PCR技術(shù)在豬病診斷和防治中的應(yīng)用

王金平 張會(huì)超

摘要：最近這些年以來，我國(guó)豬的飼養(yǎng)量比較大，但是由于飼養(yǎng)水平的不同，導(dǎo)致豬場(chǎng)中疾病的發(fā)生增多，而且流行的疫病多為典型性、多種病毒混合感染的趨勢(shì)發(fā)展，感染患豬在臨床上表現(xiàn)的癥狀沒有明顯的特征性，從而導(dǎo)致對(duì)于疾病的確診更加的困難?，F(xiàn)主要通過對(duì)于PCR技術(shù)特性的簡(jiǎn)單介紹，從PCR在臨床生產(chǎn)中對(duì)于豬常見傳染性疾病的診斷和防治方面展開分析，以期對(duì)疾病發(fā)揮更好的控制作用。

關(guān)鍵詞：PCR技術(shù)；豬?。辉\斷；防治

中圖分類號(hào)：S858. 28

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：2095-9737（2018）06-0069-01

1 PCR檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展

通過多年在臨床應(yīng)用PCR技術(shù)對(duì)于豬病的檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)可知，該技術(shù)不僅擴(kuò)增速度快，特異性高，而且最重要的優(yōu)點(diǎn)就是便于操作，所以方便于臨床應(yīng)用。PCR檢測(cè)技術(shù)可以在比較短的時(shí)間內(nèi)針對(duì)目的基因展開比較快速的擴(kuò)增，使得微量目的基因的檢測(cè)在臨床生產(chǎn)中得以實(shí)現(xiàn)，靶序列兩端的寡核苷酸引物是決定PCR檢測(cè)技術(shù)特異性的主要因素。最近這些年P(guān)CR檢測(cè)技術(shù)呈現(xiàn)不斷的發(fā)展?fàn)顟B(tài)，不僅是局限于傳統(tǒng)的PCR檢測(cè)技術(shù)，而是在此基礎(chǔ)之上繼續(xù)研究從而衍生出各種新型PCR技術(shù)。

2 應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)單一病毒

2.1 豬2型圓環(huán)病毒

2型圓環(huán)病毒（ PCV）是目前所知的最小的動(dòng)物病毒。根據(jù)相關(guān)研究可知有PCV1和PCV2兩個(gè)血清型，其中PCV1屬于非致病性的病毒而PCV2則是致病性的病毒。臨床中PCV主要會(huì)引發(fā)斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征，如果引起的是急性發(fā)病，則患病豬群的病死率可能達(dá)到10%，而耐過豬在生長(zhǎng)的后期發(fā)育遲緩非常明顯，生產(chǎn)中通?？梢圆捎靡呙缃o豬群加以免疫，還有多種抗生素類藥物也能對(duì)該病發(fā)揮一定的治療效果。

根據(jù)相關(guān)的報(bào)道可知依據(jù)基因庫(kù)中2型圓環(huán)病毒ORF2的基因序列設(shè)計(jì)引物，以臨床分離的該病毒基因?yàn)槟０?，通過篩選合適的反應(yīng)條件，建立了一種能夠檢測(cè)圓環(huán)2型病毒的PCR方法。根據(jù)結(jié)果可知該方法的特異性非常良好，應(yīng)用PCR檢測(cè)的方法可以針對(duì)最低限度為含PCV- 2DNA含量為10.8 pg的樣品加以檢測(cè)，此結(jié)果說明PCR檢測(cè)法相對(duì)比較靈敏。生產(chǎn)中采用此檢測(cè)法該方法在實(shí)際臨床中對(duì)于送檢病料加以檢測(cè)，均能獲得比較高的準(zhǔn)確率，所以證明PCR檢測(cè)的方法符合實(shí)際生產(chǎn)的需要，可以在豬的防疫方面提供相對(duì)可靠的依據(jù)。

