• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    SPF雞糞菌移植對雛雞腸道菌群和大腸桿菌抗藥性的影響

    2018-10-22 07:01:10朱見深王進(jìn)文張慶駱延波李璐璐胡明宋新慧戴美學(xué)齊靜劉玉慶
    山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年7期

    朱見深 王進(jìn)文 張慶 駱延波 李璐璐 胡明 宋新慧 戴美學(xué) 齊靜 劉玉慶

    摘要:獸用抗生素的廣泛使用引起腸道細(xì)菌嚴(yán)重的抗藥性和菌群生態(tài)紊亂,并可能導(dǎo)致抗藥性人畜共患病原菌的傳播,給公共衛(wèi)生帶來嚴(yán)峻挑戰(zhàn),因此通過糞菌移植從動(dòng)物源頭降低腸道菌群的抗藥性勢在必行。本試驗(yàn)首先通過16S rDNA高通量測序技術(shù)比較糞菌移植供體SPF蛋雞及普通商品肉雞的糞便菌群,然后經(jīng)泄殖腔滴注方式接種1日齡SPF雛雞,于7日齡和35日齡測定移植后受體糞便菌群的微生物組,用瓊脂稀釋法測定移植前后腸道指示菌株大腸桿菌的抗藥性水平。結(jié)果表明,商品肉雞糞便菌群擁有更高的多樣性,而SPF蛋雞糞便菌群組成更為均一。除了共同擁有較多的厚壁菌門細(xì)菌,商品肉雞還含有較多的擬桿菌門細(xì)菌而SPF蛋雞則含有較多的變形菌門細(xì)菌。在屬水平上,商品肉雞的優(yōu)勢菌屬是糞棲桿菌屬、擬桿菌屬和別樣桿菌屬,而SPF蛋雞的優(yōu)勢菌屬為腸球菌屬、埃希-志賀菌屬以及克雷伯氏桿菌屬。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明,SPF蛋雞擁有對抗生素極為敏感的菌群,商品肉雞擁有較高的抗生素抗藥性菌群。將兩組糞便菌群移植給新生雛雞后,抗藥性水平得到傳遞。該結(jié)果說明通過SPF雞糞菌移植雛雞,能安全地從源頭降低腸道菌群抗藥性,抵抗家禽養(yǎng)殖環(huán)境中高抗藥性病原菌的侵害,為遏制動(dòng)物源細(xì)菌抗藥性提供一種新的解決方法。

    關(guān)鍵詞:抗藥性;SPF雞;糞菌移植;16S rDNA高通量測序;腸道菌群

    中圖分類號:S852.6文獻(xiàn)標(biāo)識號:A文章編號:1001-4942(2018)07-0006-07

    Abstract The widespread use of veterinary antibiotics causes serious bacterial resistance and gut bacterial ecological disturbance, as well as the spread of antibiotic-resistant zoonotic pathogens, which posing a serious challenge to public health. Therefore, it is imperatived to reduce the gut bacterial resistance from the source of animals through fecal micorbiota transplantation (FMT). Firstly, the 16S rDNA high-throughput sequencing technology was used to analyze the fecal microbiota of SPF laying hens and ordinary commercial broilers to select appropriate donor. Then one-day-old SPF chicks were inoculated by cloaca inoculation, and analysis of fecal microbiota was conducted at the 7-and 35-day-age respectively after transplantation. Furthermore, the agar dilution method was used to determine the level of antibiotic resistance of the intestinal indicator strain E. coli before and post transplantation. The results showed that the fecal microbiota of commercial broilers had higher alpha diversity, while that of SPF laying hens was more uniform. In addition to sharing the same Firmicutes in common, commercial broilers had more Bacteroidetes and SPF laying hens had more Proteobacteria. At the genus level, the dominant genus of commercial broilers were Faecalibacterium, Bacteroides and Alistipes, while SPF laying hens were Enterococcus, Eich-Shigella and Klebsiella. The results of antimicrobial susceptibility testing showed that E. coli strains of SPF laying hens were very sensitive to testing antibiotics, while commercial broilers had a higher antibiotic-resistant flora. After the two groups of fecal microbiota were transplanted into newborn chicks, the level of antibiotic resistance was transferred. These results suggested that FMT from SPF chickens to chicks could safely reduce the intestinal bacterial resistance from source and resist the invading of the high-resistant pathogenic bacteria in the poultry breeding environments, which providing a new solution to repress the bacterial resistance of animals.

    Keywords Antimicrobial resistance; SPF chicken; Fecal microbiota transplantation;16S rDNA high-throughput sequencing; Intestinal flora

    抗生素是一把四刃劍[1],其不合理使用加速了抗藥菌和抗藥基因的產(chǎn)生及其在環(huán)境中的傳播,導(dǎo)致很多抗生素失效,使一些感染無法治愈,成為全球公共衛(wèi)生的一大威脅[2,3];另外,青霉素類、喹諾酮類、氨基糖苷類及碳青霉烯類抗生素都是廣譜抗生素,在使用這些抗生素時(shí)難免“波及無辜”,破壞宿主正常的共生微生物群[4],而共生微生物群與宿主的健康息息相關(guān),菌群紊亂會導(dǎo)致許多疾病[5]。使用抗生素(如鏈霉素)會促使宿主細(xì)胞及菌群代謝改變,而其代謝產(chǎn)物會促進(jìn)一些病原菌(鼠傷寒沙門氏菌、大腸桿菌、艱難梭菌)的生長[6,7]。因此,減少抗生素使用勢在必行。

