微小RNA-182-5p調(diào)控焦亡參與肝缺血再灌注損傷

杜晨陽，宋虎，王星星，王振，張建軍△

肝缺血再灌注損傷（liver ischemia reperfusion injury，LIRI）是肝臟手術(shù)和肝移植中常見的病理過程，對患者的預(yù)后和生存具有相當(dāng)大的影響［1］。焦亡（Pyroptosis）是一種促炎性程序性細(xì)胞死亡，具有壞死和凋亡的生化和形態(tài)學(xué)特征，但與凋亡或壞死不同是其主要依賴于半胱天冬酶1（Caspase1）產(chǎn)生炎癥級聯(lián)反應(yīng)，引起細(xì)胞因子釋放，激活促炎性免疫細(xì)胞介質(zhì)，最終產(chǎn)生組織細(xì)胞損傷［2］。焦亡使組織細(xì)胞對缺血再灌注更加敏感，再灌注后損傷加重，在缺血再灌注損傷病理過程中發(fā)揮重要作用［3］。微小RNA（miRNA）是長度約為19～22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性微小非編碼RNA，能夠參與多種生物學(xué)過程，包括細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移、凋亡和免疫應(yīng)答［4-5］。miRNA的異常表達(dá)可發(fā)生于多種疾病，參與多種疾病（包括缺血再灌注損傷）的發(fā)病機(jī)制［6］。本研究旨在探索miR-182-5p介導(dǎo)叉形頭轉(zhuǎn)錄因子O亞型3a（FoxO3a）調(diào)控的焦亡對肝細(xì)胞缺血再灌注損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 材料及分組

1.1.1 主要試劑及材料 40只健康雄性SPF級C57小鼠，鼠齡7～8周，體質(zhì)量20～24 g，購于天津醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。小鼠肝細(xì)胞系A(chǔ)ML12購于中科院上海細(xì)胞庫。胎牛血清購于美國Gbico公司。CCK-8試劑盒購于日本同仁公司。qRT-PCR試劑盒購于日本TAKARA公司。ELISA檢測試劑盒購于德國ORGETEC公司。兔抗鼠FoxO3a、Caspase1、白細(xì)胞介素（IL）-1β、IL-18和GAPDH抗體，以及辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗和FITC熒光標(biāo)記兔抗小鼠IgG購于美國CST公司。miR-182-5p模擬物（mimic）和抑制物（inhibitor）購于銳博公司。FoxO3a基因的干擾RNA（siRNA）購于美國Sigma公司。

1.1.2 動物模型建立及分組 按隨機(jī)數(shù)字表法將40只小鼠分為5組，每組8只，分別為假手術(shù)（sham）組，缺血再灌注（IR）各組（缺血1.5 h，按再灌注時(shí)間分為IR 2 h組、IR 6 h組、IR 12 h組和IR 24 h組）。小鼠禁食6～8 h后，使用5%水合氯醛（0.15 mL/20 g）進(jìn)行腹腔注射麻醉，固定小鼠，經(jīng)腹正中縱行切口開腹（切口長3～5 cm），暴露腹腔臟器，動脈夾夾閉肝左、中葉脈管（包括門靜脈、肝動脈與膽道）的共干，模擬70%的肝臟缺血，1.5 h后松開血管夾，隨后進(jìn)行關(guān)腹。Sham組小鼠僅行開腹、游離第一肝門及關(guān)腹，不行夾閉血管操作。各組達(dá)到預(yù)定再灌注時(shí)間后獲取肝組織標(biāo)本。

