HER2及CD44v6在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義

黎美仁 路名芝 鄭美蓉 周 燕

(九江學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，江西 九江 332000)

傳統(tǒng)對(duì)于膀胱尿路上皮癌(UCB)患者的治療，常采用化療、手術(shù)切除或是二者結(jié)合，隨著大家對(duì)UCB發(fā)病機(jī)制及其生物學(xué)行為研究的不斷深入，人們把更多的目光投向了以特異性及敏感性高而不良反應(yīng)少的分子靶向治療。注射用曲妥珠單抗(赫賽汀)在HER2陽(yáng)性的乳腺癌治療中的巨大成功，讓同樣存在HER2蛋白過(guò)表達(dá)UCB值得期待，同時(shí)UCB中CD44v6異常表達(dá)，因此，本研究應(yīng)用免疫組化及熒光原位雜交方法，對(duì)UCB中HER2及CD44v6的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，分析HER2、CD44v6與UCB的臨床病理關(guān)系。

1 材料與方法

1.1材料 收集2005～2014年九江學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院/附屬醫(yī)院病理科手術(shù)切除UCB組織標(biāo)本115例。標(biāo)本類型包括：膀胱全切及膀胱部分切除標(biāo)本。其中男88例，女27例；年齡31～83(中位65)歲，年齡≥60歲者76例，<60歲者39例；腫瘤直徑≥2 cm者45例，<2 cm者70例，參照2004年版世界衛(wèi)生組織泌尿系統(tǒng)病理學(xué)和遺傳學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，高級(jí)別57例，低級(jí)別58例；存在肌層浸潤(rùn)者34例，無(wú)肌層浸潤(rùn)者81例；復(fù)發(fā)者46例，初發(fā)者69例；取同期手術(shù)的低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤50例、慢性膀胱炎30例。每例標(biāo)本的病理組織學(xué)診斷都經(jīng)過(guò)兩位有主治醫(yī)師及以上的病理醫(yī)師重新復(fù)片、審核。

1.2試劑 濃縮型兔抗人HER2/c-erbB-2單克隆抗體(工作濃度，北京中杉金橋生物公司，克隆號(hào)：EP3)；濃縮型兔抗人CD44v6單克隆抗體(工作濃度，福州邁新生物公司，克隆號(hào)8F10)；HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒(北京金菩嘉醫(yī)療科技公司)；MaxVision試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑均購(gòu)自福州邁新生物公司。

1.3方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%中性緩沖甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm，于二甲苯及梯度乙醇溶液中脫蠟水洗。免疫組化采用MaxVision法，應(yīng)用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。HER2熒光原位雜交(FISH)檢測(cè)步驟，將已脫蠟水洗的組織切片放入沸水煮20～30 min，再經(jīng)37 ℃胃酶消化15 min，滴加0.05% 4，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)，5 min 后在熒光顯微鏡下觀察消化進(jìn)程，消化完畢后將切片放入檸檬酸鈉緩沖液(SSC)5 min×2，甲醛固定液固定10 min，再放入SSC 5 min×2，梯度乙醇(70%、85%、100%)脫水，晾干。每張切片上滴加適量(5 μl)新鮮配制的HER2熒光標(biāo)記探針，封片，放入雜交儀83 ℃變性6 min，42℃ 雜交孵育過(guò)夜。去封片膠，放入SSC×2泡掉蓋玻片，放入70℃的0.4 SSC 2 min，放40℃的SSC 2 min×2，放入70%乙醇3 min，晾干。加DAPI 復(fù)染后，即可放在熒光顯微鏡下觀察信號(hào)強(qiáng)度。