    為解決抗藥性問題及減少抗生素的使用,目前發(fā)展出許多應(yīng)對策略,包括研發(fā)新的抗菌藥物、應(yīng)用噬菌體療法及利用益生菌等[8-10]。隨著菌群研究的成熟,通過調(diào)節(jié)菌群進(jìn)行病原菌感染治療及清除抗藥菌成為一種新穎、有效的策略[11]。

    糞菌移植(fecal microbiota transplantation,F(xiàn)MT)是一種重塑腸道菌群的方法,是治療腸道菌群紊亂導(dǎo)致疾病的重要手段[12]。目前FMT應(yīng)用于人類治療艱難梭菌感染(CDI)取得了巨大成功[13]。但是關(guān)于動(dòng)物養(yǎng)殖中的FMT相對落后,在豬上FMT僅有數(shù)篇文獻(xiàn)可查,這些文獻(xiàn)多研究如何改善豬的腸道健康及提高生長效果[14,15]。在雞上FMT的研究更少之又少,基于此,本研究嘗試?yán)眉S菌移植手段降低商品肉雞存在的高抗藥性問題,以期為降低細(xì)菌高抗藥性現(xiàn)狀提供一種新的解決途徑。

    1 材料與方法

    1.1 糞菌移植供體菌群的制備

    分別選擇商品肉雞和SPF蛋雞作為菌群供體進(jìn)行糞菌移植研究,其中商品肉雞來源于山東泰安某肉雞屠宰場,42日齡(標(biāo)記為Broiler),SPF蛋雞來源于山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所SPF雞場,200日齡(標(biāo)記為SPF)。無菌采集二者的新鮮盲腸內(nèi)容物,在生物安全柜內(nèi)稱取10 g盲腸內(nèi)容物置于無菌燒杯內(nèi),加入無菌PBS緩沖液,配制成100 mL懸液,攪拌使懸液均一。將均一懸液轉(zhuǎn)移至2個(gè)50 mL無菌離心管,1 800 r/min離心10 min使懸液中的大顆粒沉降。將離心后的懸液用經(jīng)過滅菌的三層濾布(紗布、80目濾布、150目濾布)分別進(jìn)行過濾,最后獲得均一、棕色的接種液。

    1.2 糞菌移植受體雛雞的選擇、分組及接種方式

    受體SPF雛雞來源于山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所SPF雞場,1日齡,隨機(jī)分為3組,每組20只,分別為商品肉雞菌群接種組(標(biāo)記為R_B),SPF雞菌群接種組(標(biāo)記為R_S)及PBS接種對照組(標(biāo)記為Con)。分別吸取50 μL不同組別的新鮮接種液,對1日齡雛雞進(jìn)行泄殖腔滴注。每組分籠飼養(yǎng)至35日齡,自由采食和飲水,溫度設(shè)置為第1 d 36℃,以后每7 d降低2℃,直至35日齡。

    1.3 糞菌移植前后腸道菌群的16S rDNA高通量測序及分析

    1.3.1 DNA 提取和PCR擴(kuò)增 根據(jù)E.Z.N.A. Soil試劑盒(Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA)說明書進(jìn)行供體和受體糞樣總DNA抽提,DNA濃度和純度利用NanoDrop 2000進(jìn)行檢測,利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA提取質(zhì)量;用338F (5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和806R (5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) 引物對V3-V4可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性3 min;95℃變性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸30 s,共27個(gè)循環(huán);最后72℃延伸10 min(PCR儀:ABI GeneAmp 9700型)。擴(kuò)增體系為20 μL:5×FastPfu緩沖液4 μL,2.5 mmol/L dNTPs 2 μL,引物(5 μmol/L)各0.8 μL,F(xiàn)astPfu聚合酶0.4 μL,DNA模板0.2 μL,補(bǔ)ddH2O至20 μL。

    1.3.2 Illumina Miseq測序 使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR產(chǎn)物,利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit (Axygen Biosciences, Union City, CA, USA)進(jìn)行純化,Tris-HCl洗脫,2%瓊脂糖電泳檢測。利用QuantiFluorTM-ST(Promega, USA) 進(jìn)行檢測定量。根據(jù)Illumina MiSeq 平臺(Illumina, San Diego, USA)PE300標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將純化后的擴(kuò)增片段構(gòu)建文庫。構(gòu)建文庫步驟:連接“Y”字形接頭;使用磁珠篩選去除接頭自連片段;利用PCR擴(kuò)增進(jìn)行文庫模板的富集;氫氧化鈉變性, 產(chǎn)生單鏈DNA片段。利用Illumina公司的Miseq PE300平臺進(jìn)行測序(上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司)。

