胃癌前疾病不同中醫(yī)證型與HSP70、COX-2基因多態(tài)性的關(guān)系*

★ 嚴(yán)新 甘淳* 吳旭濤 趙化成 朱宏

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 南昌 330012;2.江西中醫(yī)藥大學(xué)科技學(xué)院 南昌 330004)

基因多態(tài)性在闡述人體對(duì)疾病的易感性，解釋疾病臨床表現(xiàn)的多樣性方面都發(fā)揮著巨大作用。近年來(lái)，基因多態(tài)性與腫瘤之間相互關(guān)系的研究日漸深入。有文獻(xiàn)報(bào)道，HSP70、COX-2等的基因多態(tài)性能增加胃癌的患病風(fēng)險(xiǎn)，而對(duì)胃癌癌前疾病積極治療可以很好的預(yù)防其癌變的發(fā)生[1-2]。胃癌癌前疾病運(yùn)用中醫(yī)藥理論進(jìn)行辯證施治，可以改善患者癥狀，效果良好。本研究以HSP70、COX-2基因作為研究對(duì)象，探討在胃癌癌前疾病不同中醫(yī)證型中它們的多態(tài)性分布變化，旨在發(fā)現(xiàn)其與中醫(yī)證型的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化內(nèi)鏡學(xué)分會(huì)達(dá)成的《中國(guó)早期胃癌篩查及內(nèi)鏡診治共識(shí)意見(jiàn)》中關(guān)于胃癌前疾病的分類(lèi)，指胃的良性疾病，包括胃潰瘍、慢性萎縮性胃炎、胃息肉、手術(shù)后殘胃等。辨證分型參照中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)制定的《慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診治方案》，分為以下三種類(lèi)型，分別為肝胃不和證，脾胃濕熱證，脾胃虛弱證[3-4]。

1.2 入組與排除標(biāo)準(zhǔn) 入組標(biāo)準(zhǔn): (1)年齡小于65歲的成年患者；(2)診斷為胃癌前疾病并且能進(jìn)行準(zhǔn)確的中醫(yī)辯證分型；排除標(biāo)準(zhǔn): (1)既往于1月內(nèi)接受過(guò)質(zhì)子泵抑制劑治療者；(2)伴隨其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；(3)已經(jīng)確診為胃癌并行相關(guān)手術(shù)者。

1.3 觀察指標(biāo)及方法

1.3.1 基本信息錄入 包括患者一般身份信息，聯(lián)系方式，入院記錄需要包含的主訴及病史相關(guān)信息，消化內(nèi)鏡檢查結(jié)果及病理報(bào)告，患者的辯證分型等。

1.3.2 靜脈血采集 符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者，抽取適量靜脈血并按要求妥善保存，以備后續(xù)開(kāi)展各基因組的DNA檢測(cè)。

1.3.3 基因檢測(cè) 運(yùn)用等位基因?qū)Ｒ恍詫?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)確定各基因多態(tài)性位點(diǎn)。相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作委托第三方生物檢測(cè)公司進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用卡方檢驗(yàn)，應(yīng)用社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包(SPSS22.0版本)，以概率型非線(xiàn)性回歸計(jì)算相對(duì)危險(xiǎn)度及其95%可信區(qū)間，評(píng)價(jià)HSP70、COX-2各基因型與胃癌前疾病不同中醫(yī)證型發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 肝胃不和證、脾胃濕熱證、脾胃虛弱證及對(duì)照組中HSP70-1:190G/C各基因型的分布情況 HSP70-1:190G/C的基因型共3種，分別為CC、CG和GG, 其中CC在對(duì)照組，肝胃不和證，脾胃濕熱證，脾胃虛弱證中的分布頻率分別為0%，10.7%，12%和6.2%；CG在對(duì)照組，肝胃不和證，脾胃濕熱證，脾胃虛弱證中的分布頻率分別為50%，35.7%，48%和46.9%；GG在對(duì)照組，肝胃不和證，脾胃濕熱證，脾胃虛弱證中的分布頻率分別為50%，53.6%，40%和46.9%。以上三種基因型在各組之間的分布無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。將攜帶HSP70-1:190CC和攜帶HSP70-1:190CG型者合并后與攜HSP70-1:190GG基因型比較，各組之間仍無(wú)明差別。

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。

2.2 肝胃不和證、脾胃濕熱證、脾胃虛弱證及對(duì)照組中HSP70-2:1267A/G各基因型的分布數(shù)據(jù) HSP70-2:1267A/G多態(tài)性位點(diǎn)基因型共3種，分別為GG、AG和AA, 但本實(shí)驗(yàn)僅檢驗(yàn)出GG和AG兩種。GG在對(duì)照組，肝胃不和證，脾胃濕熱證，脾胃虛弱證中的分布頻率分別為90%，60.7%，80%和87.5%；AG在對(duì)照組，肝胃不和證，脾胃濕熱證，脾胃虛弱證中的分布頻率分別為10%，39.3%，20%和12.5%。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析,攜帶HSP70-2:1267AG基因型的肝胃不和證患者，較對(duì)照組有顯著性差異(P=0.024,OR=5.824,95%CI: 1.123-30.202)。

