UPLC法測(cè)定津力達(dá)顆粒中苦參堿的含量

王淑靜 范文成 王剛 李寧

津力達(dá)顆粒為石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司研發(fā)的中藥顆粒劑新藥, 現(xiàn)已收載于2015年版《中國(guó)藥典》第一部, 處方由苦參、人參、黃精、丹參、黃連、淫羊藿等17味中藥組成,具有益氣養(yǎng)陰, 健脾運(yùn)津, 臨床用于治療2型糖尿病［1］。本文采用UPLC法對(duì)其苦參堿進(jìn)行了定量研究, 為本公司該品種質(zhì)量監(jiān)控提供了新的檢測(cè)手段。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 超高效液相色譜儀( Waters, ACQuity H-class型,TUV檢測(cè)器)；色譜柱(氨基柱：Thermo , APS-2 HYPERSIL,100 mm×2.1 mm, 3 μm)；超聲波清洗器KQ-500E(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑 苦參堿對(duì)照品(批號(hào)：110805-201709, 購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院)；津力達(dá)顆粒(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司 , 批號(hào) ：A1510010、A1605002、A1706002、A1804011、A1804012、A1805001)；磷酸為優(yōu)級(jí)純, 其他試劑均為色譜純。

2 方法與結(jié)果［1-3］

2.1 色譜條件 以乙腈-無(wú)水乙醇-2%磷酸溶液(88∶6∶6 )為流動(dòng)相, 檢測(cè)波長(zhǎng) 210 nm, 流速 0.2 ml/min, 進(jìn)樣體積為2 μl, 理論塔板數(shù)按苦參堿計(jì)算應(yīng)≥7000。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液制備 取供試品適量, 研細(xì), 精密稱取約1.0 g, 置具塞三角瓶中, 精密加入85%甲醇50 ml, 密塞, 精密稱定重量, 超聲30 min, 放至室溫, 再精密稱定重量, 用85%甲醇補(bǔ)足減失的重量, 搖勻, 濾過(guò), 精密量取續(xù)濾液25 ml, 蒸干, 殘?jiān)铀? ml使溶解, 轉(zhuǎn)移至中性氧化鋁柱(120～150目,4 g, 柱內(nèi)徑1 cm), 再用甲醇少量多次洗脫至10 ml量瓶中, 并用甲醇稀釋至刻度, 搖勻, 濾過(guò), 取續(xù)濾液, 即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苦參堿對(duì)照品15.82 mg,置100 ml容量瓶中, 加乙腈-無(wú)水乙醇(80∶20)使溶解, 并稀釋至刻度, 搖勻, 作為對(duì)照品溶液。再精密吸取10 ml于100 ml量瓶中, 加乙腈-無(wú)水乙醇(80∶20)稀釋至刻度, 搖勻, 作為線性對(duì)照品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取線性對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、2.5、3.0 μl注入U(xiǎn)PLC, 按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X), 峰面積(Y)為縱坐標(biāo), 進(jìn)行線性回歸 , 回歸方程為：Y=10182X-4361, r=0.9992, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：苦參堿在7.910～47.64 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見(jiàn)表1。

表1 線性考察結(jié)果

2.4 精密度考察 吸取2.2.2中的對(duì)照品溶液, 按2.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次, 苦參堿峰面積的RSD為0.58%, 說(shuō)明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 供試品溶液放置0、4、8、12、16、20、24 h, 按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定, 苦參堿峰面積的RSD 為1.23%, 說(shuō)明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取津力達(dá)顆粒(批號(hào)：A1804012), 按2.2.1制備供試品溶液, 平行制備6份, 按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定,苦參堿峰面積的RSD 為0.67%, 說(shuō)明該方法的重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn) 取已知含量的津力達(dá)顆粒(批號(hào)：A1804012), 研細(xì), 精密稱取約0.5 g, 平行稱取9份, 按對(duì)照品加入量與供試品中苦參堿量之比1.5∶1、1∶1、0.5∶1, 按2.2.1制備供試品溶液, 按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定, 平均回收率為99.6%, 測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1, 圖2 , 表2。

圖1 苦參堿對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.8 陰性試驗(yàn) 按處方和工藝制備除苦參外的陰性樣品,按2.2.1制備陰性供試品, 分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液,陰性供試品溶液, 按2.1色譜條件進(jìn)行試驗(yàn), 結(jié)果表明：陰性樣品無(wú)干擾。

2.9 樣品含量測(cè)定 取6批津力達(dá)顆粒, 按2.1和2.2.1測(cè)定含量, 結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果(%)

3 討論

3.1 制備對(duì)照品溶劑的考察 在日常生產(chǎn)檢測(cè)該品種過(guò)程中, 發(fā)現(xiàn)不同廠家的色譜柱, 經(jīng)常出現(xiàn)對(duì)照品和樣品保留時(shí)間漂移的現(xiàn)象, 為解決此問(wèn)題, 對(duì)制備對(duì)照品的溶劑進(jìn)行了考察, 分別用甲醇、無(wú)水乙醇、乙腈、鹽酸-甲醇(1∶25)、乙腈-無(wú)水乙醇(80∶20)配制對(duì)照品, 發(fā)現(xiàn)除乙腈-無(wú)水乙醇(80∶20)溶劑外, 其余溶劑配制的對(duì)照品, 苦參堿的保留時(shí)間一直在漂移, 與供試品的保留時(shí)間差異較大, 難以穩(wěn)定下來(lái)。故選擇乙腈-無(wú)水乙醇(80∶20)作為制備對(duì)照品的溶劑。

3.2 氧化苦參堿含量的考察 本文對(duì)效期內(nèi)樣品的氧化苦參堿含量也進(jìn)行了考察, 發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿的含量較低, 且隨著留樣時(shí)間的增長(zhǎng), 氧化苦參堿含量在逐漸降低, 苦參堿的含量在逐漸增大, 說(shuō)明氧化苦參堿轉(zhuǎn)化為苦參堿。因此, 本文只對(duì)苦參堿的含量測(cè)定進(jìn)行了定量研究。曾有文獻(xiàn)報(bào)道［4］,氧化苦參堿與原兒茶醛類還原性物質(zhì)作用, 轉(zhuǎn)化為苦參堿,表3的試驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。

由于我公司該品種生產(chǎn)量較大, 采用UPLC法測(cè)定苦參堿的含量, 既快速, 又準(zhǔn)確, 大大提高了工作效率, 同時(shí)為該產(chǎn)品增加了新的檢測(cè)手段。