宣痹通瘀方對急性冠脈缺血大鼠心臟的保護(hù)作用及機(jī)制

李雙娣 成光宇 劉迎輝 隋永朋 李洪禹 劉愛東

(長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021)

冠心病心絞痛是臨床常見病、多發(fā)病，發(fā)病率逐年增加〔1〕。冠脈造影是診斷冠心病心絞痛的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于造影為有創(chuàng)檢查手段，并且針對小血管、微血管及多支血管病變無法進(jìn)行診斷，在臨床應(yīng)用中仍然存在一些局限性。近年來，中醫(yī)藥干預(yù)心肌缺血動物模型的相關(guān)研究成為熱點(diǎn)，研究方向包括抗炎癥、抗氧化、抗動脈硬化等。研究發(fā)現(xiàn)，大量的中藥在不同程度上發(fā)揮著抗心肌缺血作用〔2〕?；钛兴幋ㄜ?、 丹參、三七等具有抗血小板聚集、抗血栓形成、擴(kuò)張血管、保護(hù)心肌細(xì)胞、降低心肌耗氧量等作用〔3〕。宣痹通瘀膠囊由延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人參、冰片等藥物組成，具有行氣化瘀止痛的功效，臨床上主要用于氣滯血瘀之胸痹心痛。本研究旨在觀察宣痹通瘀膠囊對心肌缺血模型大鼠生化指標(biāo)及心肌組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)的影響，探討宣痹通瘀方保護(hù)心肌損傷的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實驗動物 清潔級SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(220±20)g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號：SCXK(遼)2015-0001。室內(nèi)溫度(24±2)℃；相對濕度(50±10)%；氨濃度(mg/m3)≤14；采用晝夜自然光照；飼料為顆粒飼料，自由攝食、飲水。

1.2主要藥劑和設(shè)備 宣痹通瘀膠囊成分包括延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人參、冰片，規(guī)格：每克膠囊內(nèi)容物含4.03 g生藥，批號：20141201，由長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院新藥研發(fā)中心提供。陽性對照藥麝香保心丸，上海和黃藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字231020068)，規(guī)格：22.5mg/丸；VEGF抗體：規(guī)格：1 ml/瓶，產(chǎn)品批號：JL0972R，美國Sigma公司產(chǎn)品，兔IgG-免疫組化試劑盒(SABC即用型)：產(chǎn)品批號：11H24J20。生理信號采集系統(tǒng)，型號：Powerlab/8sp，澳大利亞埃德公司產(chǎn)品。醫(yī)學(xué)圖像分析儀，型號：BI-2000,成都泰盟股份有限公司產(chǎn)品。全自動生化分析儀，型號：selectra junior，荷蘭威圖科學(xué)儀器公司產(chǎn)品。酶標(biāo)儀，型號：BIOO680，美國伯樂公司產(chǎn)品。臺式高速低溫離心機(jī)，型號：Biofuge Stratos，德國賀利氏公司產(chǎn)品。電子天平，型號：SQP，規(guī)格：PRACTUM313-1CN，序列號：0028892121，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司產(chǎn)品。交直流電子計數(shù)計重兩用秤，型號：KF-H2，中國凱豐集團(tuán)有限公司產(chǎn)品。電熱三用水浴箱，型號：DS，北京市醫(yī)療設(shè)備廠產(chǎn)品。電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，型號：DHG-9143BS-Ⅲ型，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司產(chǎn)品。手術(shù)器材，JZO2Cr型靜脈拉鉤，手術(shù)刀，止血鉗，持針器，縫合針，縫合線等，上海醫(yī)療器械(集團(tuán))有限公司手術(shù)器械廠產(chǎn)品。各種手術(shù)器械在使用前經(jīng)新潔爾滅溶液浸泡消毒滅菌24 h。大鼠固定板，1 ml注射器，5 ml注射器，采血管，離心管等。

1.3方法

1.3.1模型制備與分組 SD大鼠購入后，穩(wěn)定適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w。用乙醚吸入法將大鼠麻醉，采用快速開胸結(jié)扎冠狀動脈前降支的模型處理方法，制備急性心肌缺血動物模型。具體方法：將動物置于密閉容器中使其被迫吸入乙醚至淺麻醉狀態(tài)。仰位固定于鼠板上，胸部去毛，絡(luò)合碘局部消毒，在第4～5肋間開胸，鈍性分離肌層，打開胸腔，暴露心臟，在左心耳根部與肺動脈圓錐交界處，相當(dāng)于左冠狀動脈起始處下2 mm穿一手術(shù)線結(jié)扎，迅速將心臟送回胸腔，排出進(jìn)入胸腔的氣體及血液，縫合胸壁。再次用絡(luò)合碘消毒液進(jìn)行皮膚表面消毒，待動物蘇醒后放歸籠具常規(guī)飼養(yǎng)。結(jié)扎后5 min將其與Powerlab/8s型八導(dǎo)數(shù)據(jù)分析記錄儀連接好，記錄一段標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖，觀測ST段偏移幅度，以ST段抬高0.2 mV定義為造模成功。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、麝香保心丸組(0.024 g·kg-1·d-1)；宣痹通瘀膠囊設(shè)高劑量(3.2 g·kg-1·d-1)、中劑量(1.6 g·kg-1·d-1)和低劑量(0.8 g·kg-1·d-1)三個亞組。另外，取10只同一批心電圖正常的大鼠作為假手術(shù)組。假手術(shù)組采用的手術(shù)方法與其他手術(shù)組相同，只是在左冠狀動脈下僅置手術(shù)線而不結(jié)扎。每組10只，雌、雄各5只。每天灌胃給藥1次，連續(xù)7 d。假手術(shù)組與模型組灌胃等體積蒸餾水。

