高效液相法同時測定飲料中5種合成著色劑

□ 李丹梅 貴港市食品藥品檢驗所

在日常試驗用高效液相色譜法測定食品中合成著色劑的國家標準GB/T5009.35-2016[1]時，發(fā)現(xiàn)該方法測定樣品的前處理方法以及梯度洗脫程序存在耗時長、步驟繁瑣等不足。因此，對該方法的前處理以及梯度洗脫程序加以改進，提高樣品檢測效率，能適應大批量檢測樣品的需求。

1 試劑

試劑配制：與GB 5009.35-2016中要求相同[2]。標準品：檸檬黃溶液0.500mg/mL、胭脂紅溶液0.500 mg/mL、莧菜紅溶液0.500 mg/mL、日落黃溶液0.500 mg /mL、亮藍溶液 0.500 mg /mL，以上均由中國計量科學研究院研制。合成著色劑標準使用液（50 μg/mL）：臨用時將標準品加一級實驗用水，配制成每毫升相當于50 μg的合成著色劑。

2 儀器

高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器），安捷倫Agilent1260，安捷倫科技（中國）有限公司；電子天平（千分），Quintix313-1CN 賽多利斯儀器（北京）系統(tǒng)有限公司；超聲波清洗器，SB-4200DT寧波新芝生物科技股份有限公司；固相萃取儀，QYCQ-24D上海喬躍電子有限公司。

3 方法

3.1 樣品處理

將固相萃取小柱分別用3 mL甲醇和3 mL水活化后備用。稱取5 g樣品（精確至0.001 g），含二氧化碳樣品超聲驅除二氧化碳。樣品溶液加檸檬酸或者氫氧化鈉調pH到6，加熱至60 ℃后上小柱，上樣后，用3 mL 60 ℃ pH為4的水洗滌，然后用3 mL甲醇-甲酸混合溶液洗滌，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸直至色素完全，收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸發(fā)至近干，加5.00 mL水溶解，經0.22 μm微孔濾膜過濾，進高效液相色譜儀分析。

3.2 色譜條件

3.2.1 儀器條件

色譜柱，Eclipse Plus C18；柱箱溫度，30 ℃；檢測器，二極管陣列檢測器；波長，254 nm，5.5 min變更波長為628 nm；柱流量，1.00 mL/min；流動相，甲醇、0.02 mol/L乙酸銨溶液；進樣體積，10 μL

3.2.2 梯度洗脫程序

梯度洗脫程序，見表1。

4 結果與分析

將標準溶液按上述色譜條件進樣分析，5種著色劑在7 min已經出峰完畢，并且得到完好的分離。

5種合成著色劑的相關系數(shù)均達到 0.999以 上。GB 5009.35-2016方法檢出限：檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃均為0.5 mg/kg，亮藍為0.2 mg/kg[2]。按照基線噪聲的3倍對應待測物濃度作為方法檢出限，5種合成著色劑的方法檢出限均優(yōu)于國標值。

表1 測定合成著色劑的洗脫程序

在樣品中分別加入一定量的標準溶液，通過回收方程計算得到回收率，5種合成著色劑回收率范圍在94.0%～99.2%。對同一濃度的標準溶液測量6次，計算精密度結果，精密度結果在0.22%～1.49%。

5 結語

本文用固相萃取小柱代替聚酰胺粉吸附著色劑，改進梯度洗脫流動相比例和時間，采用二極管陣列檢測器檢測，飲料中5種合成著色劑在7分鐘內得到完好分離，具有分析速度快、分離效果好、檢出限優(yōu)、加標回收率高等優(yōu)點，對大批量飲料樣品的檢測工作具有很好的實用價值。