非小細(xì)胞肺癌中雌激素受體α與β的表達(dá)及臨床意義

井曉婷　何芳　錢盼盼　張培蓓　葉賢偉　余紅　張湘燕

[摘要] 目的 探析非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）組織中雌激素受體α（estrogen receptor alpha，ERα）、雌激素受體β（estrogen receptor beta，ERβ）的表達(dá)及臨床意義。 方法 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測144個非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本、32個癌旁正常肺組織標(biāo)本（距腫塊5 cm以上）及17個肺良性病變組織標(biāo)本中ERα、ERβ的表達(dá)。 結(jié)果 ERα和ERβ在肺良性病變組織、癌旁肺組織、NSCLC組織中表達(dá)率分別為82.23%、84.38%、87.50%和47.06%、53.13%、66.67%，兩者組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；NSCLC組織中ERα、ERβ陽性表達(dá)與患者性別、癌細(xì)胞分化程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等因素?zé)o相關(guān)（P>0.05），NSCLC患者年齡≥60歲的癌組織中ERβ陽性表達(dá)率77.27%高于年齡<60歲患者50.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），然而NSCLC組織中ERα陽性表達(dá)率在年齡方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 ERα、ERβ在NSCLC組織中陽性表達(dá)與患者性別、癌細(xì)胞分化程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等因素均無明顯相關(guān)，ERβ在NSCLC組織中陽性表達(dá)可能與年齡相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌；雌激素受體α；雌激素受體β；表達(dá)

[中圖分類號] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2018）16-0001-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of estrogen receptor alpha（ERα） and estrogen receptor beta（ERβ） in the tissues of non-small cell lung cancer（NSCLC）. Methods Immunohistochemical SP was used to assess the expression of ERα and ERβ in 144 specimens of NSCLC tissues， 32 specimens of healthy lung tissues near the cancer（the distance to tumor was more than 5 cm） and 17 specimens of benign lung lesion tissues. Results The expression rates of ERα and ERβ in benign lung lesion tissues， lung tissues near the cancer and NSCLC tissues were 82.23%， 84.38%， 87.50% and 47.06%， 53.13%， 66.67%. There were no statistical differences between each other（P>0.05）. The positive expression of ERα and ERβ in the NSCLC tissues was not associated with patients gender， the degree of cancer cell differentiation， pathological type， lymphatic metastasis and TNM staging（P>0.05）. The positive expression of ERβ in the NSCLC tissues in patients aged ≥60 years was 77.27%， which was statistically different from that in patients aged<60 years （50.00%）（P<0.05）. The positive expression of ERα in the NSCLC tissues was not statistically different in different subgroups of age（P>0.05）. Conclusion The positive expression of ERα and ERβ in the NSCLC tissues was not significantly associated with patients gender， the degree of cancer cell differentiation， pathological type， lymphatic metastasis and TNM staging. The positive expression of ERβ in the NSCLC tissues might be associated with age.

[Key words] Non-Small cell lung cancer； Estrogen receptor α； Estrogen receptor β； Expression

肺癌，尤其是非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是全球常見的惡性腫瘤之一。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，雌激素及其受體系統(tǒng)在NSCLC的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著重要作用。雌激素受體（estrogen receptor，ER）目前已經(jīng)被證實包括雌激素受體α（estrogen receptor alpha，ERα）和雌激素受體β（estrogen receptor beta，ERβ），存在于細(xì)胞核內(nèi)或胞漿內(nèi)[1]。國內(nèi)外眾多報道均認(rèn)為NSCLC腫瘤細(xì)胞中均有ERα和/或ERβ陽性表達(dá)，且在正常肺組織中也發(fā)現(xiàn)有ERα和/或ERβ陽性表達(dá)[2]。近年來，眾多學(xué)者對NSCLC患者ER表達(dá)情況和預(yù)后相關(guān)性進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，ER的表達(dá)和腫瘤的預(yù)后有著極為密切的關(guān)系，但具體呈何種相關(guān)性尚需進(jìn)一步證實[3]。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法探討NSCLC患者肺癌組織中雌激素受體表達(dá)情況，并和癌旁肺組織與肺良性病變組織中的表達(dá)情況進(jìn)行對比分析，分析雌激素受體與腫瘤臨床行為的相關(guān)性，為雌激素受體作為新靶點在NSCLC的治療中提供新的策略。