1.1.3 細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型（缺血再灌注處理）的建立及分組 將AML12細(xì)胞接種至6孔板，培養(yǎng)至細(xì)胞融合度為70%左右。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組分為兩部分，（1）缺氧模型建立，分為control組（37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)）和IR組（缺氧1.5 h，復(fù)氧6 h）。（2）缺氧/復(fù)氧模型建立，分為control組（轉(zhuǎn)染miR-182-5p空載體）、mimic組（轉(zhuǎn)染miR-182-5p模擬物），inhibitor組（轉(zhuǎn)染miR-182-5p抑制物）和inhibitor+siRNA（細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-182-5p抑制物的同時(shí)轉(zhuǎn)染FoxO3a siRNA以降低FoxO3a表達(dá)）。各組轉(zhuǎn)染后置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。12 h后更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后移去培養(yǎng)基，加入2 mL Hank’s培養(yǎng)液，放入模擬缺氧專用培養(yǎng)箱（O2濃度＜5%），模擬缺血/缺氧狀態(tài)。1.5 h后移去Hank’s液，加入2 mL完全培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)6 h，模擬再灌注/復(fù)氧。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分析miR-182-5p與FoxO3a基因相關(guān)性

1.2.2 qRT-PCR檢測小鼠肝組織標(biāo)本和AML12細(xì)胞轉(zhuǎn)染后miR-182-5p、FoxO3a和Caspase1的表達(dá) Trizol法提取肝組織或細(xì)胞總RNA，根據(jù)操作說明反轉(zhuǎn)錄為cDNA，miR-182-5p引物上游5'-TGCGGTTTGGCAATGGTAGAAC-3'，下游5'-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3'；FoxO3a引物上游5'-CTGGGGGAACCTGTCCTATG-3'，下游5'-TCATTCTGAAC?GCGCATGAAG-3'；Caspase1引物上游 5'-ACACGTCTT?GCCCTCATTATCT-3'，下 游 5'-ATAACCTTGGGCTT?GTCTTTCA-3'；GAPDH引物上游5'-CCACCCAGAAGACT?GTGGAT-3'，下游5'-TTCAGCTCAGGGATGACCTT-3'。經(jīng)過94℃預(yù)變性30 s；94℃變性5 s，60℃退火15 s，72℃延伸10 s，擴(kuò)增45個(gè)循環(huán)。對結(jié)果使用比較閾值法進(jìn)行定量分析，其計(jì)算方法是：目的基因相對定量值=2-ΔΔCt，ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參，ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對照組，計(jì)算各組目的基因相對定量值。

1.2.3 HE染色 取各組肝臟組織左、中葉，放入4%多聚甲醛內(nèi)固定、梯度乙醇、二甲苯脫水后包埋蠟塊，切片后按照操作流程行HE染色，顯微鏡下觀察各組小鼠肝組織的病理學(xué)變化。

1.2.4 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 每組經(jīng)轉(zhuǎn)染和缺血再灌注（IR）處理后的細(xì)胞用胰酶消化重懸，接種于24孔板中。37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h后，采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶染色（SP法）檢測Caspase1表達(dá)分布。室溫下4%多聚甲醛處理20 min，3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶15 min，5%山羊血清封閉1 h，孵育Caspase1一抗（稀釋度1∶500）于4℃過夜。室溫下孵育二抗1 h。二氨基聯(lián)苯胺溶液（DAB）顯色、蘇木精染核后光鏡顯微鏡下觀察并采集圖像。

1.2.5 細(xì)胞免疫熒光染色 將每組經(jīng)轉(zhuǎn)染和IR處理后的細(xì)胞用胰酶消化重懸，鋪板制作細(xì)胞爬片，4%多聚甲醛固定爬片15 min，0.5%Triton X-100室溫通透20 min，5%山羊血清封閉1 h，4℃環(huán)境下孵育Caspase1一抗（稀釋度1∶500）過夜。室溫下孵育熒光二抗（濕盒內(nèi)）1 h。滴加DAPI避光孵育5 min，對標(biāo)本進(jìn)行染核。使用熒光封片劑封片后在熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。

1.2.6 CCK-8法檢測細(xì)胞活性 各組處理后的細(xì)胞重懸后接種到96孔板中（100 μL/孔），37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)，加入CCK-8溶液（10 μL/孔），培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)48 h后用酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光度。

