兩種靈芝的粗多糖提取及其抗氧化活性的比較

鄭秋樺 曾松榮 柯野 陳楨

【摘 要】 本文主要探究兩種靈芝粗多糖提取及抗氧化活性的比較。采用超聲波提取，然后，選用苯酚——硫酸法檢測兩種靈芝粗多糖得率。其中紫芝為2.2%，赤芝為2.8%。另外，還選取了鐵氰化鉀還原法來檢測比較兩種靈芝粗多糖的自身還原能力，同時對二者清除羥基自由基（-OH）效果進(jìn)行了比較，以及對清除DPPH的效果進(jìn)行比較，結(jié)果表明：赤靈芝粗多糖清除羥基自由基的能力、還原能力均比紫靈芝粗多糖強，但是對于DPPH的清除能力比紫芝粗多糖稍弱，而且紫芝、赤芝的抗氧化活性均與其粗多糖含量的濃度成正比。

【關(guān)鍵詞】 紫靈芝；粗多糖；抗氧化活性

[Abstract] In this paper， the extraction and antioxidant activity of crude polysaccharides from Ganoderma lucidum were studied. Ultrasonic extraction was used， then phenol-sulfuric acid method was used to detect the yield of two kinds of crude Ganoderma lucidum polysaccharides.The scavenging effect of hydroxyl radical （-OH） was compared， and the effect of scavenging DPPH was compared. The results showed that crude polysaccharide of Ganoderma lucidum could scavenge hydroxyl radical and reduce hydroxyl radical more effectively than crude polysaccharide of Ganoderma lucidum， but for DPPH.

[Keywords] ganoderma lucidum； polysaccharide； antioxidant activity

靈芝屬于擔(dān)子菌綱多孔均科靈芝屬真菌，又稱之為仙草以及靈草，具有滋補強壯的功效，其主要成分包括多糖、多肽以及三萜類成分，多糖是由多種單糖聚合而成的碳水化合物[1]，在對靈芝多糖成分以及抗氧化活性的研究中，研究人員認(rèn)為采用超聲波結(jié)合纖維素酶的方式，可以確定多糖含量，且可以研究靈芝的抗氧化活性[2]。但是對于不同種類靈芝的多樣含量以及抗氧化活性研究較少。本文采用超聲波提取法以及水提醇沉法兩種方法來提取紫靈芝、赤靈芝子實體中的粗多糖，并且探究其抗氧化活性。

1 材料與方法

1.1 材料

采用紫靈芝和赤靈芝，均為仿野生人工栽培。

1.2 方法

1.2.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 本次研究以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)，方法采用苯酚硫酸法[3]，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 多糖測定 采用超聲波提取工藝[4]，料液比：1：20/1：15，提取溫度：65℃，超聲次數(shù)：2次，超聲時間：55min/30min，超聲波提取功率為750W。然后，選用苯酚——硫酸法檢測兩種靈芝粗多糖得率。其算法面公式1所示：

多糖含量（%）=質(zhì)量濃度*體積*稀釋倍數(shù)/原材料質(zhì)量*100 （1）

1.2.3 總糖、蛋白質(zhì)測定 總糖采用苯酚硫酸法進(jìn)行測定，根據(jù)公式2計算總糖含量：

總糖含量（%）=多糖質(zhì)量濃度*體積*稀釋倍數(shù)/粗多糖質(zhì)量*100 （2）

蛋白質(zhì)的測定：采取子實體多糖0.25g，錫箔紙包好，制作成為藥片，采用杜馬斯定氮儀，一級和二級燃燒管分別設(shè)置溫度960℃和800℃。還原溫度設(shè)置為815℃，運用TC檢測器確定總氮含量，之后確定蛋白質(zhì)含量，如公式3所示：

