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    高溫環(huán)境對SD大鼠散熱機(jī)制的影響

    2018-11-02 10:34:42王炳志劉春花姜劼琳姚鳳云
    動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2018年10期
    關(guān)鍵詞:血清影響

    王炳志,鄭 蒙,劉春花,姜劼琳,姚鳳云

    (江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,江西南昌330004)

    在高氣溫或同時(shí)存在高濕度或熱輻射的不良?xì)庀髼l件下進(jìn)行的生產(chǎn)勞動,通稱為高溫作業(yè)[1]。高溫作業(yè)是一種影響范圍很廣的職業(yè)性有害因素,長期在高溫環(huán)境下工作會對人體健康造成危害,引起體溫、消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等產(chǎn)生一系列改變[2-4],可因熱平衡失調(diào)而導(dǎo)致以中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害為主的職業(yè)性中暑,如救治不及時(shí),可導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥甚至死亡[5]。下丘腦的視前區(qū)是機(jī)體的體溫調(diào)節(jié)中樞,其中多種神經(jīng)遞質(zhì)可能參與體溫調(diào)節(jié)功能[6],本試驗(yàn)主要從散熱機(jī)制方面探討高溫環(huán)境對正常大鼠和中樞神經(jīng)麻醉大鼠相關(guān)指標(biāo)的影響。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 SPF級SD雄性大鼠,280 g~300 g,購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司,許可證號:SCXK(湘)2013—0004。

    1.1.2 試劑 三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、促甲狀腺激素釋放激素(thyrotropin-releasing hormone,TRH)、腎上腺素(epinephrine,EPI)、乙酰膽堿(acetylcholine,ACH)試劑盒,武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司產(chǎn)品,批號分別為L161107474、L161010395、L161122986、L161125068、L161116874、 L161125069;β2受體抗體(一抗),Abcam公司產(chǎn)品;免疫組化試劑盒(通用),北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

    1.1.3 主要儀器 RXZ智能型人工氣候箱,寧波江南儀器公司產(chǎn)品; Chromate 4300酶標(biāo)儀,美國Awareness公司產(chǎn)品;CT14RD低溫冷凍離心機(jī),上海天美公司產(chǎn)品;RM2245型切片機(jī),德國徠卡公司產(chǎn)品;Olympus BX6光學(xué)顯微鏡,日本奧林巴斯公司產(chǎn)品。

    1.2 方法

    1.2.1 動物分組 按體重將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為4組,即常溫正常對照組、高溫正常對照組、常溫中樞麻醉組、高溫中樞麻醉組,每組10 只。

    1.2.2 飼養(yǎng)環(huán)境 ①常溫正常對照組和常溫中樞麻醉組置于常溫(23℃~25℃)空氣流通處飼養(yǎng);②高溫正常對照組和高溫中樞麻醉組置于人工氣候箱中飼養(yǎng),儀器條件設(shè)置為白天溫度32 ℃,相對濕度55%;夜晚溫度30℃,相對濕度66%;晝夜交替光照,24 h為1個(gè)循環(huán)。

    1.2.3 試驗(yàn)方法 各組動物均普通飼料喂養(yǎng),正常飲水,連續(xù)30 d。每3天稱體重1次,每2天稱墊料1次,并用墊料差異法計(jì)算每只動物平均日排泄物量,每2天計(jì)算1次每只動物平均日攝食量。各組動物禁食不禁水14 h,稱重,常溫中樞麻醉組和高溫中樞麻醉組動物戊巴比妥鈉(30 mg/kg)中樞麻醉,2 h后再用氨基甲酸乙酯(1 g/kg)麻醉,其他組均用氨基甲酸乙酯(1 g/kg)麻醉,打開腹腔,腹主動脈采血10 mL,室溫靜置30 min,6 500 r/min離心10 min,分離血清,采用ELISA檢測T3、T4、TSH、TRH、EPI、ACH含量;采血后迅速剝離腹主動脈上神經(jīng)組織并剪取一段3 cm長血管,采用免疫組化方法檢測腹主動脈β2受體表達(dá)。

    2 結(jié)果

    2.1 對體重的影響

    由表1可知,試驗(yàn)前各組體重差異不顯著,飼養(yǎng)30 d后,各高溫組大鼠體重均極顯著低于各常溫組(P<0.01)。

    表1 溫度對大鼠體重的影響

    注:與常溫正常組比較,﹡﹡P<0.01;與常溫中樞麻醉組比較,△△P<0.01。

    Noet:Compare with the normal temperature control group,﹡﹡P<0.01;Compare with the normal temperature central anesthesia group,△△P<0.01.

