nm23-H1蛋白表達(dá)情況與舌癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

王利偉，初桂偉，杜靈霞，計春波，張梅，王連友

舌癌是常見口腔惡性腫瘤，主要為鱗狀細(xì)胞癌，其病因暫不清楚，一般認(rèn)為與熱損傷、慢性損傷、放射物質(zhì)等相關(guān)。舌癌常表現(xiàn)為潰瘍型或浸潤型，病變處疼痛明顯，且癌細(xì)胞生長快，浸潤性強，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[1]。nm23-H為轉(zhuǎn)移抑制基因，已被證實其基因家族與腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性[2]，而nm23-H1是其亞型之一，惡性腫瘤病理類型不同，nm23-H1蛋白表達(dá)水平亦存在差異[3]。目前對于舌癌中nm23-H1的表達(dá)水平及其與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚無確切結(jié)論，故而本研究以免疫組化法檢測nm23-H1蛋白在舌癌中的表達(dá)情況，探討其與舌癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以期為臨床治療舌癌提供依據(jù)。

1 對象及方法

1.1臨床資料 選擇2015年1月—2018年1月秦皇島市海港醫(yī)院及秦皇島市第四醫(yī)院收治的69例舌癌患者，其中男39例，女30例，年齡41～77(59.24±8.16)歲；腫瘤部位：舌側(cè)緣61例，舌腹8例；浸潤深度：≤4.0 mm 26例，>4.0 mm 43例；腫瘤分化程度：高+中分化48例，低分化21例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，未轉(zhuǎn)移38例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療或免疫治療，于手術(shù)中取腫瘤組織和癌旁組織(取自距離癌組織病灶邊界1 cm處)標(biāo)本。

1.2方法

1.2.1抗體與儀器：鼠抗人nm23-H1多克隆抗體(Santa Cruz公司)，通用型二抗(北京博奧森生物科技有限公司)，石蠟切片機(LEICA公司)，組織包埋機(常州中威儀器公司)，組織脫水機(日本SAKURA公司)，恒溫培養(yǎng)箱(常州澳華儀器有限公司)，免疫組化試劑盒(北京中杉金橋公司)。

1.2.2免疫組化法檢測：將舌癌和癌旁組織標(biāo)本以4%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片4 μm，于4℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩３Ｒ?guī)脫蠟水化后以PBS液浸泡10 min，使用蒸餾水沖洗，以高壓熱修復(fù)法進(jìn)行抗原修復(fù)，PBS液沖洗(3次×5 min)，并向切片加入適宜過氧化氫溶液，室溫下孵育60 min，PBS液沖洗后非免疫性動物血清封閉，滴加相應(yīng)一抗50 μl至切片中，用PBS液代替一抗作為陰性對照，室溫下置1 h。PBS液沖洗(3次×5 min)，滴加50 μl生物素標(biāo)記的二抗，室溫下置10 min。PBS液沖洗(3次×5 min)后滴加試劑相配套DAB顯色劑，顯微鏡下觀察染色強度。自來水沖洗后終止顯色，蘇木素復(fù)染，自來水沖洗。脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3結(jié)果判斷 由3名病理醫(yī)師對免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行評定，以陽性細(xì)胞染色強度和陽性細(xì)胞所占比例為評定標(biāo)準(zhǔn)，nm23-H1蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，染色強度判斷標(biāo)準(zhǔn)：0分為無染色；1分為淺黃色；2分為棕黃色；3分為棕褐色。染色細(xì)胞比例判斷標(biāo)準(zhǔn)，0分為無染色；1分為染色細(xì)胞比例≤25%；2分為染色細(xì)胞比例為26%～75%；3分為染色細(xì)胞比例>75%。兩項評分結(jié)果相乘作為最終得分：0～2分為陰性(-)，3～4分為弱陽性(+)，5～7分為陽性(++)，8～10分為強陽性(+++)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗，分析nm23-H1蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)與臨床病理特征間的關(guān)系，以Pearson相關(guān)性分析nm23-H1蛋白表達(dá)與肝癌臨床病理特征相關(guān)性。α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1nm23-H1蛋白表達(dá) 69例中舌癌細(xì)胞nm23-H1陰性31例，陽性38例，陽性表達(dá)率為55.07%；癌旁組織nm23-H1陰性7例，陽性62例，陽性表達(dá)率為89.86%。舌癌細(xì)胞nm23-H1陽性表達(dá)率低于癌旁組織(P<0.05)。舌癌及癌旁組織中nm23-H1陽性表達(dá)情況見圖1。