    1.3.3 數(shù)據(jù)處理 原始測序序列使用Trimmomatic軟件質(zhì)控,使用FLASH軟件進(jìn)行拼接:設(shè)置50 bp的窗口,如果窗口內(nèi)的平均質(zhì)量值低于20,從窗口開始截去后端堿基,去除質(zhì)控后長度低于50 bp的序列;barcode需精確匹配,引物允許2個(gè)堿基的錯(cuò)配,去除模糊堿基;根據(jù)重疊堿基(overlap)將兩端序列進(jìn)行拼接,overlap需大于10 bp,并去除無法拼接的序列。使用UPARSE軟件(version 7.1,http://drive5.com/uparse/),根據(jù)97%的相似度對序列進(jìn)行操作分類單元(operational taxonomic unit,OTU)聚類;使用UCHIME軟件剔除嵌合體。利用RDP classifier (http://rdp.cme.msu.edu/) 對每條序列進(jìn)行物種分類注釋,比對Silva數(shù)據(jù)庫(SSU123),設(shè)置比對閾值為70%。

    1.4 糞菌移植前后腸道優(yōu)勢菌株大腸桿菌的鑒定及藥敏試驗(yàn)

    糞菌移植前,將供體菌群,即商品肉雞和SPF雞的糞便菌群分別劃線麥康凱培養(yǎng)基選擇性篩選大腸桿菌,然后用質(zhì)譜法進(jìn)行鑒定。糞菌移植后,35 d的飼養(yǎng)時(shí)間內(nèi)每隔1 d每組隨機(jī)收集3個(gè)受體SPF雛雞的新鮮糞樣,用同樣的方法進(jìn)行大腸桿菌的分離鑒定。

    將質(zhì)譜鑒定獲得的供體和受體菌群中的優(yōu)勢大腸桿菌菌株,利用瓊脂稀釋法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。選擇的藥物為氨芐西林、氟苯尼考、新霉素、多西環(huán)素、頭孢噻呋、阿莫西林-克拉維酸、慶大霉素和多黏菌素8種。根據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定,統(tǒng)計(jì)抗藥率及最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)頻率分布[16]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 糞菌移植供體菌群多樣性分析

    通過OTU聚類分析發(fā)現(xiàn),商品肉雞(Broiler)糞便菌群含有378個(gè)OTU,SPF蛋雞(SPF)含有127個(gè)OTU,兩組共同含有92個(gè)OTU,而特有的OTU,SPF蛋雞糞便菌群僅含35個(gè),低于商品肉雞的286個(gè)(圖1A)。從α多樣性指數(shù)(Chao指數(shù))比較可以發(fā)現(xiàn)商品肉雞糞便菌群組成的豐富度及多樣性較SPF蛋雞糞便菌群都高(Welchs t檢驗(yàn),P<0.05),SPF蛋雞糞便菌群組成更為均一(圖1B)。考慮到兩組雞糞便菌群α多樣性水平不同,β多樣性或許存在差異,我們基于OTUs繼續(xù)分析,以Weighted UniFrac算法對菌群組成進(jìn)行進(jìn)化距離聚類分析,發(fā)現(xiàn)SPF的3個(gè)重復(fù)樣本距離近,作為一組,而Broiler的3個(gè)重復(fù)樣本為另一組(圖1C)。同樣的,在基于OTUs以Bray-Curtis算法計(jì)算的主坐標(biāo)分析(PCoA,principal coordinates analysis)中,兩組樣本也分散開(圖1D)。

    2.2 糞菌移植供體菌群結(jié)構(gòu)組成差異比較

    通過進(jìn)化關(guān)系及PCoA分析發(fā)現(xiàn)兩組雞糞便菌群不同,于是進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)兩組雞糞便菌群分類學(xué)組成的不同。結(jié)果在分類學(xué)門(Phylum)水平上,SPF蛋雞(SPF)主要由厚壁菌門(Firmicutes,59.91%)、變形菌門(Proteobacteria,39.59%)組成;而商品肉雞(Broiler)的優(yōu)勢菌門也是厚壁菌門(68.31%),而第二優(yōu)勢菌門卻為擬桿菌門(Bacteroidetes,25.84%),還含有少量的變形菌門(2.60%),而且兩組糞便菌群在變形菌門和擬桿菌門組成結(jié)構(gòu)上存在顯著差異,而在厚壁菌門上差異不顯著。在屬水平上,SPF蛋雞糞便菌群主要由腸球菌屬(Enterococcus,42.56%)、埃希-志賀菌屬(Escherichia-Shigella,31.75%)和克雷伯氏桿菌屬(Klebsiella,7.02%)組成,而商品肉雞糞便菌群主要由糞棲桿菌屬(Faecalibacterium,13.26%)、別樣桿菌屬(Alistipes,12.51%)和擬桿菌屬(Bacteroides,12.17%)組成,而且這些菌屬在兩組中的相對豐度都存在顯著差異(表1)。

    2.3 糞菌移植供體菌群優(yōu)勢菌株大腸桿菌的抗藥性水平分析

    經(jīng)過麥康凱培養(yǎng)基選擇性分離培養(yǎng)和質(zhì)譜鑒定,商品肉雞和SPF蛋雞分別獲得19株和25株大腸桿菌。利用瓊脂稀釋法對這44株大腸桿菌的抗藥率與MIC頻率分布進(jìn)行了統(tǒng)計(jì),結(jié)果表明商品肉雞組對選定的7種抗生素的抗藥率均高于SPF蛋雞組,SPF蛋雞組對頭孢噻呋、阿莫西林-克拉維酸兩種抗生素存在低水平抗藥菌株,對其他抗生素皆敏感(圖2A);從整體上看,Broiler組中大腸桿菌MIC分布集中于數(shù)值較大范圍,而SPF組相對集中于數(shù)值較小范圍(圖2B),進(jìn)一步說明SPF組抗藥性水平較低,而Broiler組抗藥性水平較高。

