肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)相關(guān)蛋白和縫隙連接蛋白水平相關(guān)性研究

劉雪梅 駱 雯 劉 黎

遂寧市中心醫(yī)院腫瘤科 (四川 遂寧， 629000)

肝細(xì)胞癌(HCC)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，其預(yù)后較差，并且是中國東南沿海地區(qū)腫瘤相關(guān)死亡的首要原因[1，2]。HCC的發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢，手術(shù)切除或肝移植仍然是唯一可能達(dá)到根治性治療的措施[3]。惡性腫瘤切除術(shù)的根治程度與殘留腫瘤的分級相關(guān)，其中R0切除是肝細(xì)胞癌治療的最主要手段，但即使是根治性切除的患者仍有較高的術(shù)后復(fù)發(fā)率(5年復(fù)發(fā)率高達(dá) 70%)，嚴(yán)重影響患者的長期生存[4]?；|(zhì)金屬蛋白酶是細(xì)胞外基質(zhì)降解與重構(gòu)的關(guān)鍵酶，與多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移、惡化和增殖過程密切相關(guān)[5，6]。本研究對肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與血清中細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)酶和縫隙連接蛋白(Connexins)水平相關(guān)性進(jìn)行研究，為臨床診斷和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2006年1月至2016年12月我院接受肝細(xì)胞瘤R0切除的120例患者的臨床資料，其中男68例，女52例，年齡60～72歲，平均(66.6±7.9)歲。所有患者均實(shí)施肝部分切除術(shù)，且每位患者臨床病理資料完整?；颊呒{入標(biāo)準(zhǔn)：①初發(fā)的原發(fā)性肝細(xì)胞癌，術(shù)前未做過任何治療，且不同時(shí)伴發(fā)其他器官腫瘤；②術(shù)中檢查無淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；③術(shù)前肝功能Child-Pugh分級A級或部分肝功能較好的 B 級患者；④均為限期手術(shù)且術(shù)中不聯(lián)合其他器官切除術(shù)(除膽囊外)。所有病例均由術(shù)后病理切片證實(shí)為原發(fā)性肝細(xì)胞癌。

1.2 手術(shù)治療方法 依據(jù)患者腫瘤的發(fā)生位置、肝臟的儲備功能和患者經(jīng)切除術(shù)后肝臟剩余容量決定采取的肝切除術(shù)。手術(shù)原則上采用解剖性肝臟切除，但對肝臟儲備功能較差的患者和肝臟切除術(shù)后剩余肝容量不足的患者采用部分肝臟切除術(shù)。對有血管侵犯的患者，在術(shù)后30d內(nèi)實(shí)施經(jīng)皮肝動脈栓塞化療術(shù)(順鉑40mg、吡柔比星40mg、碘化油5ml)。

1.3 分析指標(biāo) 分析患者預(yù)后與血清基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2、MMP9和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑TIMP1、TIMP2及Connexin40、Connexin43蛋白、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、AFP和CEA水平的相關(guān)性。

1.4 隨訪 患者術(shù)后3個(gè)月內(nèi)每月復(fù)查1次，此后每2個(gè)月復(fù)查1次，未能按時(shí)復(fù)查患者進(jìn)行電話回訪。隨訪日期截至2016年12月或患者死亡時(shí)。懷疑患者發(fā)生肝內(nèi)復(fù)發(fā)或肝外轉(zhuǎn)移時(shí)，采取上腹部CT、肺部CT及MR檢查進(jìn)行確診。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用SPSS 18.0進(jìn)行，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)用計(jì)數(shù)和百分比表示。分類變量采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法分析，Kaplan-Meier法計(jì)算患者術(shù)后生存率，并繪制總體生存曲線。生存曲線間的比較采用Log-Rank檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 120例患者預(yù)后與血清MMPs水平的相關(guān)性 患者預(yù)后與血清MMP2、MMP9水平密切相關(guān)，患者生存率隨著MMP2和MMP9蛋白表達(dá)的增強(qiáng)，逐漸下降，見圖1、2。

圖1 120例患者預(yù)后與血清MMP2水平的相關(guān)性圖

圖2 120例患者預(yù)后與血清MMP9水平的相關(guān)性圖

2.2 肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與血清TIMPs水平的相關(guān)性 患者預(yù)后與TIMP1和TIMP2水平密切相關(guān)，隨著血清TIMP1和TIMP2蛋白表達(dá)的增強(qiáng)，患者的生存率下降，見圖3、4。

