改善荷瘤機體免疫功能，增強抗腫瘤細胞免疫功能，可作為惡性腫瘤傳統(tǒng)放療中的輔助用藥[8-10]。本研究對柞蠶雄蛾營養(yǎng)液是否對小鼠具有保肝降酶的作用進行了試驗，以期為柞蠶雄蛾營養(yǎng)液的保健與藥用價值提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及主要儀器設備

柞蠶雄蛾營養(yǎng)液，山東省蠶業(yè)研究所2017年提取制備；雄性ICR小鼠，每只18～20 g，購自濟南金豐實驗動物有限公司；谷丙轉氨酶試劑盒，購自上海酶聯生物科技有限公司；四氯化碳（分析純），購自天津市富宇精細化工有限公司；乙肝寧顆粒，購自九芝堂股份有限公司。

HM325輪轉式切片機，購自賽默飛世爾（上海）儀器有限公司；機博視達拍照顯微鏡，購自深圳市博視達光學儀器有限公司；H2200R冷凍離心機，購自長沙湘儀離心機儀器有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 小鼠分組及給藥 將小鼠隨機分設5組，每組6只，A組為空白對照組，B組為四氯化碳模型組，C組為乙肝寧陽性對照組，給藥劑量為6.8 mg/（g·d），D組為柞蠶雄蛾營養(yǎng)液大劑量組，給藥劑量為0.010 mL/（g·d），E組為柞蠶雄蛾營養(yǎng)液小劑量組，給藥劑量為0.005 mL/（g·d）。除A、B組外，其他組按照對應藥物與劑量，每日灌胃小鼠1次，連續(xù)4 d，于最后一次灌胃1 h后，給小鼠腹腔注射2.5%四氯化碳油溶液0.010 mL/g（包括B組），20 h后每組隨機取3只小鼠摘眼取血于1.5 mL離心管中，靜置2 h后3 500 r/min離心，吸取上層血清，-20℃冷凍備用。

1.2.2 酶活性檢測與切片處理 用谷丙轉氨酶試劑盒測定小鼠血清中谷丙轉氨酶活性，結果以平均值±標準差表示。同時對各組選取的3只小鼠進行解剖，摘取肝臟組織，以純凈水洗去血污，4%福爾馬林固定，HE染色，石蠟包埋切片，在200×顯微鏡下進行病理組織學觀察、拍照，并對肝臟炎癥及損傷情況進行分析。

2 結果與分析

2.1 小鼠血清中谷丙轉氨酶活性測定結果

由表1看出，B組谷丙轉氨酶活性顯著高于其余各組（P<0.05），表明B組小鼠四氯化碳中毒達顯著水平；而C、D、E組谷丙轉氨酶活性都顯著低于B組（P<0.05），表明柞蠶雄蛾營養(yǎng)液大、小劑量組與乙肝寧藥品都對小鼠肝臟的保護作用達顯著水平；其中D組與A組無顯著差異，表明柞蠶雄蛾營養(yǎng)液大劑量組可將四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉氨酶降低到正常水平，因此認為柞蠶雄蛾營養(yǎng)液可明顯降低四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉氨酶水平，對小鼠肝細胞具有明顯保護作用。

2.2 小鼠肝組織切片結果

如圖1所示，A組小鼠肝組織結構正常，肝細胞排列均勻、規(guī)則，肝細胞未見變性、濁腫及壞死等形態(tài)學改變，匯管區(qū)也無急、慢性炎細胞浸潤。B組小鼠肝組織中可見肝細胞廣泛腫脹，部分肝細胞脂肪樣變性，甚至有較多的肝細胞壞死，壞死區(qū)可見較多的急、慢性炎細胞浸潤，說明小鼠受四氯化碳損傷嚴重。C組小鼠肝組織結構較正常，壞死區(qū)可見急、慢性炎細胞浸潤，肝組織病變程度輕于B組，重于D組，說明乙肝寧對四氯化碳所致小鼠的肝臟損傷有一定的減輕作用。D組小鼠肝組織結構正常，肝細胞排列較規(guī)則，腫脹不明顯，肝細胞中未見急、慢性炎細胞浸潤，說明大劑量柞蠶雄蛾營養(yǎng)液對四氯化碳所致小鼠的肝臟損傷有明顯減輕作用。E組小鼠肝組織中可見肝細胞輕度腫脹，部分肝細胞氣球樣變，肝組織中可見部分肝細胞點狀及小灶狀壞死，壞死區(qū)可見急、慢性炎細胞浸潤，但其壞死程度及范圍明顯輕于B組，說明小劑量柞蠶雄蛾營養(yǎng)液對四氯化碳所致小鼠的肝臟損傷有減輕作用。

2.3 小鼠肝臟炎癥及損傷情況分析

由表2可以看出，B組小鼠由于受四氯化碳毒性影響肝臟炎癥都達重度程度，肝損傷嚴重。C組受四氯化碳毒性影響肝臟炎癥中度或不明顯，肝損傷輕度或不明顯。D組受四氯化碳毒性影響肝臟炎癥輕度或不明顯，肝損傷情況極輕。E組受四氯化碳毒性影響肝臟炎癥中度，肝損傷情況輕度或中度。表明大、小劑量柞蠶雄蛾營養(yǎng)液均可起到保護小鼠肝臟不受四氯化碳損傷、減輕肝臟炎癥的功效，其中以大劑量柞蠶雄蛾營養(yǎng)液作用效果更佳。

3 討論與結論

柞蠶雄蛾營養(yǎng)液可明顯降低四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉氨酶水平，與B組相比，治療作用達顯著水平，且大劑量柞蠶雄蛾營養(yǎng)液可將四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉氨酶降低到正常水平。通過肝組織切片觀察，E組可見部分肝細胞點狀壞死，有輕度肝損傷，而D組小鼠肝組織結構正常，肝細胞排列規(guī)則，未見炎癥。因而表明柞蠶雄蛾營養(yǎng)液能減少肝細胞變性、壞死的程度和范圍，對受損傷的肝組織具有明顯保護作用，且大劑量柞蠶雄蛾營養(yǎng)液作用效果更佳。

柞蠶雄蛾營養(yǎng)液是一類富含蛋白質[6]、雄性激素類[11]、黃酮[12]等多種活性成分的復合營養(yǎng)制品，對其保肝降酶的功效成分還有待于進一步定性，其對保肝降酶的作用機理及對相關基因的調節(jié)作用也有待于進一步研究。

參 考 文 獻：

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