    2.4 糞菌移植對受體雛雞腸道菌群微生物組的影響

    選擇7日齡和35日齡受體雛雞的糞便進(jìn)行菌群組成分析,結(jié)果表明糞菌移植對受體雛雞微生物組的影響程度小于受體雛雞日齡增長帶來影響。經(jīng)單因素方差分析(one-way ANOVA)發(fā)現(xiàn),在分類學(xué)門水平上,厚壁菌門和變形菌門在6個(gè)小組中存在顯著差異(圖3B)。而在分類學(xué)屬水平上,受體雛雞的優(yōu)勢菌為乳酸桿菌屬(Lactobacillus)和埃希-志賀菌屬,且乳酸菌屬、埃希-志賀菌屬以及腸球菌屬在6個(gè)小組中存在極顯著差異(圖3A)。

    2.5 糞菌移植對雛雞腸道優(yōu)勢菌株大腸桿菌抗藥性的影響

    將具有不同抗藥性水平的糞便菌群移植給受體雛雞,并在移植后35日內(nèi),對雛雞每隔1 d采集一次新鮮糞便,分離優(yōu)勢菌株大腸桿菌,并經(jīng)質(zhì)譜鑒定,將各組鑒定后的大腸桿菌(肉雞組46株,SPF組41株,對照組40株),經(jīng)藥敏試驗(yàn)分析得知,接種SPF雞糞便菌群的雛雞組(R_S)糞菌中的大腸桿菌對所測試的8種藥物的抗藥性水平明顯低于接種商品肉雞的受體雛雞組(R_B),甚至低于對照組(Con)(圖4)。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)供體抗藥性水平較高時(shí),接種后抗藥性水平也較高。該結(jié)果說明糞菌移植可將供體糞便大腸桿菌抗藥性水平傳遞給受體雛雞,達(dá)到降低細(xì)菌抗藥性的目的。

    3 討論與結(jié)論

    本研究首先通過16S rDNA高通量測序技術(shù)分析了在密閉環(huán)境中養(yǎng)殖的SPF蛋雞與在開放環(huán)境中養(yǎng)殖的普通商品肉雞的糞便菌群組成,并比較了二者糞便中大腸桿菌對抗生素的抗藥性水平,結(jié)果顯示兩種供體的菌群組成存在很大差異,普通商品肉雞的腸道菌群多樣性優(yōu)于SPF蛋雞,而SPF蛋雞糞便菌群組成更為均一。很多文獻(xiàn)介紹散養(yǎng)或放養(yǎng)的雞腸道菌群多樣性相比于籠養(yǎng)的更加豐富,這表明與外界環(huán)境的接觸對雞腸道菌群的發(fā)展起到一定作用[17,18]。除了共同擁有較多的厚壁菌門細(xì)菌,商品肉雞含有更多的擬桿菌門細(xì)菌,而SPF蛋雞含有更多變形菌門細(xì)菌。商品肉雞的優(yōu)勢菌屬是糞棲桿菌屬、擬桿菌屬,SPF蛋雞的優(yōu)勢菌屬為腸球菌屬、埃希-志賀菌屬以及克雷伯氏桿菌屬,而我們先前的研究結(jié)果(數(shù)據(jù)未展現(xiàn))發(fā)現(xiàn)SPF蛋雞的優(yōu)勢菌屬為乳桿菌屬,這可能是個(gè)體差異導(dǎo)致的菌群差異。由于SPF雞無特定病原,飼養(yǎng)環(huán)境嚴(yán)格無菌而且不使用抗生素,因此SPF雞腸道內(nèi)棲息的菌群對抗生素敏感,而商品肉雞養(yǎng)殖場環(huán)境中的細(xì)菌多具有高抗藥水平,因此其腸道內(nèi)定殖的菌多為高抗菌。同時(shí)試驗(yàn)結(jié)果表明,SPF蛋雞糞便中大腸桿菌對多種抗生素的抗藥性水平明顯低于普通商品肉雞。因此根據(jù)抗藥性水平篩選確定SPF雞糞便菌群可以作為糞菌移植的優(yōu)良供體。

    我們將SPF蛋雞和商品肉雞的糞便菌群移植給1日齡腸道幾乎無菌的SPF雛雞,飼養(yǎng)至35日齡,觀察糞菌移植對受體雛雞腸道微生物組成及大腸桿菌抗藥性的影響,發(fā)現(xiàn)糞菌移植使受體雛雞糞便菌群同組之間更為均一,但總體來看糞菌移植對受體雛雞糞便菌群的影響程度小于日齡帶來的影響。有研究發(fā)現(xiàn)飼料添加有機(jī)酸對雞腸道菌群的影響程度小于日齡帶來的影響,說明雞本身的遺傳與生理在腸道菌群的動(dòng)態(tài)變化中起到重要作用[19]。也有研究將糞便菌群通過口服、在孵化中的胚上涂抹雞盲腸內(nèi)容物等方式移植給受體,結(jié)果一定程度上能夠表明受體菌群的發(fā)展與最初的接種或移植存在關(guān)系,但結(jié)果的重復(fù)性不是很好[20]。