圖3 120例患者預(yù)后與血清TIMP1水平的相關(guān)性圖

圖4 120例患者預(yù)后與血清TIMP2水平的相關(guān)性圖

2.3 肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與血清縫隙連接蛋白水平的相關(guān)性 患者預(yù)后與血清Connexin40和血清Connexin43水平密切相關(guān)，隨著血清Connexin40和Connexin43蛋白表達(dá)的降低，患者的生存率下降，見圖5、6。

圖5 120例患者預(yù)后與血清Connexin40水平的相關(guān)性圖

圖6 120例患者預(yù)后與血清Connexin43水平的相關(guān)性圖

2.4 120例患者預(yù)后與血常規(guī)指標(biāo)的相關(guān)性 患者預(yù)后與淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)密切相關(guān)，隨著淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的降低，患者的生存率下降，見圖7。

圖7 120例患者預(yù)后與淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的相關(guān)性圖

2.5 肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與血清AFP和CEA水平的相關(guān)性 患者預(yù)后與AFP和CEA表達(dá)水平密切相關(guān)，隨著血清AFP和CEA水平的升高，患者的生存率下降，見圖8、9。

圖8 120例患者預(yù)后與血清AFP水平的相關(guān)性圖

圖9 120例患者預(yù)后與血清CEA水平的相關(guān)性圖

3 討論

肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，也是引起死亡的最主要的惡性腫瘤。隨著現(xiàn)代診療技術(shù)的進(jìn)步，肝癌患者的生存率有所提高，但患者術(shù)后高復(fù)發(fā)率仍是影響手術(shù)效果和患者預(yù)后的關(guān)鍵因素。本研究在對肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與血清中細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)酶和Connexins蛋白水平相關(guān)性進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與血清MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、Connexin40、Connexin43水平、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清AFP和CEA水平密切相關(guān)，且隨著MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、AFP和CEA蛋白表達(dá)的增強(qiáng)及Connexin40、Connexin43、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的降低，患者的預(yù)后變差。結(jié)果表明，肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而與Connexins水平呈正相關(guān)。

縫隙連接蛋白是腫瘤細(xì)胞物質(zhì)、能量和信息交換的主要通道，也是腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡過程的關(guān)鍵調(diào)控蛋白[7，8]。在分析BRMS1和Connexin43蛋白異常表達(dá)與甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)縫隙連接蛋白表達(dá)異常與甲狀腺癌的發(fā)病及患者的預(yù)后過程密切相關(guān)[9]，且Connexin43基因修飾對人膽囊癌GBC-SD細(xì)胞增殖和遷移能力產(chǎn)生明顯的影響[10]。以往的研究發(fā)現(xiàn)牽牛子酒提取物對Lewis肺癌的抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移作用與其調(diào)控腫瘤細(xì)胞縫隙連接蛋白的表達(dá)有關(guān)[11]，而蛋白酶活化受體1活化或抑制對鼻咽癌細(xì)胞遷移侵襲的影響也與其調(diào)控縫隙連接蛋白43的表達(dá)有關(guān)[12]。汪靈芝等[13]也發(fā)現(xiàn)依托咪酯對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞縫隙連接通訊的影響主要是通過調(diào)節(jié)縫隙連接蛋白表達(dá)實(shí)現(xiàn)。本研究也發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后隨著Connexin 40和Connexin 43蛋白表達(dá)的降低而變差。

基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑的表達(dá)是腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程的主要調(diào)控蛋白，也與患者的臨床分期和預(yù)后密切相關(guān)[14，15]。以往的研究發(fā)現(xiàn)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1、MMP2及MMP9與胃癌患者的臨床分期及預(yù)后密切相關(guān)[16]，且脂聯(lián)素與MMP9在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)與腫瘤血管生成過程緊密聯(lián)系[17]。同時(shí)，MMP2、MMP9及其抑制劑MMI-166參與了惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程[18]，且MMP9的表達(dá)水平與兒童及成人中耳膽脂瘤的病變過程有關(guān)[19]。本研究也發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后隨著MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2蛋白表達(dá)的增強(qiáng)而變差。

因此，肝細(xì)胞癌R0切除術(shù)后患者預(yù)后與基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而與Connexins水平呈正相關(guān)。