    2.2 對攝食量、排泄物的影響

    采用墊料差異法,由表2可知,除常溫中樞麻醉組外,各組大鼠攝食量均顯著低于常溫正常對照組(P<0.05或P<0.01),與常溫中樞麻醉組相比,高溫中樞麻醉組大鼠攝食量極顯著降低(P<0.01);各高溫組大鼠排泄物量均顯著高于各常溫組(P<0.05)。

    2.3 對大鼠血清T3、T4含量的影響

    從表3可知,各組大鼠血清T3含量均低于常溫正常對照組,其中常溫中樞麻醉組大鼠血清T3含量降低尤為顯著(P<0.01);各組大鼠血清T4含量均低于常溫正常對照組,但無顯著性差異,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而高溫中樞麻醉組大鼠血清T4含量高于常溫中樞麻醉組,差異顯著(P<0.05)。

    表2 溫度對大鼠攝食量、排泄物的影響

    注:與常溫正常組比較,﹡P<0.05,﹡﹡P<0.01;與常溫中樞麻醉組比較,△P<0.05,△△P<0.01。

    Noet:Compare with the normal temperature control group,﹡P<0.05,﹡﹡P<0.01;Compare with the normal temperature central anesthesia group,△P<0.05,△△P<0.01.

    表3 溫度對大鼠血清T3、T4含量的影響

    注:與常溫正常組比較,﹡﹡P<0.01;與常溫中樞麻醉組比較,△P<0.05。

    Noet:Compare with the normal temperature control group,﹡﹡P<0.01;Compare with the normal temperature central anesthesia group,△P<0.05.

    2.4 對大鼠血清TRH、TSH含量的影響

    由表4可知,各組大鼠血清TRH含量均低于常溫正常對照組,但無顯著性差異;各組大鼠血清TSH含量均低于常溫正常對照組,其中常溫中樞麻醉組和高溫中樞麻醉組大鼠血清TSH含量降低極為顯著(P<0.01),而各高溫組大鼠血清TSH含量明顯高于常溫中樞麻醉組(P<0.05或P<0.01)。

    表4 溫度對大鼠血清TRH、TSH含量的影響

    注:與常溫正常組比較,﹡﹡P<0.01;與常溫中樞麻醉組比較,△P<0.05,△△P<0.01。

    Noet:Compare with the normal temperature control group,﹡﹡P<0.01;Compare with the normal temperature central anesthesia group,△P<0.05,△△P<0.01.

    2.5 對大鼠血清ACH、EPI含量的影響

    由表5可知,與常溫正常對照組相比較,各高溫組大鼠血清ACH均呈升高趨勢,但差異不顯著,而常溫中樞麻醉組大鼠血清ACH含量極顯著性降低(P<0.01);與常溫中樞麻醉組相比,各高溫組大鼠血清ACH含量顯著升高(P<0.05或P<0.01)。除高溫正常對照組外,其余各組大鼠血清EPI含

    量均低于常溫正常對照組,但差異不顯著。

    2.6 對血管β2受體表達(dá)的影響

    從圖1和表6可知,各組平均光密度值均低于常溫正常對照組,其中高溫正常對照組和常溫中樞麻醉組差異著(P<0.05或P<0.01),而常溫正常對照組和高溫正常對照組大鼠血管β2受體表達(dá)光密度值均顯著高于常溫中樞麻醉組(P<0.05或P<0.01)。

    表5 溫度對大鼠血清ACH、EPI含量的影響

    注:與常溫正常組比較,﹡﹡P<0.01;與常溫中樞麻醉組比較,△P<0.05,△△P<0.01。

    Noet:Compare with the normal temperature control group,﹡﹡P<0.01;Compare with the normal temperature central anesthesia group,△P<0.05,△△P<0.01.

    A.常溫正常對照;B.高溫正常對照;C.常溫中樞麻醉;D.高溫中樞麻醉

    A.Normal temperature control;B.High temperature normal control;C.Normal temperature central anesthesia;D.High temperature central anesthesia

    圖1 血管β2受體表達(dá)免疫組化結(jié)果(200×)

    注:與常溫正常組比較,﹡P<0.05,﹡﹡P<0.01;與常溫中樞麻醉組比較,△P<0.05,△△P<0.01。

    Noet:Compare with the normal temperature control group,﹡P<0.05,﹡﹡P<0.01;Compare with the normal temperature central anesthesia group,△P<0.05,△△P<0.01.