    不同的菌群組成會影響宿主的體重和免疫指標(biāo)[21,22],在本試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)接受糞菌移植的不同組雛雞體重、免疫指標(biāo)無顯著差異(數(shù)據(jù)未展示)。但最重要的是,將兩組糞便菌群移植給新生雛雞后,抗藥性水平得到了傳遞,即受體雛雞SPF組的抗藥性水平(抗藥率及MIC分布)相比普通商品肉雞及對照組顯著降低。這為解決家禽養(yǎng)殖環(huán)境中的高抗藥性現(xiàn)狀提供了出路。

    FMT多用于治療人的艱難梭菌感染(CDI)[23],近來研究發(fā)現(xiàn)FMT在治愈CDI的同時(shí),患者腸道內(nèi)其他抗藥菌伴隨著艱難梭菌也消失了[24],F(xiàn)MT不僅可以減少患者體內(nèi)抗生素抗藥基因的種類及數(shù)量,而且能清除大部分病原菌。動(dòng)物剛出生時(shí)是菌群定殖的關(guān)鍵時(shí)期[25],選擇在雛雞進(jìn)入養(yǎng)殖場之前將對抗生素敏感的SPF雞糞便菌群移植給新生雛雞,使對抗生素敏感的菌群在雛雞腸道定殖,對抗養(yǎng)殖場原有環(huán)境的抗藥性菌群,是降低抗藥性的可行途徑。

    展望糞菌移植在動(dòng)物養(yǎng)殖中的應(yīng)用,還有諸多問題,例如,如何篩選安全有效的供體,如何實(shí)現(xiàn)供體菌群的標(biāo)準(zhǔn)化及規(guī)?;苽?,如何選擇最佳接種方式,如何提高供體菌群在受體中的定殖效率,F(xiàn)MT非特異和特異治療的機(jī)制研究等只有將這些因素研究透徹,才能使FMT的應(yīng)用更加規(guī)范、有效。

    參 考 文 獻(xiàn):

    [1] Blaser M J. Antibiotic use and its consequences for the normal microbiome[J]. Science,2016, 352(6285): 544-545.

    [2] Haaber J, Leisner J J, Cohn M T, et al. Bacterial viruses enable their host to acquire antibiotic resistance genes from neighbouring cells[J]. Nat. Commun., 2016, 7: 13333.

    [3] Canton R, Morosini M I. Emergence and spread of antibiotic resistance following exposure to antibiotics[J]. FEMS Microbiol. Rev., 2011, 35(5): 977-991.

    [4] Pamer E G. Resurrecting the intestinal microbiota to combat antibiotic-resistant pathogens[J]. Science,2016, 352(6285): 535-538.

    [5] Lynch S V, Pedersen O. The human intestinal microbiome in health and disease[J]. N. Engl. J. Med., 2016, 375(24): 2369-2379.

    [6] Theriot C M, Koenigsknecht M J, Carlson P J, et al. Antibiotic-induced shifts in the mouse gut microbiome and metabolome increase susceptibility to Clostridium difficile infection[J]. Nat. Commun.,2014, 5: 3114.

    [7] Faber F, Tran L, Byndloss M X, et al. Host-mediated sugar oxidation promotes post-antibiotic pathogen expansion[J]. Nature, 2016, 534(7609): 697-699.

    [8] Ling L L, Schneider T, Peoples A J, et al. A new antibiotic kills pathogens without detectable resistance[J]. Nature, 2015, 517(7535): 455-459.

    [9] Abedon S T, Kuhl S J, Blasdel B G, et al. Phage treatment of human infections[J]. Bacteriophage, 2012, 1(2): 66-85.

    [10]Gao P F, Ma C, Sun Z, et al. Feed-additive probiotics accelerate yet antibiotics delay intestinal microbiota maturation in broiler chicken[J]. Microbiome, 2017, 5(1): 91.

    [11]Buffie C G, Pamer E G. Microbiota-mediated colonization resistance against intestinal pathogens[J]. Nat. Rev. Immunol., 2013, 13(11): 790-801.

    [12]張發(fā)明, 范志寧, 季國忠. 糞菌移植的概念、歷史、現(xiàn)狀和未來[J]. 中國內(nèi)鏡雜志, 2012,18(9):930-934.

    [13]van Nood E, Vrieze A, Nieuwdorp M, et al. Duodenal infusion of donor feces for recurrent Clostridium difficile[J]. N. Engl. J. Med., 2013, 368(5): 407-415.

    [14]Diao H, Yan H L, Xiao Y, et al. Intestinal microbiota could transfer host gut characteristics from pigs to mice[J]. BMC Microbiol., 2016, 16(1): 238.

    [15]Hu L, Geng S, Li Y, et al. Exogenous fecal microbiota transplantation from local adult pigs to crossbred newborn piglets[J]. Front. Microbiol., 2017, 8: 2663.

    [16]Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI).M100-S26 Performance standards for antimicrobial susceptibility testing:twenty-sixth informational supplement[M].Wayne:CLSI,2016.