表2 各組HSP70-2:1267A/G基因型分布比較 例(%)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。

2.3 肝胃不和證、脾胃濕熱證、脾胃虛弱證及對(duì)照組中COX-2:899G/C各基因型的分布數(shù)據(jù) COX-2:899G/C的基因型共兩種，分別為CG和GG, CG在對(duì)照組，肝胃不和證，脾胃濕熱證，脾胃虛弱證中的分布頻率分別為20%，7.1%，32%和15.6%；GG在對(duì)照組，肝胃不和證，脾胃濕熱證，脾胃虛弱證中的分布頻率分別為80%，92.9%，68%和84.4%。COX-2:899CG與COX-2:899GG基因型在各組別間比較無(wú)明顯差別。

表3 各組COX-2: -899G>C基因型分布比較 例(%)

組別COX-2:899 G/CCGGG對(duì)照組4(20)16(80)肝胃不和證2(7.1)26(92.9)脾胃虛弱證28(87.5)4(12.5)脾胃濕熱證8(32)17(68)脾胃虛弱證5(15.6)27(84.4)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。

3 討論

HSP70是一類(lèi)熱應(yīng)激蛋白，參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，凋亡以及脫氧核糖核酸損傷的修復(fù)，研究表明，HSP70在腫瘤中的表達(dá)量，與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)[5]。該蛋白的基因多態(tài)性與腫瘤的生成關(guān)系密切，王玉珍等[6]對(duì)159例肺癌患者和202名健康人群進(jìn)行HSP70-1:+190(G/C)和HSP70-2+1267(A/G)的基因多態(tài)性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)HSP70-1+190(G/C)位點(diǎn)多態(tài)性可能與河南漢族人群的肺癌易感性有關(guān)。M Ferrer等[7]對(duì)39名胃癌患者，79名健康人群，55名慢性胃炎及52名十二指腸潰瘍患者進(jìn)行了HSP70-202+1267 and HSP70-Hom02+2437的基因多態(tài)性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相比GG基因型，HSP70-202+1267GA基因型患胃癌風(fēng)險(xiǎn)明顯升高。Partida[8]的研究也得到了類(lèi)似的結(jié)果。本次研究結(jié)果表明，在不同的胃癌前疾病中醫(yī)證型中，HSP70-2:1267A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性分布頻率不同，HSP70-2:1267AG基因型在肝胃不和證組中的表達(dá)顯著高于對(duì)照組，本次研究結(jié)果表明，胃癌前疾病肝胃不和證患者如攜HSP70-2:1267AG型基因則轉(zhuǎn)變成胃癌的幾率可能增加。

COX-2為一類(lèi)誘導(dǎo)性酶，在人體正常組織中極低表達(dá)或不表達(dá)，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥或發(fā)熱等時(shí)可誘導(dǎo)其表達(dá)。研究表明，COX-2在胃癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)高低與預(yù)后密切相關(guān)[9]。COX-2基因多態(tài)性與胃癌易感性緊密相關(guān)[10-11]。朱克詳?shù)萚12]檢測(cè)了甘肅河西地區(qū)健康人群和胃癌患者COX-2-899G>C, COX-2codon 587G>A的基因多態(tài)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，COX-2 -899G>C的C等位基因與胃癌的患癌風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)，而COX-2 codon 587G>A基因多態(tài)性與該地區(qū)胃癌的易感性無(wú)關(guān)。本次研究結(jié)果表明，COX-2:899G/C多態(tài)性位點(diǎn)有CG和GG兩種基因型, 這兩種基因型在健康人群和胃癌癌前疾病患者中分布無(wú)明顯差異，各證型之前的分布頻率也無(wú)明顯差異。提示COX-2:899G/C多態(tài)性位點(diǎn)可能不是胃癌癌前疾病不同中醫(yī)證型的分子基礎(chǔ)。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，針對(duì)健康人群和胃癌患者的COX-2 -899G>C基因多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)，COX-2 -899G>C的C等位基因與胃癌的患癌風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)，本文中COX-2-899G>C基因型在各組的分布無(wú)顯著性差異，提示COX-2:899G/C多態(tài)性位點(diǎn)可能不是胃癌前疾病不同中醫(yī)證型的分子基礎(chǔ)?；蚨鄳B(tài)性受多方面因素影響，比如地域，種族等，查閱文獻(xiàn)可以發(fā)現(xiàn)同一個(gè)基因同一個(gè)位點(diǎn)在同一個(gè)疾病上有陽(yáng)性結(jié)果有陰性結(jié)果，所以，后續(xù)擬擴(kuò)大樣本量，同時(shí)增加對(duì)胃癌患者的研究，以排除地域等差異導(dǎo)致基因多態(tài)性的差異。

本研究結(jié)果提示胃癌前疾病不同中醫(yī)證型的基因型分布頻率不盡相同， 因受病例數(shù)及位點(diǎn)選擇的局限，所得結(jié)果還需要進(jìn)一步的大樣本量，多基因多位點(diǎn)的研究證實(shí)。