    3 討論

    下丘腦是維持體溫穩(wěn)定的主要腦區(qū)。外周感受器能感受與引起全身對熱與冷的反應(yīng),全身或局部加熱或冷卻引起的反射必須經(jīng)過下丘腦的作用激起相應(yīng)的反射活動,破壞下丘腦,這些刺激只引起局部的反應(yīng)。下丘腦不僅能傳導(dǎo)興奮,而且能分泌激素,包括促甲狀腺素釋放激素、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素等,促進(jìn)垂體中激素的合成和分泌,它把內(nèi)臟活動與其他生理活動聯(lián)系起來,調(diào)節(jié)著體溫、攝食、水平衡、血糖和內(nèi)分泌腺活動等重要的生理功能[7],因此本試驗(yàn)按高溫、中樞麻醉兩因素分為常溫正常對照組、高溫正常對照組、常溫中樞麻醉組、高溫中樞麻醉組4個(gè)組。

    高溫環(huán)境會引起人體消化液(如胃液、胰液、膽汁、腸液等)分泌量的減少,消化酶活性及胃液酸度的降低,胃腸道蠕動的減慢,攝食中樞受到抑制,導(dǎo)致食欲減退及消化不良[4]。當(dāng)環(huán)境溫度超過體表溫度時(shí),蒸發(fā)散熱在維持體溫恒定中發(fā)揮重要的作用,出汗量與高溫環(huán)境之間存在明顯相關(guān)性[8]。發(fā)汗是人體蒸發(fā)散熱的重要方式,嚙齒類動物主要依賴分泌唾液和理毛行為增加蒸發(fā)散熱[9]。試驗(yàn)結(jié)果表明,高溫降低大鼠體重和攝食量,而增加排泄量,中樞神經(jīng)麻醉對以上結(jié)果均無明顯協(xié)同作用。

    甲狀腺是機(jī)體物質(zhì)代謝及生長發(fā)育的重要內(nèi)分泌器官,甲狀腺激素的分泌受中樞神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控。下丘腦產(chǎn)生促甲狀腺激素釋放激素(TRH) 經(jīng)神經(jīng)細(xì)胞釋放到垂體促使垂體合成和分泌促甲狀腺激素(TSH)[7],腺垂體分泌的TSH維持和促進(jìn)甲狀腺功能,包括促進(jìn)甲狀腺素(T4和T3) 的釋放及合成[10]。通常情況下,血液中T3、T4濃度的升降對TSH存在負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用,即血液游離T3、T4減少或升高可引起垂體TSH釋放和合成的升高或降低,共同構(gòu)成下丘腦-垂體-甲狀腺軸自動控制環(huán)路[11-12]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,與常溫正常組相比,常溫中樞麻醉T3下降TSH也下降,而T4無明顯變化,表明中樞麻醉對T3、TSH有較大影響。與常溫中樞麻醉組相比,高溫環(huán)境下中樞麻醉T4升高TSH也升高,而T3無明顯變化。T4水平只在高溫中樞神經(jīng)麻醉的條件下變化,表明T4水平不受高溫的影響只受外周神經(jīng)系統(tǒng)影響,且表現(xiàn)升高趨勢。T3只在常溫中樞麻醉組中有明顯變化,表明T3水平在常溫下受中樞神經(jīng)麻醉影響。與常溫正常組相比,常溫中樞麻醉和高溫中樞麻醉組TSH降低,而相比常溫中樞麻醉組,高溫正常組和高溫中樞麻醉TSH升高。表明高溫不直接影響TSH水平,在常溫或高溫狀態(tài)下中樞神經(jīng)或周圍神經(jīng)調(diào)節(jié)TSH水平。但各組中TRH水平一直無變化,表明高溫和中樞神經(jīng)麻醉對其無影響。

    下丘腦尤其是視前區(qū)[13-14]熱敏神經(jīng)元和冷敏神經(jīng)元調(diào)節(jié)機(jī)體的體溫變化,該區(qū)域受到這些神經(jīng)元的支配,其活性的變化與體溫的波動密切相關(guān)?,F(xiàn)已知參與下丘腦體溫調(diào)節(jié)的神經(jīng)遞質(zhì)有乙酰膽堿(Ach)、腎上腺素(EPI)等[15]。乙酰膽堿(Ach)是一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì),下丘腦中副交感神經(jīng)通過其末梢釋放乙酰膽堿,支配心血管系統(tǒng)功能,可使全身血管擴(kuò)張達(dá)成散熱目的。試驗(yàn)結(jié)果表明,常溫狀態(tài)下中樞神經(jīng)調(diào)節(jié)ACH水平,高溫不直接影響ACH,但高溫條件下外周神經(jīng)也調(diào)節(jié)ACH水平。腎上腺素?zé)o明顯變化,表明中樞麻醉、高溫對其無影響。血管β2受體是兒茶酚胺受體之一,兒茶酚胺與β受體作用可引起血管弛緩[16]和心臟興奮[17],起到散熱作用。本結(jié)果顯示,高溫和中樞神經(jīng)麻醉均可降低大鼠腹主動脈β2受體表達(dá)。

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