    [17]Xu Y H, Yang H X, Zhang L L, et al. High-throughput sequencing technology to reveal the composition and function of cecal microbiota in Dagu chicken[J]. BMC Microbiol., 2016, 16(1): 259.

    [18]Cui Y, Wang Q, Liu S, et al. Age-related variations in intestinal microflora of free-range and caged hens[J]. Front. Microbiol., 2017, 8: 1310.

    [19]Oakley B B, Buhr R J, Ritz C W, et al. Successional changes in the chicken cecal microbiome during 42 days of growth are independent of organic acid feed additives[J]. BMC Vet. Res., 2014, 10(1): 282.

    [20]Donaldson E E, Stanley D, Hughes R J, et al. The time-course of broiler intestinal microbiota development after administration of cecal contents to incubating eggs[J]. PeerJ,2017, 5: e3587.

    [21]Han G G, Kim E B, Lee J, et al. Relationship between the microbiota in different sections of the gastrointestinal tract, and the body weight of broiler chickens[J]. SpringerPlus, 2016, 5(1): 911.

    [22]Varmuzova K, Kubasova T, Davidova-Gerzova L, et al. Composition of gut microbiota influences resistance of newly hatched chickens to Salmonella enteritidis infection[J]. Front. Microbiol., 2016, 7: 957.

    [23]Kassam Z, Lee C H, Yuan Y, et al. Fecal microbiota transplantation for Clostridium difficile infection: systematic review and meta-analysis[J]. Am. J. Gastroenterol.,2013, 108(4): 500-508.

    [24]Millan B, Park H, Hotte N, et al. Fecal microbial transplants reduce antibiotic-resistant genes in patients with recurrent Clostridium difficile infection[J]. Clin. Infect. Dis., 2016, 62(12): 1479-1486.

    [25]Clemente J C, Ursell L K, Parfrey L W, et al. The impact of the gut microbiota on human health: an integrative view[J]. Cell, 2012, 148(6): 1258-1270.