1.4結(jié)果判定 免疫組化結(jié)果由兩位有經(jīng)驗(yàn)的高年資病理醫(yī)師采用雙盲法獨(dú)立閱片做出判斷。HER2蛋白評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照2007版乳腺癌HER2檢測(cè)指南〔1〕：0：未見(jiàn)染色或<10%的間質(zhì)中浸潤(rùn)性癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的胞膜染色；1+：>10%的浸潤(rùn)性癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色；2+：有兩種情況，第一種為>10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整和(或)弱至中等強(qiáng)度的細(xì)胞膜染色，第二種為≤10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色；3+：>10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色。為方便臨床可根據(jù)免疫組化結(jié)果來(lái)決定使用赫賽汀藥物進(jìn)行靶向治療與否，根據(jù)中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2013版)，將HER2免疫組化結(jié)果為0及1+視為無(wú)HER2基因擴(kuò)增(陰性)；3+視為有HER2基因擴(kuò)增(陽(yáng)性)；2+則應(yīng)在進(jìn)行FISH檢測(cè)確認(rèn)是否存在擴(kuò)增。CD44v6結(jié)果判讀〔2〕，陽(yáng)性定位于細(xì)胞膜，用半定量的方法對(duì)切片免疫組織化學(xué)法的染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：無(wú)色為0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；再按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞<5%為0 分，5%～25%為1分，26%～50%為2 分，51%～75%為3分，>76%為4分。最終評(píng)分=染色程度×陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：0分為陰性，<6分為弱陽(yáng)性，≥6分為強(qiáng)陽(yáng)性。

HER2熒光原位雜交結(jié)果判讀：計(jì)數(shù)30個(gè)細(xì)胞大小較一致、胞核邊界清晰完整、DAPI染色鮮艷均質(zhì)、胞核分散、未有重疊、綠色著絲粒信號(hào)清晰可見(jiàn)的雙色信號(hào)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算Ration值(Ration值=30個(gè)所選腫瘤細(xì)胞胞核中紅色信號(hào)總數(shù)與綠色信號(hào)總數(shù)的比值)。當(dāng)Ration值>1.8認(rèn)定為不存在基因擴(kuò)增(陰性)；Ration值>2.2認(rèn)定為存在基因擴(kuò)增(陽(yáng)性)；Ration值1.8～2.2之間時(shí)，則需重新計(jì)數(shù)，并計(jì)數(shù)細(xì)胞增至100個(gè)，或重新做FISH實(shí)驗(yàn)并按同樣方法計(jì)數(shù)Ration值來(lái)判斷最終結(jié)果。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.9軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及Fish確切概率法，相關(guān)性采用 Spearman 等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1HER2和CD44v6蛋白在不同組織中的表達(dá) 115例UCB組織中，HER2蛋白表達(dá)61例(53.0%)，其中27例1+，9例2+，25例3+；30例慢性膀胱炎組織中HER2蛋白表達(dá)均為0；50例低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤HER2蛋白表達(dá)18例(36.0%)，其中12例1+，5例2+，1例3+。對(duì)存在HER2免疫組化結(jié)果為2+的病例進(jìn)行FISH檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤5例2+例病中FISH結(jié)果陽(yáng)性2例，而UCB9例2+病例中FISH結(jié)果陽(yáng)性5例。統(tǒng)計(jì)三組病例HER2的陽(yáng)性率(即基因擴(kuò)增率)，試驗(yàn)組膀胱尿路上皮癌為26.1%(30/115)，對(duì)照組慢性膀胱炎為0%，低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤為6%(3/50)，各組間HER2陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

115例UCB患者中，CD44v6陽(yáng)性63例(54.8%)，其中弱陽(yáng)性17例，強(qiáng)陽(yáng)性46例；30例慢性膀胱炎患者中CD44v6陽(yáng)性2例(4.7%)，均為弱陽(yáng)性；50例低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤患者中CD44v6陽(yáng)性13例(26.0%)，強(qiáng)陽(yáng)性8例，弱陽(yáng)性5例。各組間CD44v6陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2HER2和CD44v6陽(yáng)性表達(dá)與UCB臨床病理特征的關(guān)系 115例UCB不同性別、年齡組HER2陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.194，P=0.139，χ2=0.951，P=0.329)；不同腫瘤大小(χ2=9.982，P=0.002)、不同腫瘤級(jí)別(χ2=6.780，P=0.009)、不同肌層浸潤(rùn)(χ2=5.700，P=0.017)、是否復(fù)發(fā)病例(χ2=4.698，P=0.030)組間HER2陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。115例UCB中CD44v6陽(yáng)性率在不同性別(χ2=1.638，P=0.201>0.05)、不同年齡(χ2=1.087，P=0.297)、不同腫瘤大小(χ2=0.018，P=0.894)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義、不同腫瘤級(jí)別(χ2=9.502，P=0.002)、是否肌層浸潤(rùn)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.401，P=0.007)；是否復(fù)發(fā)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.211，P=0.646)。見(jiàn)表1。