1.2.7 ELISA檢測IL-1β、IL-18濃度 各組細(xì)胞消化后超速離心，吸取上清后按照ELISA試劑盒說明書加入試劑進(jìn)行IL-1β和IL-18濃度的檢測。

1.2.8 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）檢測各目的蛋白表達(dá)情況 各組細(xì)胞或肝組織加入裂解液，于4℃超速離心機(jī)離心（12 000 r/min，15 min）后吸取上清，BCA法蛋白定量。每組取50 μg/孔行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉1 h，孵育一抗（兔抗鼠FoxO3a、Caspase1、IL-1β、IL-18與GAPDH，1∶1 000），4 ℃環(huán)境下孵育過夜，TBST洗3遍后室溫下孵育羊抗兔辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗（1∶5 000）1 h，等比例加入混合發(fā)光液后與PVDF膜反應(yīng)，曝光并保存圖片，使用Image J軟件測定條帶灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，其中2組間比較用t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析，組間多重比較用LSD-t法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 缺血再灌注損傷（IRI）誘導(dǎo)小鼠肝臟產(chǎn)生焦亡和炎癥 HE染色顯示：sham組肝小葉結(jié)構(gòu)基本清晰，肝細(xì)胞排列較規(guī)整，未見明顯的肝細(xì)胞壞死和中性粒細(xì)胞浸潤；與sham組比較，再灌注2 h組肝小葉結(jié)構(gòu)欠清晰，肝細(xì)胞排列較整齊，匯管區(qū)可見少量的膽管增生及中性粒細(xì)胞浸潤；再灌注6 h組部分肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，可見小片的肝細(xì)胞壞死、中性粒細(xì)胞、膽管上皮增生。再灌注12 h組肝小葉結(jié)構(gòu)明顯紊亂，可見中央靜脈周圍大片的肝細(xì)胞壞死灶及大量的中性粒細(xì)胞浸潤；再灌注24 h組肝小葉結(jié)構(gòu)欠清晰，肝細(xì)胞排列較為規(guī)整，肝竇內(nèi)可見少量的中性粒細(xì)胞浸潤；再灌注12 h組小鼠肝組織破壞最嚴(yán)重，見圖1A。Western blot結(jié)果顯示，隨再灌注時(shí)間延長，F(xiàn)oxO3a、Caspase1和IL-1β表達(dá)量較sham組逐漸升高，且在12 h時(shí)達(dá)峰值，再灌注24 h相對12 h表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖1B、表1。qRT-PCR從mRNA水平定量檢測小鼠肝組織中miR-182-5p表達(dá)水平：12 h組miR-182-5p表達(dá)量（14.43±0.40）較sham組（6.12±0.41）明顯升高（t=14.322，P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 IR處理可誘導(dǎo)AML12細(xì)胞焦亡 體外培養(yǎng)AML12細(xì)胞，分為2組，Control組常規(guī)培養(yǎng)，IR組進(jìn)行細(xì)胞缺氧1 h/復(fù)氧12 h處理。qRT-PCR檢測結(jié)果顯示：IR組miR-182-5p表達(dá)量較Control組升高（P＜0.05）；而IR組FoxO3a表達(dá)量較Control組降低（P＜0.05），見圖2，表2。免疫熒光檢測Caspase1表達(dá)情況：IR組Caspase1表達(dá)量較Control組升高（P＜0.05），見表2。

2.3 miR-182-5p直接調(diào)控FoxO3a 基因相關(guān)性分析顯示，miR-182-5p與FoxO3a基因具有高度相關(guān)性，見圖3A。qRT-PCR測定轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)miR-182-5p表達(dá)情況：mimic組miR-182-5p mRNA的相對表達(dá)量較Control組升高，inhibitor組較mimic組和Control組降低（P＜0.05），見表3。免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示：mimic組FoxO3a陽性細(xì)胞率較Control組降低，inhibitor組FoxO3a陽性細(xì)胞率較Control組和mimic組均升高（P＜0.05），見圖3B，表3。