    美女福利国产在线| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲精品第二区| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产av一区二区精品久久| 最近中文字幕2019免费版| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 男女国产视频网站| 国产亚洲av高清不卡| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产免费福利视频在线观看| 少妇人妻 视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产99久久九九免费精品| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲第一av免费看| 亚洲av日韩在线播放| 69精品国产乱码久久久| 欧美精品av麻豆av| 久久国产精品影院| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩av不卡免费在线播放| 啦啦啦在线观看免费高清www| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日本黄色日本黄色录像| 男人操女人黄网站| av在线播放精品| 美女视频免费永久观看网站| 国产在线免费精品| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 一级黄片播放器| 一级黄片播放器| 亚洲三区欧美一区| 蜜桃国产av成人99| 新久久久久国产一级毛片| 韩国精品一区二区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲七黄色美女视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 99国产精品99久久久久| 精品亚洲成国产av| 男女下面插进去视频免费观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 我要看黄色一级片免费的| videos熟女内射| 黑丝袜美女国产一区| 免费不卡黄色视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| tube8黄色片| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲视频免费观看视频| 日本色播在线视频| 国产成人a∨麻豆精品| 18禁观看日本| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 免费不卡黄色视频| 一本大道久久a久久精品| 乱人伦中国视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 成年女人毛片免费观看观看9 | 91字幕亚洲| 女人精品久久久久毛片| 欧美性长视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区三 | 免费观看a级毛片全部| 人人澡人人妻人| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲男人天堂网一区| 国产精品成人在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 婷婷成人精品国产| 天天添夜夜摸| 2018国产大陆天天弄谢| 一区二区三区激情视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久9热在线精品视频| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲精品在线美女| 国产成人精品在线电影| 啦啦啦在线观看免费高清www| 手机成人av网站| 美女中出高潮动态图| 国产成人精品久久二区二区91| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 女性被躁到高潮视频| 老熟女久久久| 夫妻性生交免费视频一级片| 91麻豆av在线| 麻豆乱淫一区二区| 女人久久www免费人成看片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 好男人视频免费观看在线| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 性色av乱码一区二区三区2| 国产亚洲欧美精品永久| 激情视频va一区二区三区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产国语露脸激情在线看| 色播在线永久视频| 国产主播在线观看一区二区 | 午夜视频精品福利| 男女之事视频高清在线观看 | 十八禁高潮呻吟视频| 国产熟女欧美一区二区| bbb黄色大片| 久久久精品94久久精品| 999精品在线视频| 无遮挡黄片免费观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 中文字幕最新亚洲高清| 成年av动漫网址| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲国产精品一区三区| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲精品自拍成人| 亚洲 欧美一区二区三区| 嫩草影视91久久| 精品国产乱码久久久久久男人| 一边亲一边摸免费视频| 美女视频免费永久观看网站| 成年美女黄网站色视频大全免费| 亚洲情色 制服丝袜| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲五月色婷婷综合| 午夜福利,免费看| 最黄视频免费看| netflix在线观看网站| 日韩视频在线欧美| 日本色播在线视频| 成年人午夜在线观看视频| 国产欧美日韩一区二区三 | 精品久久蜜臀av无| 国产精品一二三区在线看| 国产一区二区三区综合在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲综合色网址| 亚洲五月色婷婷综合| 在线天堂中文资源库| 老司机午夜十八禁免费视频| av不卡在线播放| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久这里只有精品19| 五月天丁香电影| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 最黄视频免费看| 亚洲国产欧美网| 乱人伦中国视频| 亚洲精品国产区一区二| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 国产高清国产精品国产三级| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美xxⅹ黑人| 精品第一国产精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 色精品久久人妻99蜜桃| 午夜91福利影院| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久久亚洲精品成人影院| 脱女人内裤的视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 丝袜人妻中文字幕| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| videos熟女内射| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| av欧美777| 制服诱惑二区| 国产精品久久久久久精品电影小说| 宅男免费午夜| 国产成人免费观看mmmm| 久久久久久免费高清国产稀缺| 90打野战视频偷拍视频| 在线观看国产h片| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 老司机亚洲免费影院| 国产91精品成人一区二区三区 | 成年人黄色毛片网站| 高清不卡的av网站| 一二三四在线观看免费中文在| 爱豆传媒免费全集在线观看| 一区在线观看完整版| 久久久久国产一级毛片高清牌| 在线观看免费高清a一片| 美国免费a级毛片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 十八禁网站网址无遮挡| 久久九九热精品免费| 国产片内射在线| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 1024香蕉在线观看| 电影成人av| av网站在线播放免费| av国产精品久久久久影院| 婷婷成人精品国产| 黄片小视频在线播放| 亚洲人成电影观看| 男女国产视频网站| 97精品久久久久久久久久精品| 国产三级黄色录像| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 国产高清不卡午夜福利| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 涩涩av久久男人的天堂| 在线观看免费午夜福利视频| 少妇 在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 丁香六月天网| 欧美日韩福利视频一区二区| 麻豆乱淫一区二区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲av美国av| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美精品一区二区大全| 丰满少妇做爰视频| 啦啦啦 在线观看视频| 国产精品免费大片| 国产精品久久久av美女十八| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲熟女毛片儿| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 久久久国产一区二区| 午夜精品国产一区二区电影| 日韩人妻精品一区2区三区| 热re99久久国产66热| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产成人免费观看mmmm| 国产一级毛片在线| 日韩av不卡免费在线播放| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 宅男免费午夜| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| av线在线观看网站| 成人黄色视频免费在线看| 国产片特级美女逼逼视频| videosex国产| xxxhd国产人妻xxx| 人妻一区二区av| 中文字幕色久视频| 99久久人妻综合| 超色免费av| av不卡在线播放| 女性生殖器流出的白浆| 天堂8中文在线网| 亚洲国产看品久久| 欧美黄色淫秽网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲专区国产一区二区| av网站免费在线观看视频| 波多野结衣av一区二区av| 青草久久国产| 一级黄片播放器| 51午夜福利影视在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 午夜福利,免费看| 国产男女内射视频| 免费少妇av软件| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲五月色婷婷综合| 久久精品国产亚洲av高清一级| 大片免费播放器 马上看| 亚洲,欧美精品.