表1 HER2、CD44v6陽(yáng)性表達(dá)與UCB臨床病理特征的相關(guān)性(n)

2.3相關(guān)性分析 在115例UCB組織中，HER2及CD44v6陽(yáng)性者11例，二者同時(shí)陰性者33例，HER2陽(yáng)性同時(shí)CD44v6陰性者19例，HER2陰性同時(shí)CD44v6陽(yáng)性者52例，相關(guān)性分析結(jié)果提示，HER2 與 CD44v6 表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(r=-0.216，P=0.02)。

3 討 論

1987 年，Slamon 等〔3〕首先報(bào)道了HER2蛋白在人類乳腺癌的癌細(xì)胞中高強(qiáng)度表達(dá)。通常情況下，HER2多只在胎兒階段表達(dá)，成年后鮮有表達(dá)。HER2是一種原癌基因，編碼1型酪氨酸蛋白激酶(TPK)生長(zhǎng)因子受體，是表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)家族的重要成員。該家族成員還包括HER1(EGFR)，HER3，HER4〔4，5〕。HER2基因位于17號(hào)染色體長(zhǎng)臂第二區(qū)第一帶(17q21)，編碼產(chǎn)物為185×103 的一種跨膜糖蛋白，P185。但目前尚未發(fā)現(xiàn)可與 HER-2 配體結(jié)合區(qū)結(jié)合的特定配體，EGFR 家族的其他成員均發(fā)現(xiàn)有與其結(jié)合的特定配體〔4〕。

研究發(fā)現(xiàn)，HER2基因擴(kuò)增的機(jī)制復(fù)雜，但主要是通過(guò)HER2和EGFR(HER1)二者之間的協(xié)同效應(yīng)，間接地與配體結(jié)合，從而形成二聚體(同源或者異源)；通過(guò)直接使HER-2胞內(nèi)羧基片段的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化，激活HER2〔5〕。HER2的激活又磷酸化下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，激活各種各類信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而引發(fā)級(jí)聯(lián)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化。其介導(dǎo)Ras/Raf/MEK/EPK，PI3K/AKT，PLC2γ/PKC，STAT 等信號(hào)通路，過(guò)程非常復(fù)雜。Ras/Raf/MEK/EPK 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是在形成HER2磷酸化同源或異源二聚體后，HER2胞內(nèi)羧基端的酪氨酸殘基與下游的信號(hào)蛋白GRB2的SH-2區(qū)相結(jié)合，之后再與細(xì)胞膜內(nèi)的鳥嘌呤核苷酸交換因子(SOS)作用，將 Ras-GDP磷酸化成 Ras-GTP，使得Ras蛋白得以激活，Ras蛋白誘導(dǎo)磷酸化Raf 激酶，最終使絲裂原活化蛋白激酶(MAPK，MEK)激活，MAPK被激活的信號(hào)隨后傳導(dǎo)至胞核內(nèi)，磷酸化各類轉(zhuǎn)錄因子如 c-myc，c-fos 等，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄活性得到加強(qiáng)，從而使機(jī)體對(duì)細(xì)胞的增殖、凋亡的調(diào)控機(jī)制失效〔6〕。PI3K/AKT 途徑HER-2 蛋白磷酸化，PI3K得以激活，磷脂酰肌醇被誘導(dǎo)成為PIP2、PIP3(胞內(nèi)的第二信使)，進(jìn)而激活下游的蛋白激酶 Akt，活化后的Akt激酶作用于細(xì)胞內(nèi)的NF-κB、凋亡抑制因子Bad、p21 基因、p53 基因等，使細(xì)胞不能正常生長(zhǎng)及凋亡，進(jìn)而使細(xì)胞的增殖和凋亡失去調(diào)控〔7〕。另外值得注意的，HER2異源二聚體減少了EGFR 與 cab-1 間的耦聯(lián)，EGFR被細(xì)胞溶解酶水解的數(shù)量隨之減少，造成EGFR細(xì)胞膜的表達(dá)數(shù)量增加，進(jìn)而使得更多的信號(hào)通路得以激活〔8〕。HER-2 基因可通過(guò)激活血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)轉(zhuǎn)錄水平的啟動(dòng)子，使其在mRNA和蛋白表達(dá)水平得到提高，進(jìn)而使更多的營(yíng)養(yǎng)腫瘤的新生血管形成〔9〕。