2.4 FoxO3a通過調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡參與LIRI Western blot結(jié)果顯示，與Control組相比，inhibitor組的FoxO3a表達(dá)升高，Caspase1表達(dá)降低（P＜0.05）；而inhibitor+siRNA組與inhibitor組相比，F(xiàn)oxO3a表達(dá)降低，Caspase1表達(dá)升高（P＜0.05），見圖 4、表 4。ELISA檢測結(jié)果顯示，inhibitor組的IL-1β和IL-18濃度較Control組降低；而inhibitor+siRNA組IL-1β和IL-18濃度較inhibitor組升高（P＜0.05），見表4。CCK-8檢測顯示：inhibitor組細(xì)胞活性較Control組升高，而inhibitor+SiRNA組較inhibitor組降低（P＜0.05），見表4。

Tab.1 The relative expressions of related proteins of liver tissues in five groups of m ice表1 小鼠肝組織中各目的蛋白表達(dá)量 （n=5，±s）

Tab.1 The relative expressions of related proteins of liver tissues in five groups of m ice表1 小鼠肝組織中各目的蛋白表達(dá)量 （n=5，±s）

＊P ＜0.05，＊＊P＜0.01；a與Sham組比較，b與2 h組比較，c與6 h組比較，d與12 h組比較，P＜0.05

組別sham組IR 2 h組IR 6 h組IR 12 h組IR 24 h組F FoxO3a 0.715±0.041 0.735±0.029a 0.764±0.022ab 0.816±0.031abc 0.739±0.023abcd 62.361＊＊Caspase1 0.314±0.012 0.548±0.018a 0.532±0.021ab 0.770±0.027abc 0.461±0.014abcd 112.574＊＊IL-1β 0.361±0.014 0.471±0.026a 0.471±0.013ab 0.618±0.016abc 0.557±0.015abcd 12.663＊＊IL-18 0.490±0.023 0.601±0.018a 0.606±0.022ab 0.778±0.019abc 0.829±0.011abcd 13.460＊＊

Tab.2 The expression levels of m iR-182-5p and FoxO3a m RNA of liver tissues by qRT-PCR and the expression of Caspase1 of liver tissues by immunofluorescent staining表2 qRT-PCR檢測m iR-182-5p與FoxO3a的mRNA表達(dá)情況及免疫熒光檢測Caspase1表達(dá)情況（n=5，±s）

Tab.2 The expression levels of m iR-182-5p and FoxO3a m RNA of liver tissues by qRT-PCR and the expression of Caspase1 of liver tissues by immunofluorescent staining表2 qRT-PCR檢測m iR-182-5p與FoxO3a的mRNA表達(dá)情況及免疫熒光檢測Caspase1表達(dá)情況（n=5，±s）

＊P＜0.05

組別Control組IR組t qRT-PCR miR-182-5p 1.000±0.000 2.361±0.639 4.258＊FoxO3a 1.000±0.000 0.214±0.079 7.601＊免疫熒光Caspase1 0.110±0.007 0.279±0.017 9.062＊

Tab.3 The expression levels of cellular m iR-182-5p m RNA detected by qRT-PCR and the expression of FoxO3a detected by immunohistochem istry staining表3 qRT-PCR檢測細(xì)胞內(nèi)m iR-182-5p m RNA表達(dá)情況和免疫組化檢測FoxO3a表達(dá)情況 （n=5，±s）

Tab.3 The expression levels of cellular m iR-182-5p m RNA detected by qRT-PCR and the expression of FoxO3a detected by immunohistochem istry staining表3 qRT-PCR檢測細(xì)胞內(nèi)m iR-182-5p m RNA表達(dá)情況和免疫組化檢測FoxO3a表達(dá)情況 （n=5，±s）

＊P＜0.05；a與Control組比較，b與mimic組比較，P＜0.05

組別Control組mimic組inhibitor組F miR-182-5p 1.00±0.00 4.41±0.25a 0.87±0.04ab 3.09＊FoxO3a陽性（%）67.1±2.9 32.7±2.6a 87.4±1.4ab 3.86＊

3 討論

Fig.4 The FoxO3a and Caspase1 expressions detected by Western blot assay圖4 Western blot檢測FoxO3a和Caspase1表達(dá)量

