LC-MS/MS測定蜜餞中酸性嫩黃G的方法研究

《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》規(guī)定了蜜餞類食品中允許使用的著色劑，包括靛藍及其鋁色淀、蘿卜紅、梔子黃、紅花黃、檸檬黃及其鋁色淀、日落黃及其鋁色淀、天然莧菜紅等。通常而言，在國家標準內(nèi)蜜餞產(chǎn)品是可以添加食用色素的，對于身體也不會產(chǎn)生太大的危害，但是按標準使用量添加染色劑的水果蜜餞色澤不會太過鮮艷，不良企業(yè)為了色澤鮮艷和逃避檢查有可能使用非食品用染色劑酸性嫩黃G，這樣不但能使產(chǎn)品色澤鮮艷，而且在檢驗時由于沒有這幾項的檢測而檢驗合格。酸性嫩黃G對人體危險性巨大，并且沒有適用的檢測方法。

材料與方法

試驗材料：市售蜜餞。

儀器與試劑

Sartorius ME215S 十萬分之一天平；Sartorius CP224S萬分之一天平；AB QTRAP 4500超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Sciex公司產(chǎn)品，配有Agilent 1290超高效液相色譜儀及電噴霧離子源)；Milli-Q超純水器；IKMS3漩渦混合器；KQ-800DE型數(shù)控超聲波清洗器；高速冷凍離心機。

標準物質(zhì)：酸性嫩黃G （Dr Ehrenstorfer GmbH 公司產(chǎn)品，純度：95.7%）；乙腈、甲醇和冰乙酸為色譜純，丙酮、氯化鈉、PSA和硫酸鎂以及實驗所用其他試劑為分析純。

固相萃取小柱：waters公司W(wǎng)AX、MCX、HLB

方法

樣品處理。取本品2g 粉碎，80℃水8mL，混勻，超聲10分鐘，離心取上清液，殘渣加1%氨水乙醇超聲10分鐘，離心，合并上清液，調(diào)pH值至6上wax柱（平衡：5 mL甲醇和5 mL超純水）棄去濾液，用3mL超純水和3 mL甲醇溶液清洗OASIS WAX小柱（正交曲線確定淋洗體積主要考慮在不洗脫目標物質(zhì)的情況下盡可能地洗脫掉雜質(zhì)）。用5 mL 5%氨化甲醇溶劑洗脫SPE小柱（正交曲線確定洗脫體積），收集洗脫液，在50 ℃ 水浴下，氮氣吹干后，用1 mL5%的甲醇水溶液復溶，過0.22 μm PTF E濾膜上機。

色譜條件。ZORBAX SB-C18 2.1×100mm 1.8μm 色譜柱；流動相A為甲醇，水(10mmol/L乙酸銨,流速：0.2ml/min，柱溫：40℃，進樣體積：5μL，梯度洗脫見表1。

表1 色譜梯度洗脫條件

質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源（ESI-）；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：MRM 模式；電噴霧電壓：-4500V；干燥氣：N2；霧化氣50 units；霧化器蒸發(fā)溫度：550℃；質(zhì)譜分析參數(shù)見表2。

表2 MRM監(jiān)測離子對及碰撞能量等參數(shù)設定表

結果與分析

不同樣品前處理

試驗中比較了WAX、HLB、MCX固相萃取柱萃取凈化方法具體結果見表3

(HLB固相萃取柱上樣為樣品液1ml加水5ml混勻后上樣)

表3

線性范圍和檢出限

配制濃度為 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 、100μg/L 的標準溶液進行上機檢測，混合標準溶液MRM色譜圖見圖1。以峰面積與標準溶液濃度做線性回歸方程為y=280021x-5133，相關系數(shù)R2為0.9999。在空白蜜餞樣品中添加酸性嫩黃G，提取凈化后進行測定，以信噪比（S/N）為確定方法的檢出限，酸性嫩黃G的檢出限為2.0μg/kg。

圖1 酸性嫩黃G MRM色譜圖RT=7.58 min

回收率和精密度

在空白蜜餞基質(zhì)中添加酸性嫩黃G標準溶液，分別添加三個濃度，每個濃度的加標量進行3個平行試驗，以平均值計算，結果見表4。由表4可以看出，方法的回收率在89.0%～99.9 %之間，低濃度時回收率偏低，中高濃度點回收率較好。

表4 蜜餞中酸性嫩黃G加標回收率

結論

本研究建立了用WAX凈化方法進行樣品處理，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)定性定量分析食品中非法添加的酸性嫩黃G。本方法回收率較高，同一添加濃度回收穩(wěn)定，準確度高，實現(xiàn)了液質(zhì)對蜜餞中酸性嫩黃G的測定。