1 材料與方法

1.1 材料來源

選取2014年1月～2015年1月經(jīng)病理確診的NSCLC患者肺癌組織標(biāo)本144個，其中男108例，女36例（均為絕經(jīng)后），年齡46～72歲，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移111例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例；癌旁肺組織標(biāo)本（距腫塊5 cm以上）32個；17個經(jīng)病理確診的肺良性病變組織標(biāo)本（肺部炎癥13例、胸內(nèi)孤立性纖維性腫瘤1例、肺大泡1例、少許粘連壞死1例、肺結(jié)核1例）為對照組，其中男10例，女7例（均已絕經(jīng)），年齡44～68歲。以上入選患者均無內(nèi)分泌相關(guān)疾病、慢性肝腎疾病，術(shù)前無使用激素類藥物情況，術(shù)前均未行生物、免疫、放化療等抗腫瘤治療。

1.2 免疫組化法

應(yīng)用兔抗人ERα、ERβ多克隆抗體采用免疫組化法（S-P法）檢測上述非小細(xì)胞肺癌組織、癌旁肺組織、肺良性病變組織中ERα、ERβ的表達(dá)，兔抗人ERα多克隆抗體（使用時工作濃度1：100）購自美國Santa Cruz公司，兔抗人ERβ多克隆抗體購自英國Abcam公司（使用時工作濃度1：100），ERα、ERβ用已知乳腺癌陽性切片作為陽性對照，用PBS緩沖液替代一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定

ERα陽性表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)，ERβ陽性表達(dá)位于細(xì)胞核，均呈黃色、棕黃色顆粒[4]，根據(jù)Kawasaki和Yang等的半定量方法以陽性細(xì)胞率及染色強(qiáng)度兩者乘積來判斷結(jié)果[5-6]，<5分為（-），5～8分為（+），9～12分為（++），13～16分為（+++）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 雌激素受體ERα、ERβ的表達(dá)情況

ERα、ERβ在144例NSCLC組織中表達(dá)陽性率分別為87.50%（126/144）、66.67%（96/144），在32例癌旁肺組織中的表達(dá)陽性率分別為84.38%（27/32）、53.13%（17/32），在17例肺良性病變組織中表達(dá)陽性率分別為82.23%（14/17）、47.06%（8/17）；NSCLC組織中ERα、ERβ的表達(dá)與癌旁肺組織相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.225，P=0.635；χ2=2.089，P=0.148），與肺良性病變組織相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.355，P=0.551；χ2=2.556，P=0.110），癌旁肺組織中ERα、ERβ的表達(dá)與肺良性病變組織相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.033，P=0.855；χ2=0.163，P=0.686）。

2.2 ERα、ERβ在NSCLC中的陽性表達(dá)及和臨床病理特征之間的關(guān)系

ERα、ERβ在NSCLC組織中的陽性表達(dá)與患者的性別、癌細(xì)胞分化程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等因素?zé)o相關(guān)（P>0.05），年齡≥60歲NSCLC組織中ERβ陽性表達(dá)率高于年齡<60歲者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），ERα在NSCLC組織中陽性表達(dá)率在年齡方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表1。

3 討論

目前普遍認(rèn)為雌激素及其受體系統(tǒng)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展有著一定的相關(guān)性，雌激素受體可分為ERα和ERβ，其廣泛存在于腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌及正常肺組織中，這些受體蛋白可以調(diào)控細(xì)胞周期、控制細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和影響細(xì)胞生存[7]。體內(nèi)體外實驗均證實雌激素具有增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞惡性程度、刺激腫瘤細(xì)胞生長的作用[8-13]，故部分專家學(xué)者認(rèn)為有效抑制ERα和ERβ的表達(dá)可能抑制NSCLC細(xì)胞的增殖[14]。

美國病理學(xué)家Chaudhuri等[15]于1982年首次報道25例肺癌組織中ER陽性。國內(nèi)外研究表明ER在非小細(xì)胞肺癌組織和正常肺組織中均有表達(dá)，但兩組間的表達(dá)情況存在差異。有研究[16]通過免疫組化法檢測183例肺癌（NSCLC180例，SCLC3例）組織及對應(yīng)癌旁肺組織中ER的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌組織中ERα、ERβ的表達(dá)率高于癌旁肺組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Schwartz等[17]發(fā)現(xiàn)278例NSCLC患者（其中女性214例，男性64例）和10例正常肺組織中沒有一例ERα的陽性表達(dá)，而ERβ在NSCLC組織和正常肺組織中的陽性率分別為61%、20%，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。李婷婷等[18]通過免疫組化法檢測28例絕經(jīng)前女性肺腺癌組織及癌旁肺組織中ERβ的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌組織中的ERβ的表達(dá)率明顯高于癌旁肺組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。邵東輝等[19]發(fā)現(xiàn)在53例NSCLC組織中ERα、ERβ的表達(dá)陽性率分別為79.2%、67.9%，而在28例癌旁肺組織中ERα、ERβ的表達(dá)陽性率分別為30.76%、42.30%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究通過免疫組化法檢測NSCLC組織、癌旁肺組織、肺良性病變組織中的ERα、ERβ的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ERα在非小細(xì)胞肺癌組織、癌旁肺組織、肺良性病變組織中表達(dá)率分別為87.50%、84.38%、82.23%，ERβ在非小細(xì)胞肺癌組織、癌旁肺組織、肺良性病變組織中表達(dá)率分別為66.67%、53.13%、47.06%，ERα、ERβ，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