膀胱癌中HER2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率僅只低于乳腺癌及胃腸癌，是常見(jiàn)的具有HER2高表達(dá)的人類惡性腫瘤。源于實(shí)驗(yàn)室條件及所用抗體克隆號(hào)不同，各類研究結(jié)果出現(xiàn)較大差距，研究數(shù)據(jù)顯示的HER2蛋白表達(dá)率從23%～80%不等，而基因擴(kuò)增百分比范圍在0～30%〔10～16〕。本研究結(jié)果，與文獻(xiàn)基本相符，印證了膀胱癌中HER2的確存在過(guò)表達(dá)。通常異常激活HER2蛋白方式有兩種：基因擴(kuò)增或基因突變?；驍U(kuò)增為大多數(shù)人熟悉，乳腺癌中HER2蛋白表達(dá)，多由基因擴(kuò)增所致，甚至有人認(rèn)識(shí)95%乳腺癌HER2過(guò)表達(dá)均有基因擴(kuò)增引起〔17〕。而基因突變則是由于各種原因?qū)е翲ER2蛋白的一些特點(diǎn)位置發(fā)生突變導(dǎo)致它異常激活。研究發(fā)現(xiàn)〔4〕位于HER2的原癌基因膜內(nèi)區(qū)664位纈氨酸被谷氨酸取代，造成HER2癌基因形成。這種改變加強(qiáng)了分子間的氫鍵作用，使HER2因更容易形成二聚體而被激活。本研究發(fā)現(xiàn)膀胱癌中由非基因擴(kuò)增導(dǎo)致蛋白過(guò)表達(dá)為36.8%，這部分很可能由基因突變所致。而Simonetti等〔18〕發(fā)現(xiàn)有一些HER2蛋白異常表達(dá)源于17號(hào)染色體出現(xiàn)了多倍體，而非基因擴(kuò)增導(dǎo)致。

UCB患者可發(fā)生在任何年齡段，但多為中老年男性，也偶見(jiàn)兒童患者的報(bào)道，本研究顯示UCB患者年齡及性別間差異對(duì)UCB組織中HER2陽(yáng)性與否不存在直接關(guān)聯(lián)。隨著患者腫瘤的體積增大，HER2的陽(yáng)性表達(dá)率隨之提高〔19〕。本研究結(jié)果顯示，UCB患者腫瘤最大徑越大，其HER2陽(yáng)性表達(dá)率則越高。同樣胡文輝等〔20〕在檢測(cè)一組73例膀胱癌的研究中，發(fā)現(xiàn)腫瘤直徑>3 cm與直徑≤3 cm之間HER2陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可以看出，患者腫瘤的大小對(duì)HER2的表達(dá)有直接影響。本研究顯示隨著腫瘤級(jí)別不斷升高，HER2陽(yáng)性率也在不斷升高。Coogan等〔13〕發(fā)現(xiàn)UCB中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的HER2蛋白表達(dá)率分別為14%、12%及48%。顯而易見(jiàn)，HER2的陽(yáng)性率受腫瘤的惡性程度影響。腫瘤浸潤(rùn)越深，HER2陽(yáng)性率越高。本研究顯示HER2陽(yáng)性率在有無(wú)肌層浸潤(rùn)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Coogan等〔13〕發(fā)現(xiàn)Ta與T1期UCB中17%HER2蛋白陽(yáng)性，而T2及T3的表達(dá)率為44%。更有報(bào)道〔21～24〕稱浸潤(rùn)性尿路上皮癌中HER2強(qiáng)表達(dá)率為41%～81%。腫瘤中HER2表達(dá)同樣影響其遠(yuǎn)期事件，HER2陽(yáng)性患者術(shù)后復(fù)發(fā)率較陰性者明顯升高。本研究中復(fù)發(fā)組與初發(fā)組HER2陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Raica等〔25〕發(fā)現(xiàn)淺表的UCB(Ta、T1)隨訪36月，復(fù)發(fā)者其HER2陽(yáng)性率為84.6%，而對(duì)應(yīng)無(wú)復(fù)發(fā)者僅有7.1%。

