TRAF4 mRNA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血白細(xì)胞中的表達(dá)

賀 丹柴華旗

（1 常熟市第二人民醫(yī)院腎內(nèi)科，江蘇 常熟 215500；2 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，江蘇 蘇州 215000）

TRAF4 mRNA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血白細(xì)胞中的表達(dá)

賀 丹1柴華旗2

（1 常熟市第二人民醫(yī)院腎內(nèi)科，江蘇 常熟 215500；2 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，江蘇 蘇州 215000）

目的探討腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子4（TRAF4）mRNA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者外周血白細(xì)胞中的表達(dá)是否存在異常。方法收集2010年8月至20012年9月我院腎內(nèi)科、風(fēng)濕科院住院SLE女性患者25例，所有患者均符合1982年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，SLEDAI評(píng)分在4～26分之間；以健康獻(xiàn)血者15例為對(duì)照組。取外周靜脈血，分離外周血白細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，以β肌動(dòng)蛋白（β-actin）為內(nèi)參照，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)半定量檢測(cè)TRAF4 mRNA在外周血白細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果SLE患者外周血白細(xì)胞TRAF4 mRNA的表達(dá)低于正常人（P＜0.05）。結(jié)論TRAF4 mRNA可能參與了SLE的發(fā)生發(fā)展。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；TRAF4；白細(xì)胞；RT-PCR

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種典型的自身免疫性疾病，存在多種免疫學(xué)異常[1]。有文獻(xiàn)報(bào)道約50%的SLE患者發(fā)生中性粒細(xì)胞凋亡增加，致自身抗原增加，與疾病的活動(dòng)程度正相關(guān)，其發(fā)生機(jī)制與Fas/ FasL復(fù)合物有關(guān)[2]，而TRAF4過表達(dá)可以抑制由Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。TRAF4是TRAFs家族成員之一，在正常人外周血中只有粒細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)TRAF4，所以我們選用外周血白細(xì)胞作為研究對(duì)象分析SLE患者TRAF4 mRNA的表達(dá)是否存在異常。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年8月至20012年9月我院腎內(nèi)科住院SLE女性患者25例，年齡14～56歲，所有患者均符合1982年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，采用Bombardier等的SLE活動(dòng)指數(shù)[3]（SLEDAI）評(píng)價(jià)疾病活動(dòng)程度，患者評(píng)分在4～26分之間。以健康獻(xiàn)血者15例為對(duì)照組，均為女性，18～42歲。

1.2 治療方法

取外周靜脈血，EDTAK2抗凝，離心后獲得白細(xì)胞；采用Trizol總RNA一步法提取細(xì)胞總RNA；用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶合成第一鏈cDNA；TRAF4、β-actin引物設(shè)計(jì)、合成由上海生物工程公司設(shè)計(jì)并合成。TRAF4引物序列為ACACCATCCAGAGCCACCAG（sense）和ACCACTGCCATTGCCATTGAG（antisense），產(chǎn)物大小為461bp；β-actin：GGGACCTGACTGACTACCTC（sense）和GCATTTGCGGTGGACGATGG（antisense）。產(chǎn)物大小為575bp；每組均以β-actin作內(nèi)參照，分管進(jìn)行擴(kuò)增；取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像儀（VILBERLOURMAT）上對(duì)產(chǎn)物定量掃描，參照電泳Marker的條帶位置判斷目的條帶。以目的基因與內(nèi)對(duì)照β-actin的掃描值之比為該基因相對(duì)表達(dá)水平。擴(kuò)增PCR產(chǎn)物送上?；瞪锛夹g(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察SLE患者外周血白細(xì)胞中TRAF4mRNA的表達(dá)是否存在異常。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，組間比較采用t檢驗(yàn)。結(jié)果以P＜0.05為顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用SPSS12.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

TRAF4 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)上海基康生物技術(shù)有限公司測(cè)序，結(jié)果與原基因序列符合。SLE患者外周血白細(xì)胞TRAF4 mRNA表達(dá)見圖1。

圖1 SLE患者外周血白細(xì)胞TRAF4 mRNA表達(dá)（1-4：SLE患者；5-8：正常對(duì)照；M：Marker）

本文對(duì)SLE患者以及正常對(duì)照組外周血白細(xì)胞中TRAF4 mRNA的表達(dá)進(jìn)行了半定量RT-PCR分析，用β-actin為內(nèi)參照，結(jié)果以百分?jǐn)?shù)形式出現(xiàn)，兩組TRAF4 mRNA的表達(dá)分別為（30.01±19.05）%和（45.58±11.65）%，SLE患者TRAF4 mRNA表達(dá)低于正常對(duì)照組，P=0.008，兩組之間存在顯著差異（P＜0.05）。見表1。

表1 SLE患者外周血白細(xì)胞TRAF4 mRNA表達(dá)量(χ—±s)

3 討 論

凋亡異常及凋亡細(xì)胞清除障礙在SLE的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。SLE患者外周血粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞凋亡增多，加上凋亡細(xì)胞清除障礙，使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)釋放入血，成為自身抗原[4]，促進(jìn)自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞激活、抗自身抗體產(chǎn)生和免疫復(fù)合物形成[1]，從而促進(jìn)SLE的發(fā)生發(fā)展。

TRAF4是TRAFs家族成員之一，最早是1995年Regnier等在乳腺癌上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)的。在人外周血粒細(xì)胞TRAF4表達(dá)強(qiáng)陽性，單核細(xì)胞陽性[5]，在胚胎發(fā)育過程中起重要的生物學(xué)作用。

Fas在免疫系統(tǒng)中表達(dá)廣泛，介導(dǎo)外周血單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的凋亡增加[4]，在SLE的發(fā)病中起重要作用。而TRAF4過表達(dá)能抑制由Fas誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，具有抗凋亡作用[6]。此外，TRAF4能擴(kuò)大糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNFR（GITR）介導(dǎo)的NF-κB活化，提高T細(xì)胞的活性，在調(diào)節(jié)由自身抗原、外來抗原觸發(fā)的免疫反應(yīng)中起重要作用；在體內(nèi)或體外使用抗GITR的抗體處理后可以誘發(fā)自身免疫性疾病的發(fā)生[7]。因此TRAF4mRNA表達(dá)下調(diào)，可能通過抑制GITR的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與SLE等自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。綜上所述，TRAF4mRNA在SLE患者外周血白細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，可能通過促進(jìn)Fas介導(dǎo)的外周血粒細(xì)胞和單核細(xì)胞凋亡增加，導(dǎo)致自身抗原增加，免疫復(fù)合物形成以及自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞激活等，從而參與SLE的發(fā)生和發(fā)展。

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1671-8194（2013）17-0126-02