蛋白質(zhì)（%）=總氮含量*6.25 （3）

1.2.4 抗氧化活性 提取子實體制作成為1-5mg/ml的5份水溶液，同時選擇陽性對照。對于自由基清除能力，采用硫酸鉀氰氧化，生成ABTS+，根據(jù)褪色程度判斷抗氧化能力。混合7mmol/L的ABTS以及2.45mmol/L的硫酸鉀，避光12h，試管中加入0.5ml多糖溶液，之后加入ABTS+，在734nm處測試吸光度，其自由基清除率如公式4所示：

[空白對照吸光度-（樣品吸光度-樣品本底吸光度）空白對照吸光度]×100% （4）

DPPH的自由基清除能力測試[5]，試管中加入0.6mmol/L的DPPH1.0mL以及1ml粗多糖溶液，之后用60%乙醇定容到10mL，避光30min后再517nm處測試吸光度，其自由基清除率同公式。

羥基自由基清除，在試管中加入9mmol/L的水楊酸-無水乙醇溶液，1mL的9mmol/L的硫酸鐵溶液，之后加入1mL的8.8mmol/L的過氧化氫。在37℃下水浴30min，之后在510nm處測定吸光度。其自由基清除率計算如公式4。

總還原力的測定，在試管中加入粗多糖2.5mL、鐵氰化鉀2.5mL、0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液2.5mL以及2.5mL的三氯乙酸，在5000r/min下離心處理，取5mL上清液，總還原力計算如公式5：

總還原力=樣品組吸光度-樣品本底吸光度 （5）

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

本次研究采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料采用[X—±S]表示。

2 結(jié)果分析

2.1 兩種靈芝粗多糖得率比較

紫靈芝的粗多糖含量為2.2%，赤靈芝的粗多糖含量為2.8%，在總糖和蛋白質(zhì)含量方面，紫靈芝和赤靈芝的含量較為接近，具體數(shù)據(jù)如表1所示。

2.2 抗氧化活性

2.2.1 ABTS自由基清除率 赤靈芝的ABTS自由基清除率均高于紫靈芝，且兩種靈芝在2mg/mL的濃度下，ABTS的自由基清除率均高于50%。

2.2.2 DPPH自由基清除能力 赤靈芝的DPPH自由基清除率均低于紫靈芝，且兩種靈芝在3mg/mL的濃度下，DPPH自由基清除率均高于50%。

2.2.3 羥基自由基清除能力 赤靈芝的羥基自由基清除率均高于紫靈芝，且兩種靈芝在3mg/mL的濃度下，羥基自由基清除率高于60%。

2.2.4 總還原力比較 赤靈芝的總還原力高于紫靈芝，且紫芝、赤芝的抗氧化活性均與其粗多糖含量的濃度成正比。

3 結(jié)論

靈芝多糖屬于靈芝的重要活性成分[6]，其具有抵抗腫瘤、抗氧化和消炎的功效，并且其可以調(diào)節(jié)人體的免疫機制[7]，其對靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有氧化損傷的保護(hù)作用，同時可以抑制細(xì)胞的凋亡[8]，因此，在對靈芝的粗多糖含量分析中，需要通過生物學(xué)提取的方式來進(jìn)行驗證，以便為靈芝的使用提供借鑒意義。

在本研究中，對紫靈芝和赤靈芝的粗多糖進(jìn)行提取，且對其抗氧化活性進(jìn)行分析。其中紫靈芝的粗多糖提取率約為2.2%左右，赤靈芝的粗多糖提取率約為2.8%左右。兩種靈芝的總糖以及蛋白質(zhì)含量均較為接近。在抗氧化活性方面，赤靈芝粗多糖清除羥基自由基的能力、還原能力均比紫靈芝粗多糖強，但是對于DPPH的清除能力比紫芝粗多糖稍弱，而且紫芝、赤芝的抗氧化活性均與其粗多糖含量的濃度成正比?？傊?jīng)過本文的分析，可以為不同種類靈芝的粗多糖提取提供借鑒意義。

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