HER2的表達(dá)是否會(huì)影響UCB患者的預(yù)后，本研究因存在資料不全，失訪而未能統(tǒng)計(jì)，無(wú)法解釋二者是否存在相關(guān)性。目前對(duì)于HER2表達(dá)對(duì)膀胱癌預(yù)后的是否有影響存在分歧。Coombs等〔26〕則認(rèn)為，雖然HER2的過(guò)表達(dá)為膀胱癌提供了分子標(biāo)志，但作為潛在的預(yù)后指標(biāo)有待進(jìn)一步研究。Masliukova 等〔27〕通過(guò)一系列的回顧性研究發(fā)現(xiàn)，HER2陽(yáng)性UCB患者無(wú)瘤生存期明顯低于陰性患者；以此同時(shí)，Kruger等〔22〕發(fā)現(xiàn)相對(duì)于HER2陰性患者，HER2過(guò)表達(dá)患者的疾病相關(guān)生存更短，因此他們認(rèn)為HER2可以視為UCB的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。本研究結(jié)果同樣顯示HER2蛋白陽(yáng)性患者更易復(fù)發(fā)。目前，臨床對(duì)膀胱癌患者的預(yù)后評(píng)估判斷主要還是依據(jù)其腫瘤的臨床病理分級(jí)、分期，HER2能否作為膀胱癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)，還有待于進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)。對(duì)乳腺癌的研究表明，曲妥珠單抗對(duì)伴有HER2 基因擴(kuò)增的乳腺腫瘤的治療取得了巨大成功舉世關(guān)注，而且現(xiàn)在以HER2位靶點(diǎn)的藥物也已開始應(yīng)用于胃腸癌的臨床治療〔28，29〕。針對(duì)HER2基因的分子靶向治療是否適用于膀胱癌，能給膀胱癌患者帶來(lái)福音嗎？邱學(xué)德等〔30〕人發(fā)現(xiàn)酪氨酸激酶抑制劑PD168393對(duì)HER2高表達(dá)的膀胱腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性。Kolla 等〔31〕指出赫賽汀、紫杉醇和順鉑等常用的輔助治療藥物，在對(duì)膀胱癌癥患者和轉(zhuǎn)移性病例的治療上，它們之間具有有協(xié)同作用?？梢钥闯?，靶向藥物在HER2陽(yáng)性的膀胱癌治療上有一定幫助，但還需待大宗實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)證實(shí)。

CD44，是一種廣泛分布的單鏈表面蛋白〔32，33〕。人類的CD44基因位于11號(hào)染色體短臂上，全長(zhǎng)50～60 kb，由20個(gè)外顯子、19個(gè)內(nèi)含子及選擇性剪接插入的外顯子構(gòu)成〔34〕，外顯子的長(zhǎng)度在70～210 kb之間，外顯子又分為組成型和變異性，分別各10個(gè)，他們之間由大小不等的內(nèi)含子分隔。根據(jù)所含外顯子的構(gòu)成不同，分為標(biāo)準(zhǔn)型CD44(即CD44s)及變異型CD44(CD44v)。CD44s所含的10個(gè)外顯子全部由組成型構(gòu)成，所編碼的蛋白包含361個(gè)氨基酸，理論分子量為90 kD。而CD44v則是在CD44s的基礎(chǔ)系列中選擇性剪接插入了其他外顯子〔35〕，根據(jù)插入部位及外顯子類型不同，分為10種異型(CDv1～CD44v10)〔36，37〕。其中，CD44v6是常見(jiàn)的一種CD44變異異型，與人類腫瘤密切相關(guān)，是在CD44s的胞外結(jié)構(gòu)域插入變性拼接的V6外顯子構(gòu)成，所編碼的跨膜糖蛋白含有43個(gè)氨基酸。