LIRI是肝臟手術(shù)、肝移植中重要的病理生理過程。肝臟移植是治療終末期肝病最有效的辦法，為了改善供體器官嚴(yán)重短缺的問題，邊緣供體（對IRI高度敏感）越來越多地應(yīng)用于臨床［7-8］。因此，如何研究出針對IRI的保護(hù)性策略以更好地保護(hù)移植物功能是亟待解決的臨床問題。有研究表明，凋亡、壞死是IRI后肝細(xì)胞死亡的主要方式［9］，筆者在之前的研究中也發(fā)現(xiàn)自噬能有效減輕LIRI的損傷效應(yīng)，發(fā)揮保護(hù)作用［10-11］。而細(xì)胞焦亡是一種獨(dú)特的程序性細(xì)胞死亡，其不同于細(xì)胞凋亡、壞死及自噬，能在LIRI中發(fā)揮至關(guān)重要的作用［12］。本研究表明，焦亡的特征在于IR后caspase-1、IL-1β和IL-18表達(dá)增加，同時(shí)也伴隨著肝組織損傷加重；而體外細(xì)胞培養(yǎng)研究表明，IR處理后AML12小鼠肝細(xì)胞中caspase-1表達(dá)上調(diào)。綜合這些結(jié)果表明，焦亡和炎癥反應(yīng)與LIRI關(guān)系密切。

焦亡的特征是快速的胞質(zhì)膜破裂和促炎因子的釋放，并且在形態(tài)學(xué)和機(jī)制上不同于凋亡、壞死等其他形式的細(xì)胞死亡［13］。Caspase1依賴性是焦亡的一個(gè)顯著特征，焦亡的產(chǎn)生歸因于Caspase1誘導(dǎo)細(xì)胞膜上的孔形成，進(jìn)而導(dǎo)致大量的炎性因子的產(chǎn)生和釋放［14］。Chen等［15］發(fā)現(xiàn)膿毒性急性肝損傷過程中，肝細(xì)胞焦亡能加重急性肝損傷，通過NLRP3和Caspase-1抑制劑抑制肝細(xì)胞焦亡，降低膿毒性肝損傷的程度。Heo等［16］報(bào)道了酒精性肝炎（AH）患者和實(shí)驗(yàn)動物模型中miR-148a表達(dá)顯著降低，發(fā)現(xiàn)酒精通過FoxO1降低肝細(xì)胞中的miR-148a表達(dá)，促進(jìn)TXNIP過表達(dá)和NLRP3炎性體激活，進(jìn)一步誘導(dǎo)肝細(xì)胞焦亡。

miRNA已經(jīng)成為翻譯控制的重要媒介，廣泛參與多種生物學(xué)過程。miRNA的過表達(dá)是各種疾病中的常見現(xiàn)象，并且異常表達(dá)的miRNA經(jīng)常參與特定疾?。ò↙IRI）的發(fā)病機(jī)制［17］。Li等［18］報(bào)道了過表達(dá)miR-17可以通過抑制Stat3表達(dá)來上調(diào)自噬以加重肝 IRI。Pellegrini等［19］通過研究發(fā)現(xiàn) miR-155通過調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞募集和呼吸氧化爆發(fā)來加重缺血再灌注損傷，IRI后miR-155的表達(dá)顯著增加，這與IRI后人類肌肉組織中腫瘤壞死因子（TNF）-α、IL-1β、CD105和Caspase-3的表達(dá)增加以及白細(xì)胞浸潤相關(guān)。而Jiang等［20］研究發(fā)現(xiàn)miR-146a能夠直接抑制IRAK1和TRAF6以減輕缺血再灌注后肝細(xì)胞凋亡和多種炎癥介質(zhì)的釋放，最終達(dá)到減輕肝缺血再灌注損傷的作用。Li等［21］發(fā)現(xiàn)miR-30b通過與Atg12特異性結(jié)合而與Atg12-Atg5偶聯(lián)物發(fā)生相互作用，miR-30b的過表達(dá)能降低Atg12和Atg12-Atg5偶聯(lián)物水平，促進(jìn)IR后自噬的產(chǎn)生，減輕LIRI。本研究顯示IRI小鼠肝組織和IR處理后的體外培養(yǎng)小鼠肝細(xì)胞中miR-182-5p的表達(dá)顯著增加。通過TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測顯示FoxO3a是miR-182-5p的潛在靶基因。Chen等［22］報(bào)道了FoxO3a參與抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)IR后肝細(xì)胞再生。本研究發(fā)現(xiàn)敲除FoxO3a后Caspase1、IL-18、IL-1β表達(dá)升高，說明FoxO3a能抑制肝細(xì)胞焦亡；miR-182-5p過表達(dá)導(dǎo)致FoxO3a表達(dá)降低，而miR-182-5p的低表達(dá)處理后能導(dǎo)致FoxO3a表達(dá)升高，進(jìn)一步減弱AML12細(xì)胞的炎性細(xì)胞死亡，表明FoxO3a可能是miR-182-5p調(diào)控焦亡的靶點(diǎn)，抑制miR-182-5p表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)FoxO3a表達(dá)，可能作為預(yù)防肝細(xì)胞焦亡，減輕肝細(xì)胞損傷的有效策略。