圖1 舌癌及癌旁組織中nm23-H1陽性表達(dá)情況

2.2nm23-H1表達(dá)與舌癌臨床特征關(guān)系 浸潤深度>4.0 mm者nm23-H1陽性表達(dá)率低于浸潤深度≤4.0 mm者，低分化者nm23-H1陽性表達(dá)率低于高+中分化者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者nm23-H1陽性表達(dá)率低于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見表1。

2.3nm23-H1陽性表達(dá)與舌癌浸潤深度、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性分析 nm23-H1陽性表達(dá)與舌癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與腫瘤分化程度呈正相關(guān)(P<0.05)。見表2。

3 討論

舌癌為表皮癌范疇，在口腔癌中占30%～50%[4]。舌癌組織惡性程度高，生長迅速且浸潤性強，可波及舌肌，影響舌體運動，使患者難以吞咽和進(jìn)食，且對正常發(fā)音亦有影響。隨著癌組織的發(fā)展，后期可侵犯扁桃體、舌腭弓，甚至蔓延至頜面部與頜骨，導(dǎo)致全舌固定，且易發(fā)生遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后差[5-7]。調(diào)查顯示，舌癌發(fā)病率升高[8-9]。

表1 38例nm23-H1陽性表達(dá)與舌癌臨床特征關(guān)系

表2 nm23-H1陽性表達(dá)與舌癌浸潤深度、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性分析

nm23-H基因位于人17號染色體上，具有nm23-H1和nm23-H2兩種亞型，其蛋白產(chǎn)物為核苷二磷酸激酶(NDPK)，對細(xì)胞信號傳遞、細(xì)胞分化、細(xì)胞結(jié)構(gòu)維持均有重要作用[10-12]。nm23-H1抑癌作用具有組織特異性，在某些腫瘤中其表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，其發(fā)生突變或缺失會使NDPK也發(fā)生變化，改變癌細(xì)胞浸潤與轉(zhuǎn)移。熊艷麗等[13]研究表示，nm23-H1在小細(xì)胞肺癌中呈低表達(dá)，且低表達(dá)與小細(xì)胞肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有密切相關(guān)性。毛帥等[14]研究報道，上調(diào)肝癌細(xì)胞nm23-H1基因能夠抑制肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力。但是對于nm23-H1與舌癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究，目前還鮮見報道。本研究結(jié)果顯示，舌癌組織nm23-H1陽性表達(dá)率低于癌旁組織，nm23-H1在舌癌組織中呈低表達(dá)，提示nm23-H1表達(dá)水平降低與舌癌發(fā)生有關(guān)。另外，本研究結(jié)果還顯示，浸潤深度>4.0 mm、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者nm23-H1陽性表達(dá)率分別低于浸潤深度≤4.0 mm、高+中分化、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者，提示nm23-H1陽性表達(dá)與舌癌浸潤深度、分化程度及轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性。進(jìn)一步分析顯示，nm23-H1陽性表達(dá)與舌癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與腫瘤分化程度呈正相關(guān)，提示舌癌浸潤程度越深、分化程度越低，nm23-H1陽性表達(dá)率越低，nm23-H1低表達(dá)舌癌患者易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

綜上所述，nm23-H1在舌癌組織中呈低表達(dá)，與浸潤深度、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，推測其可通過上調(diào)舌癌細(xì)胞nm23-H1表達(dá)抑制腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移。