CD44分子，是機(jī)體一種常見(jiàn)黏附分子，分布于人體各種各類細(xì)胞的胞膜表面，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與基質(zhì)間的識(shí)別過(guò)程〔38〕。CD44分子作為淋巴細(xì)胞“歸巢”受體參與淋巴細(xì)胞的激活及再循環(huán)，主要激活T細(xì)胞及NK細(xì)胞，并介導(dǎo)了淋巴細(xì)胞在體液中的運(yùn)動(dòng)。同樣，也可參與細(xì)胞之間的各種信號(hào)傳導(dǎo)，加快細(xì)胞有絲分裂，增強(qiáng)細(xì)胞表達(dá)各種因子及受體的能力，進(jìn)而使機(jī)體細(xì)胞免于凋亡〔39，40〕。而CD44與相應(yīng)的細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合，則可促進(jìn)偽足形成，對(duì)細(xì)胞形態(tài)及運(yùn)動(dòng)進(jìn)行調(diào)控，加速其轉(zhuǎn)移，促進(jìn)腫瘤侵襲及進(jìn)展〔41〕。另外，它也有調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)藥物的吸收及機(jī)體對(duì)藥物的敏感性、調(diào)節(jié)細(xì)胞通道、中和透明質(zhì)酸及更新間質(zhì)成分的作用。有學(xué)者認(rèn)為某些CD44分子的高表達(dá)可促進(jìn)惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移〔42，43〕。CD44v6作為CD44的一種特殊亞型，同樣具有可以和透明質(zhì)酸結(jié)合的膜外區(qū)，是其發(fā)揮生物功能的結(jié)構(gòu)。CD44v6與腫瘤之間可能通過(guò)下面途徑發(fā)揮作用：一方面，促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶降結(jié)細(xì)胞外Ⅳ型膠原，使得腫瘤細(xì)胞不受基底膜的束縛，更易在間質(zhì)中游走，提高了腫瘤細(xì)胞的侵襲力〔44〕；另一方面，促進(jìn)黏著斑酶磷酸化，進(jìn)而介導(dǎo)CD44內(nèi)外的信號(hào)傳導(dǎo)，激發(fā)其下游信號(hào)通路，使得PI3K/Akt信號(hào)通路和MAPK途徑得以激活，進(jìn)而加速腫瘤細(xì)胞分裂及增殖，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡。此外，CD44v6可以通過(guò)模擬活化的淋巴細(xì)胞生物學(xué)特征，使得其可以具有與淋巴細(xì)胞類似的歸巢運(yùn)動(dòng)，從而達(dá)到4“欺騙”人體的免疫系統(tǒng)，逃避免疫細(xì)胞及免疫因子識(shí)別和殺傷，讓腫瘤細(xì)胞更易在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

目前多數(shù)研究結(jié)果指出，UCB中存在CD44v6蛋白的過(guò)量表達(dá)，而在對(duì)應(yīng)癌旁正常組織中表達(dá)量極低或不表達(dá)。王永輝等〔45〕應(yīng)用免疫組化檢查一組85例胃癌標(biāo)本組織中CD44v6的表達(dá)率為43.5%，而癌旁膀胱組織為陽(yáng)性率為17.1%，二者差距明顯，同時(shí)，其的表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤級(jí)別、腫瘤浸潤(rùn)深度及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。Afify等〔46〕在研究乳腺癌研究中，發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)性乳腺癌中CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)94%，而正常乳腺組織為陰性，淋巴結(jié)中轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞100%表達(dá)。安慧敏〔47〕在研究一組72例結(jié)直腸癌標(biāo)本的病例中發(fā)現(xiàn)，其CD44v6的陽(yáng)性例數(shù)高達(dá)54例，且隨臨床病理分級(jí)呈正相關(guān)。綜合以上研究結(jié)果，可明確得出結(jié)果，即CD44v6不僅在腫瘤組織存在高表達(dá)，而且或直接或間接參與了腫瘤的形成、浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移。