Tab.4 Comparison of expressions of related proteins in AML12 cells,concentrations of IL-1β and IL-18 and cell viability detected by ELISA between three groups表4 AM L12細(xì)胞中目的蛋白相對表達(dá)量、ELISA檢測IL-1β和IL-18濃度及細(xì)胞活性檢測結(jié)果比較 （n=5，±s）

Tab.4 Comparison of expressions of related proteins in AML12 cells,concentrations of IL-1β and IL-18 and cell viability detected by ELISA between three groups表4 AM L12細(xì)胞中目的蛋白相對表達(dá)量、ELISA檢測IL-1β和IL-18濃度及細(xì)胞活性檢測結(jié)果比較 （n=5，±s）

＊P＜0.05；a與Control組比較，b與inhibitor組比較，P＜0.05

組別Control組inhibitor組inhibitor+siRNA組F Western blot FoxO3a 0.680±0.012 0.979±0.018a 0.271±0.011b 3.851＊Caspase1 0.702±0.037 0.557±0.022a 0.769±0.026b 4.137＊IL-1β（ng/L）17.90±0.48 9.54±0.49a 18.01±0.48b 8.524＊ELISA IL-18（ng/L）14.84±0.68 7.16±0.58a 15.16±0.71b 6.883＊細(xì)胞活性（%）46.22±2.49 83.57±2.94a 45.22±2.59b 8.372＊

總的來說，本研究表明由IRI引起的肝細(xì)胞焦亡可由miR-182-5p通過直接靶向調(diào)控Foxo3a以促進(jìn)其產(chǎn)生。然而，除了FoxO3a/Caspase1途徑之外，miR-182-5p對肝缺血再灌注損傷的影響可能由多種機(jī)制介導(dǎo)，并且需要進(jìn)一步研究以揭示其他相關(guān)的重要機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn)了miR-182-5p在LIRI中的重要作用，有助于理解焦亡在缺血再灌注肝損傷中的作用，同時(shí)也為臨床工作中減輕肝臟手術(shù)和肝移植后LIRI提供了新思路。

（圖1～3見插頁）

Fig.1 Histopathological changes and expressions of target proteins of mouse liver after IR treatment圖1 IR處理后小鼠肝臟組織病理學(xué)變化及各目的蛋白表達(dá)情況

Fig.2 Changes of Caspase1 expression of liver tissues detected by immunofluorescence assay（IF，×200）圖2 免疫熒光檢測Caspase1表達(dá)變化情況（IF，×200）

Fig.3 The correlation between miR-182-5p and FoxO3a and the expression of FoxO3a in AML12 cells圖3 miR-182-5p與FoxO3a相關(guān)性及FoxO3a在AML12細(xì)胞中的表達(dá)