| 中文字幕色久视频| 久久久国产欧美日韩av| 桃花免费在线播放| 好男人电影高清在线观看| 成人手机av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产一区二区激情短视频 | 韩国高清视频一区二区三区| 1024视频免费在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产男女超爽视频在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久久精品免费免费高清| 在线av久久热| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美激情高清一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 色播在线永久视频| 亚洲国产日韩一区二区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 美女视频免费永久观看网站| 嫁个100分男人电影在线观看 | 国产色视频综合| 下体分泌物呈黄色| 国产福利在线免费观看视频| 国产精品久久久久成人av| 视频区欧美日本亚洲| 一级毛片女人18水好多 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 五月天丁香电影| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 高清不卡的av网站| 看免费成人av毛片| 亚洲,一卡二卡三卡| 午夜福利,免费看| 久久久久精品国产欧美久久久 | 精品人妻熟女毛片av久久网站| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 青春草视频在线免费观看| 欧美日韩视频精品一区| 99国产精品99久久久久| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久性视频一级片| 国产成人免费无遮挡视频| videos熟女内射| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 婷婷色麻豆天堂久久| 五月天丁香电影| 免费观看av网站的网址| 中文字幕精品免费在线观看视频| 丝袜美腿诱惑在线| 我要看黄色一级片免费的| 国产av精品麻豆| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美97在线视频| 国产成人免费观看mmmm| 一个人免费看片子| 亚洲综合色网址| 亚洲第一av免费看| 亚洲综合色网址| 搡老岳熟女国产| 亚洲免费av在线视频| 97在线人人人人妻| 少妇的丰满在线观看| av在线老鸭窝| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产在线观看jvid| 大片电影免费在线观看免费| 午夜福利乱码中文字幕| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产欧美日韩一区二区三 | 免费在线观看日本一区| 一二三四社区在线视频社区8| 天堂8中文在线网| 亚洲,欧美,日韩| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲av美国av| 日日夜夜操网爽| 国产在线视频一区二区| 男男h啪啪无遮挡| av有码第一页| 久久精品国产综合久久久| 亚洲人成77777在线视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 啦啦啦 在线观看视频| 国产av国产精品国产| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久99热这里只频精品6学生| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美人与善性xxx| 久久综合国产亚洲精品| www.av在线官网国产| 国产1区2区3区精品| 黄色一级大片看看| 亚洲av片天天在线观看| 黄频高清免费视频| 下体分泌物呈黄色| 亚洲人成电影观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产成人91sexporn| 新久久久久国产一级毛片| 日韩大片免费观看网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | www.av在线官网国产| 久久国产亚洲av麻豆专区| 色94色欧美一区二区| 精品国产国语对白av| 久久中文字幕一级| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久人人爽人人片av| 嫁个100分男人电影在线观看 | 首页视频小说图片口味搜索 | 色视频在线一区二区三区| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲 欧美一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 99九九在线精品视频| 欧美激情高清一区二区三区| 下体分泌物呈黄色| 久久精品亚洲av国产电影网| 999久久久国产精品视频| 亚洲伊人久久精品综合| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久ye,这里只有精品| 尾随美女入室| 99国产精品99久久久久| 性色av乱码一区二区三区2| a级毛片黄视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 丝袜在线中文字幕| 一区二区av电影网| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品 欧美亚洲| kizo精华| 国产1区2区3区精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 婷婷色综合www| 亚洲av日韩在线播放| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲美女黄色视频免费看| 久久久久久人人人人人| av片东京热男人的天堂| 国产淫语在线视频| 久久ye,这里只有精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品久久蜜臀av无| 国产精品一区二区在线不卡| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 成年动漫av网址| 最新在线观看一区二区三区 | 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产成人a∨麻豆精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 1024视频免费在线观看| 久久久久久人人人人人| 中文字幕色久视频| 18禁国产床啪视频网站| 国产免费视频播放在线视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 最新在线观看一区二区三区 | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产亚洲精品第一综合不卡| 欧美少妇被猛烈插入视频| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产成人精品久久二区二区91| 97人妻天天添夜夜摸| 一区二区三区精品91| 国产高清视频在线播放一区 | 日韩免费高清中文字幕av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美日韩黄片免| 欧美日韩一级在线毛片| 丝袜喷水一区| 成人影院久久| 波野结衣二区三区在线| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产精品国产三级专区第一集| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一级毛片 在线播放| 在线观看免费视频网站a站| 精品一区二区三区av网在线观看 | 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲国产日韩一区二区| 不卡av一区二区三区| 18在线观看网站| 中文字幕亚洲精品专区| 国产精品人妻久久久影院| a级片在线免费高清观看视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 免费高清在线观看日韩| 美女国产高潮福利片在线看| 免费观看a级毛片全部| 91成人精品电影| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲黑人精品在线| 婷婷色av中文字幕| 亚洲免费av在线视频| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲精品av麻豆狂野| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 一级黄片播放器| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 日韩欧美一区视频在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 赤兔流量卡办理| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 蜜桃在线观看..| 中文字幕最新亚洲高清| 色播在线永久视频| 亚洲精品一二三| √禁漫天堂资源中文www| 中文字幕亚洲精品专区| 成年人免费黄色播放视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产av一区二区精品久久| 国产成人免费观看mmmm| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲 国产 在线| 亚洲国产av影院在线观看| 午夜免费成人在线视频| 七月丁香在线播放| 午夜免费成人在线视频| 色婷婷av一区二区三区视频| av在线app专区| 各种免费的搞黄视频| 午夜影院在线不卡| 大片电影免费在线观看免费| 在线观看免费视频网站a站| 免费av中文字幕在线| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美大码av| 熟女av电影| 一级毛片女人18水好多 | 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 成年动漫av网址| www.熟女人妻精品国产| 欧美黑人精品巨大| 国产视频首页在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 国产一区二区三区av在线| 在线观看一区二区三区激情| 看免费av毛片| 欧美在线一区亚洲| 好男人电影高清在线观看| 多毛熟女@视频| 看十八女毛片水多多多| 一级黄色大片毛片| 一级毛片 在线播放| 午夜福利,免费看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 亚洲熟女精品中文字幕| 男人添女人高潮全过程视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男女免费视频国产| 久久久久久久大尺度免费视频| 2018国产大陆天天弄谢| 看十八女毛片水多多多| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 18禁国产床啪视频网站| 高清欧美精品videossex| 国产精品成人在线| 国产xxxxx性猛交| 国产av国产精品国产| 伊人亚洲综合成人网| 99久久人妻综合| 丰满迷人的少妇在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 婷婷色av中文字幕| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 成人国语在线视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 手机成人av网站| 日本wwww免费看| 尾随美女入室| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产国语露脸激情在线看| 成人午夜精彩视频在线观看| 好男人视频免费观看在线| 91国产中文字幕| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产野战对白在线观看| 一级毛片女人18水好多 | 亚洲国产成人一精品久久久| 一级毛片电影观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 飞空精品影院首页| 男女边吃奶边做爰视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品久久久久久精品古装| 国产激情久久老熟女| 国产成人精品在线电影| 久久精品久久久久久久性| 高清av免费在线| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 精品欧美一区二区三区在线| 看十八女毛片水多多多| 天堂俺去俺来也www色官网| 91麻豆av在线| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 亚洲成人免费av在线播放| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 老鸭窝网址在线观看| 午夜免费成人在线视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲色图综合在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 少妇精品久久久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 欧美精品一区二区免费开放| 久热这里只有精品99|