大量研究及實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示〔48～51〕，UCB中存在CD44v6蛋白的過(guò)量表達(dá)，表達(dá)率大致在50%～90%之間，本研究實(shí)驗(yàn)CD44v6的陽(yáng)性率為54.8%，以文獻(xiàn)報(bào)道基本相符，略偏低，可能與試驗(yàn)選用的抗體相關(guān)，本研究選用的單克隆抗體，敏感性相對(duì)較弱，而特異性則較強(qiáng)，同樣實(shí)驗(yàn)組病例組成對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也存在一定影響。李沐寒等〔2〕在研究一組54例復(fù)發(fā)性膀胱尿路上皮中發(fā)現(xiàn)，CD44v6表達(dá)與性別與年齡無(wú)相關(guān)性，本實(shí)驗(yàn)顯示了相同的結(jié)果。于勝?gòu)?qiáng)等〔52〕在研究71例UCB患者CD44v6的表達(dá)時(shí)，得出同樣的結(jié)果。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為〔53～55〕，UCB中CD44v6的表達(dá)水平與其臨床病理分級(jí)及分期呈負(fù)相關(guān)。Sugino等〔53〕認(rèn)為在早期UCB中CD44基因高表達(dá)，而其丟失與腫瘤細(xì)胞獲得侵襲性相關(guān)。Hong等〔54〕報(bào)道CD44v6 在病理分級(jí)越高，膀胱癌中表達(dá)越低，存在肌層浸潤(rùn)的膀胱腫瘤患者出現(xiàn)CD44v6過(guò)量表達(dá)時(shí)，預(yù)后相對(duì)較好。Lipponen等〔55〕進(jìn)行一組173例膀胱移行細(xì)胞癌病例組成的回顧性研究，結(jié)果提示腫瘤的分級(jí)、分期與其腫瘤細(xì)胞中CD44V6蛋白的表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)，而患者的生存率則與其表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)性。同時(shí)，也有一些學(xué)者〔49，56〕發(fā)現(xiàn)，隨著UCB中CD44v6的陽(yáng)性表達(dá)率升高，其臨床病理分級(jí)分期隨之升高。本文及相關(guān)研究結(jié)果支持CD44v6隨著臨床病理分級(jí)及分期的升高而降低，呈負(fù)相關(guān)。對(duì)于CD44v6對(duì)復(fù)發(fā)的影響，存在爭(zhēng)議，有人認(rèn)為〔49〕UCB中CD44v6表達(dá)水平越高，復(fù)發(fā)率越高。Matuschek等〔57〕同樣認(rèn)為CD44v6 mircoRNA表達(dá)過(guò)少與膀胱癌生存期延長(zhǎng)相關(guān)。而李志強(qiáng)等〔51〕研究CD44v6的表達(dá)量與UCB患者有無(wú)復(fù)發(fā)、無(wú)瘤生存期及5年生存期三者之間不存在相關(guān)性，不能作為它的獨(dú)立預(yù)后因子進(jìn)行評(píng)估。本研究結(jié)果支持后者。

目前，對(duì)CD44v6與HER2相互關(guān)系的研究較少，多數(shù)在消化道癌，乳腺癌及腦腫瘤等，而罕有二者在膀胱癌中的相互作用的報(bào)告。Bao等〔58〕發(fā)現(xiàn)胃癌里CD44可直接與HER2結(jié)合，使得轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1表達(dá)增加，進(jìn)而誘導(dǎo)組蛋白H3賴氨酸9形成，抑制microRNA-139的轉(zhuǎn)運(yùn)翻錄，從而使趨化因子受體4的表達(dá)水平上調(diào)，進(jìn)而使腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。王永輝等〔45〕在研究胃癌中CD44v6和HER2的表達(dá)時(shí)，發(fā)現(xiàn)二者同時(shí)表達(dá)組之外的其他比較組中二者均逐漸升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有意義，而癌旁組織中卻未見(jiàn)上述改變，提示在胃癌細(xì)胞的增殖方面，HER2和CD44V6二者相互起協(xié)調(diào)作用。Ghatak等〔59〕報(bào)道，CD44與透明質(zhì)酸酶相互作用可以起到活化HER2的作用，這在對(duì)結(jié)腸癌及乳腺癌研究都得到證實(shí)。本研究結(jié)果提示HER2與CD44v6可能在UCB的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中共同起作用。