Schwartz等[17]發(fā)現(xiàn)278例NSCLC患者（其中女性214例，男性64例）中ERβ在女性NSCLC組織中的陽性表達(dá)率較其在男性NSCLC組織中陽性表達(dá)率低，而本研究發(fā)現(xiàn)NSCLC組織中ERβ的陽性表達(dá)情況與患者性別無明顯相關(guān)（P>0.05），可能與兩項研究的男女比例不同相關(guān)。閆明等[20]通過免疫組化法檢測286例NSCLC患者的病理組織切片，ERα在NSCLC組織中表達(dá)陽性率為36%，在女性患者中的表達(dá)要顯著高于男性（P=0.0004），腫瘤最大直徑≤3 cm的患者顯著高于腫瘤直徑>3 cm的患者（P<0.01）。本研究發(fā)現(xiàn)NSCLC組織中ERα和ERβ的陽性表達(dá)情況與患者性別、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度等因素?zé)o明顯相關(guān)（P>0.05），年齡≥60歲NSCLC患者組織中ERβ陽性表達(dá)率77.27%明顯高于<60歲患者50.00%（P<0.01），ERα陽性表達(dá)率與NSCLC患者的年齡分層沒有相關(guān)性，ERβ在NSCLC患者中陽性表達(dá)可能與年齡相關(guān)。黃偉等[21]發(fā)現(xiàn)在60例NSCLC病理標(biāo)本中，ERβ的表達(dá)與患者性別、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期等方面無明顯差異（P>0.05），與本文的研究結(jié)果相同，但在腺癌的表達(dá)率高于鱗癌（P<0.05）。

目前國外研究對NSCLC腫瘤細(xì)胞中的雌激素受體陽性表達(dá)機(jī)制有了進(jìn)一步探討。Unai Aresti等[22]通過逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測96例NSCLC患者腫瘤組織及鄰近正常肺組織中ERα、ERβ的mRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ERα在非腫瘤組織的表達(dá)較腫瘤組織高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.0001），ERβ在非腫瘤組織與腫瘤組織的表達(dá)無差異（P=0.364），在腫瘤組織中ERα高表達(dá)組有更高的總生存期（P=0.05），而ERβ高表達(dá)組與低表達(dá)組總生存期無顯著差異（P=0.253），ERα+ERβ高表達(dá)組與ERα+ERβ低表達(dá)組相比總生存期更高（P=0.025），提示ERα高表達(dá)可能是NSCLC患者預(yù)后較好的因素。Atmaca A等[23]通過逆轉(zhuǎn)錄定量PCR法檢測31例晚期或轉(zhuǎn)移NSCLC患者腫瘤組織ERα的mRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ERα高表達(dá)組有更高的中位生存期（P=0.0498），并與患者性別、年齡、病理類型、TNM分期無明顯相關(guān)，可以通過定量PCR法評估NSCLC患者組織中ERα的mRNA表達(dá)，ERα的表達(dá)是轉(zhuǎn)移性NSCLC患者預(yù)后的獨立因素。

根據(jù)國內(nèi)外眾多研究，NSCLC組織中ERα、ERβ的表達(dá)率高于癌旁肺組織及正常肺組織，但本實驗結(jié)果顯示，ERα、ERβ在NSCLC組織、癌旁肺組織及正常肺組織的表達(dá)無顯著差異，可能與病例選擇、檢測技術(shù)和準(zhǔn)確度等存在差異有關(guān)。各個研究中關(guān)于NSCLC組織中ER的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、TNM分期等臨床特征的關(guān)系也不盡相同。兩個受體的陽性表達(dá)與NSCLC的臨床表現(xiàn)是否有明確的相關(guān)性，兩者的表達(dá)是否可作為NSCLC的預(yù)測因子，可行較大規(guī)模人群為基礎(chǔ)的病例研究，并進(jìn)一步利用基因檢測等更為準(zhǔn)確的方法，為今后NSCLC的臨床診斷和治療提供新的思路。

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（收稿日期：2018-02-08）