2.2 豬瘟病毒

豬瘟在豬飼養(yǎng)過程中具有嚴(yán)重的危害性，一旦在豬場(chǎng)中發(fā)生流行，就會(huì)給飼養(yǎng)者帶來比較嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。我國(guó)有關(guān)部門一直采取相應(yīng)的措施以控制豬瘟的發(fā)生和蔓延，但是僅有很少的收效。所以最近這些年已經(jīng)有相關(guān)專業(yè)的科研人員通對(duì)引物加以不同的設(shè)計(jì)，然后建立用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ RT- PCR）技術(shù)檢測(cè)豬瘟病毒的方法。通過科研人員的相關(guān)實(shí)驗(yàn)可知，表明采用RT - PCR檢測(cè)法能夠在一定程度上解決傳統(tǒng)免疫血清學(xué)方法不能解決的問題。PCR檢測(cè)法具有比較強(qiáng)的特異性和比較高的可靠性，在實(shí)際生產(chǎn)中加以應(yīng)用可以在比較短的時(shí)間內(nèi)對(duì)豬瘟病毒做出準(zhǔn)確的診斷分析。

2.3 母豬繁殖障礙與呼吸綜合征

繁殖與呼吸綜合征目前在全世界的范圍內(nèi)都有發(fā)生和流行，感染的母豬在繁殖功能方面出現(xiàn)異常，仔豬死亡并且免疫機(jī)能出現(xiàn)障礙。所以在實(shí)際生產(chǎn)中，對(duì)于該病在比較短的時(shí)間內(nèi)做出快速診斷是防治該病比較重要的因素。如果在出現(xiàn)疾病的時(shí)候仍然采用比較常規(guī)的檢測(cè)方法，操作非常繁瑣而且耗費(fèi)大量的時(shí)間和精力，在診斷的時(shí)候與豬瘟、細(xì)小病毒非常容易發(fā)生混淆，所以導(dǎo)致結(jié)果的可信性不高。因此有相關(guān)專業(yè)的科研人員通過建立利用反式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法對(duì)于該病毒加以檢測(cè)，在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用和不斷的摸索，從而建立PCR方法用于該病的檢測(cè)。

3 PCR在混合感染中的應(yīng)用

目前PCR檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域中還有一種多重PCR技術(shù)，是在同一反應(yīng)體系里加入兩種以上病毒的引物，此多重PCR檢測(cè)方法與普通的PCR技術(shù)相比可以實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè)兩種或三種以上病原菌的目標(biāo)，且能夠獲得比較準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，給出的反應(yīng)比較快速，此外還具有敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，這些都是普通PCR檢測(cè)技術(shù)所缺少的。實(shí)際的養(yǎng)豬生產(chǎn)中出現(xiàn)多種病毒混合感染的情況比較常見，獸醫(yī)工作人員一直堅(jiān)持憑經(jīng)驗(yàn)或者是治療性的診斷方式進(jìn)行介入治療，很容易錯(cuò)過疾病最佳的治療時(shí)間，所以多重PCR技術(shù)的建立對(duì)于疾病的快速診斷是非常有必要的。但是目前的研究階段，多重PCR技術(shù)應(yīng)用于病原檢測(cè)的研究還是需要進(jìn)一步加以改善的。增加檢測(cè)病原的數(shù)量，可以通過進(jìn)一步增加反應(yīng)體系中的引物對(duì)，從而將一次擴(kuò)增反應(yīng)的檢測(cè)范圍進(jìn)行拓寬。除此之外，以后的研究可以對(duì)于檢測(cè)疫苗株和變異株作為重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行相關(guān)的流行病學(xué)調(diào)查，可以在疾病防治的方面進(jìn)行基礎(chǔ)的奠定。其次，還應(yīng)該將多重PCR檢測(cè)技術(shù)與其他技術(shù)互相結(jié)合，這樣能夠?qū)z測(cè)的敏感性和特異性在不同程度上提高并且將檢測(cè)時(shí)間相應(yīng)的縮短。最后要嚴(yán)格區(qū)分實(shí)驗(yàn)室，同時(shí)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)管理等措施。