一起由細(xì)菌污染引起的食物中毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分析

□ 白李明 楊志強(qiáng) 葉聿程 安溪縣疾病預(yù)防控制中心

2018 年 9 月 19 日 16∶00， 縣 疾病預(yù)防控制中心接到縣某醫(yī)院報(bào)告，縣某醫(yī)院消化內(nèi)科、兒科于9月19日14∶00左右收住有共同進(jìn)餐史的食源性疾病病人3例。接到報(bào)告后，縣疾控中心馬上啟動(dòng)預(yù)案，上報(bào)縣衛(wèi)計(jì)局，并迅速派出相關(guān)業(yè)務(wù)人員配合市場(chǎng)局展開調(diào)查和現(xiàn)場(chǎng)采樣工作。

本次事件屬于家庭式食物中毒事件，共同就餐人數(shù)5人，其中有3人食用了土豆絲餅，均出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、發(fā)熱、乏力等疑似食物中毒癥狀，2人未食用（未發(fā)?。；颊甙l(fā)病的潛伏期在9～12 h，3名患者均來自同一家庭，其中男性2人，女性1人，年齡最大55歲，最小7歲，平均年齡31歲?？h疾控中心實(shí)驗(yàn)室對(duì)采集的四份可疑食物中毒樣品進(jìn)行致病菌檢測(cè)，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

共采集可疑食物中毒樣品2份，采集患者肛拭子2份。

1.2 培養(yǎng)基及儀器試劑

XLD瓊脂，廣東環(huán)凱；營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（平板），廣東環(huán)凱；沙門氏菌生化鑒定盒（GB標(biāo)準(zhǔn)），廣東環(huán)凱；沙門氏菌屬診斷血清，寧波天潤(rùn)；革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡，梅里埃診斷產(chǎn)品（上海）有限公司；SC增菌液，廣東環(huán)凱；沙門、志賀、副溶、金匍核酸檢測(cè)試劑盒，生科原，深圳寶安區(qū)；生化培養(yǎng)箱，上海佳勝實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；HR40-ⅡA2型Haier生化安全柜，青島海爾特種電器有限公司；Nikon生物顯微鏡，Nikon；StepOne實(shí) 時(shí) 熒 光 定 量PCR儀，Applied Biosystems；Vitek2 Compact全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)，生物梅里埃中國(guó)有限公司。

1.3 檢驗(yàn)方法

根據(jù)GB4789.4-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》、GB4789.5-2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》、GB4789.10-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》、GB4789.7-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》的預(yù)增菌、增菌、分離、鏡檢、生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)[1-3]，最后StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀和 Vitek2 Compact全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)上機(jī)完成確認(rèn)試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 樣品中沙門氏菌檢驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)GB4789.4-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》進(jìn)行可疑食物中毒樣品的檢測(cè)。從圖1、2、3可以看出，存在可疑菌株在XLD上生長(zhǎng)，菌落形態(tài)均呈全部黑色的菌落；從圖4可以看出，通過革蘭氏染色鏡檢，菌株被染成紫紅色，為革蘭氏陰性菌；從圖5可以看出，經(jīng)過StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀測(cè)定，各樣品分離到的菌株均與陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品一致，為沙門氏菌；通過Vitek2 Compact全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)上機(jī)確認(rèn)均為沙門氏菌。

圖1 肛拭子01（G01）在XLD上的菌落

圖2 肛拭子02（G02）在XLD上的菌落

圖3 剩余食物在XLD上的菌落

圖4 可疑菌株革蘭氏染色（10×100）

圖5 各樣品分離到的菌株在熒光定量PCR上的圖譜

2.2 樣品中志賀氏菌檢驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)GB4789.5-2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》進(jìn)行可疑食物中毒樣品的檢測(cè)和StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的測(cè)定（見圖5），檢測(cè)結(jié)果均未檢出志賀氏菌。

2.3 樣品中副溶血性弧菌檢驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)GB4789.7-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》進(jìn)行可疑食物中毒樣品的檢測(cè)和StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的測(cè)定（見圖5），檢測(cè)結(jié)果均未檢出副溶血性弧菌。

2.4 樣品中金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)結(jié)果

GB4789.10-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》進(jìn)行可疑食物中毒樣品的檢測(cè)和StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的測(cè)定（見圖5），檢測(cè)結(jié)果均未檢出金黃色葡萄球菌。

3 討論

根據(jù)縣疾控中心流行病學(xué)調(diào)查、病人的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)結(jié)果，該起可疑食物中毒事件可判定為一起沙門氏菌污染土豆絲餅所致的食物中毒，其判定依據(jù)如下：①患者癥狀以惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉（水樣便）、發(fā)熱、乏力為主，潛伏期在9～12h，符合沙門氏菌食物中毒的特點(diǎn)；②發(fā)病者3人均食用了土豆絲餅，有共同進(jìn)餐史，一起進(jìn)餐但未食用土豆絲餅的2人未發(fā)?。虎蹆擅颊叩母厥米蛹盎颊呤秤檬Ｏ碌耐炼菇z餅均檢出沙門氏菌。

沙門氏菌的最適繁殖溫度為37 ℃，在20 ℃以上即能大量繁殖，對(duì)熱抵抗力不強(qiáng)，在60 ℃10～20 min即可被殺死。沙門氏菌食物中毒易發(fā)生于夏季5-9月，易受沙門氏菌污染的食品主要為動(dòng)物食品，如熟肉類、蛋類、涼菜，被污染的食品在夏季溫度較高下存放時(shí)間過長(zhǎng)，并在食用前未徹底加熱，將會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌大量生長(zhǎng)繁殖，食用后易引起食物中毒。因此，低溫儲(chǔ)存食品，生熟嚴(yán)格分開，食用時(shí)要煮熟、煮透，即能防止沙門氏菌所致的食物中毒。