1.3.2指標(biāo)檢測 最后一次給藥后1 h，將實驗大鼠用20%烏來糖以5 ml/kg腹腔注射麻醉，經(jīng)腹主動脈取血，3 000 r/min離心10 min分離血清。按相關(guān)各項指標(biāo)檢測試劑盒說明書要求操作，使用全自動生化分析儀測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量。使用酶標(biāo)儀測定超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用免疫組化方法檢測VEGF含量。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1宣痹通瘀膠囊對心肌缺血模型大鼠血清心肌三酶水平的影響 模型組血清AST、CK和LDH水平均明顯高于假手術(shù)組(均P<0.001)。給予宣痹通瘀膠囊干預(yù)后，與模型組比較，高劑量組血清AST、CK和LDH明顯降低(P<0.01或P<0.05)，中劑量組可以明顯下調(diào)各組血清AST和LDH水平(P<0.05和P<0.01)；而低劑量組僅對LDH水平有顯著的下調(diào)作用(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清AST、CK、LDH、MDA水平和SOD活性比較

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001；下表同

2.2宣痹通瘀膠囊對心肌缺血模型大鼠血清SOD活性及MDA含量的影響 宣痹通瘀膠囊高、中劑量組血清SOD活性明顯高于模型組(P<0.05)；而MDA含量明顯低于模型組(P<0.05)。見表1。

2.3宣痹通瘀膠囊對心肌缺血模型大鼠心肌組織VEGF含量的影響 與假手術(shù)組比較，模型組VEGF顯著下降(P<0.05)；與模型組比較，麝香保心丸組、宣痹通瘀高、中、低劑量組心肌組織內(nèi)VEGF含量增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。見表2。

表2 免疫組化檢測各組心肌組織切片VEGF陽性表達(dá)染色面積及平均光密度比較

3 討 論

宣痹通瘀膠囊共含有六味中藥，延胡索(酒炙)辛苦而溫，入心、肝、脾經(jīng)，具活血行氣止痛之功，“治心痛欲死”(《雷公炮炙論》)，能行血中之氣滯，氣中之血滯，故為君藥。三七甘苦而溫，入肝、胃二經(jīng)，可化瘀活血而定痛，能夠祛瘀生新，化瘀不傷正；川芎辛溫，入肝、膽、心包經(jīng)，活血化瘀，行氣止痛，為“血中之氣藥”，能夠通達(dá)氣血，使氣行血調(diào)；郁金味辛，入心、肝、膽經(jīng)，辛能行能散，既能活血，又能行氣，可活血止痛、行氣解郁。三藥同用，助君行氣活血，化瘀止痛，共為臣藥。人參甘溫，入心、脾、肺經(jīng)，善“補(bǔ)五臟，安精神，止驚悸”(《神農(nóng)本草經(jīng)》)，能補(bǔ)脾益肺養(yǎng)心氣，方中人參既可補(bǔ)氣生血，使氣旺血生，動力不竭，又能固護(hù)正氣，防君、臣諸藥行氣化瘀克罰太過耗傷正氣，屬佐助和佐制之功；冰片辛苦微寒，歸心、脾、肺經(jīng)，善走能散，具有散火、散氣、散血、散滯、通竅、辟惡之功，“獨(dú)行則勢弱，佐使則有功”(《本草衍義》)，與諸藥相伍，能開心竅，止痹痛，亦為佐藥。諸藥合用，共奏活血祛瘀，行氣止痛之功，可使瘀血得去，脈道得通，則諸癥自解。

本研究結(jié)果表明，宣痹通瘀膠囊對缺血缺氧導(dǎo)致的心肌損傷有保護(hù)作用?，F(xiàn)代藥理研究表明，延胡索、川芎能夠擴(kuò)張冠脈、降低冠脈阻力、提高耐缺氧能力、保護(hù)心肌細(xì)胞〔4，5〕，三七、郁金具有抗血小板聚集及溶栓作用〔6〕，人參、冰片能夠抗心肌缺血、抗心律失?！?〕。同時，宣痹通瘀方可以升高缺血心肌組織中VEGF含量，提示宣痹通瘀方可能存在一定促進(jìn)血管新生的作用，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。