對肝癌組織中COX-2蛋白的表達與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性的分析

趙 鑫，曾 強，王 洋，曹經(jīng)林，任貴軍

（河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院肝膽外科，河北 石家莊 050010）

肝癌是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤[1]。研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移與其微血管和微淋巴管的密度密切相關(guān)。環(huán)加氧酶（cyclooxygenase，COX）是前列腺素（prostaglandins, PG）合成過程中的限速酶，其底物是花生四烯酸[2]。大量的臨床實驗結(jié)果表明，COX-2在消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用[3-4]。本文主要研究肝癌組織中COX-2蛋白的表達與肝癌組織中微血管密度（MVD）和微淋巴管密度（MLVD）的相關(guān)性，分析COX-2蛋白的表達在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用，以期為肝癌的臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對象是2016年10月至2017年10月期間河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院收治的50例肝癌患者。在這些患者中，有男性30例，女性20例；其年齡為29～68歲，平均年齡為（42.5±0.9）歲。本次研究對象的納入標準是：1）其年齡＞18歲；2）其腫瘤的臨床分期符合2001年全國肝癌會議發(fā)布的關(guān)于肝癌的分期標準[5]。本次研究對象的排除標準是：1）其腫瘤的臨床分期不明確或臨床資料不全；2）其合并有其他的原發(fā)性惡性腫瘤。

1.2 研究方法

研究這些患者的性別、年齡、腫瘤細胞的分化程度、腫瘤的臨床分期及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料。使用免疫組化法檢測這些患者肝癌組織中COX-2蛋白的表達，分析其肝癌組織中COX-2蛋白的表達與MVD和MLVD的關(guān)系，從而判定肝癌組織中COX-2蛋白的表達與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1.3 評定標準[6]

1）用PBS緩沖液作為空白對照品。在顯微鏡下觀察這些患者肝癌組織標本的HP染色圖片。COX-2蛋白表達的陽性標準是：患者肝癌組織中的細胞膜、細胞漿內(nèi)可見棕黃色的顆粒。COX-2蛋白表達的陰性標準是：患者肝癌組織中的細胞膜、細胞漿中未見著色顆粒。在高倍顯微鏡下觀察這些患者的病理切片。在每個病理切片中任意選擇5個視野，在每個視野中選擇200個腫瘤細胞，共選擇1000個腫瘤細胞。COX-2蛋白表達呈陽性的腫瘤細胞的數(shù)量所占的比例若＜1%，表示腫瘤組織中COX-2蛋白的表達呈陰性(-)；COX-2蛋白表達呈陽性的腫瘤細胞的數(shù)量所占的比例若為1%～10%，表示腫瘤組織中COX-2蛋白的表達呈弱陽性(+)；COX-2蛋白表達呈陽性的腫瘤細胞的數(shù)量所占的比例若為11%～50%，表示腫瘤組織中COX-2蛋白的表達呈中度陽性(++)；COX-2蛋白表達呈陽性的腫瘤細胞的數(shù)量所占的比例若≥51%，表示腫瘤組織中COX-2蛋白的表達呈強陽性(+++)。除檢查結(jié)果為陰性以外，均可判定腫瘤細胞中的COX-2蛋白呈陽性表達。2）參照 Weidner計數(shù)法，在低倍顯微鏡下觀察這些患者的病理切片。在每個病理切片中選取2個染色陽性數(shù)目較多的區(qū)域。然后在高倍顯微鏡下觀察每張病理切片[7]。計算經(jīng)CD34標記的微血管的數(shù)量，每個病理切片取5個視野，取其平均值，計算MVD和MLVD。

1.4 統(tǒng)計學方法

使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對本次研究中的數(shù)據(jù)進行處理。計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗。計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

在這些肝癌患者中，不同年齡、性別的患者其肝癌組織中COX-2蛋白的陽性表達率相比差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。腫瘤分期為Ⅰ期、Ⅱ期的患者其肝癌組織中COX-2蛋白的陽性表達率低于腫瘤分期為Ⅲ期、Ⅳ期的患者（P＜0.05）。腫瘤細胞的分化程度為低分化的患者其肝癌組織中COX-2蛋白的陽性表達率高于腫瘤細胞的分化程度為中、高分化的患者（P＜0.05）。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者其肝癌組織中COX-2蛋白的陽性表達率高于不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P＜0.05）。對同一組織細胞中COX-2蛋白的表達與MVD和MLVD的相關(guān)性進行分析的結(jié)果顯示，肝癌組織中COX-2蛋白的表達與MVD呈正相關(guān)(r=0.6261，P＜0.001)。肝癌組織中COX-2蛋白的表達與MLVD呈正相關(guān)(r=0.6091，P＜0.001)。詳情見表1。

表1 不同的肝癌患者其肝癌組織中COX-2蛋白表達陽性率的比較

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，微血管、微淋巴管的形成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要過程[8-9]。COX-2蛋白是前列腺素合成過程中一種重要的限速酶，其表達呈誘導性。COX-2蛋白參與了肝癌發(fā)生、發(fā)展的全過程，在肝癌組織中呈高表達。COX-2蛋白是通過抑制正常細胞的凋亡、增強腫瘤細胞的繁殖能力、促進腫瘤內(nèi)血管的形成、增強腫瘤細胞的侵襲力參與到腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程中[10]。研究發(fā)現(xiàn)，COX-2蛋白的表達水平與腫瘤組織的病理類型、臨床分期、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素密切相關(guān)[11]。本次研究的結(jié)果顯示，COX-2蛋白在低分化肝癌組織中的表達水平高于在中、高分化肝癌組織中的表達水平。腫瘤分期為III期、IV期的患者其肝癌組織中COX-2 蛋白的表達水平高于腫瘤分期為Ⅰ期、Ⅱ期的患者。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者其肝癌組織中COX-2 蛋白的表達水平高于不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。在同一個肝癌組織中，COX-2蛋白的表達與MVD及MLVD均呈正相關(guān)。說明肝癌組織中COX-2蛋白的表達在腫瘤轉(zhuǎn)移的過程中起著促進的作用。因此有研究者認為，COX-2蛋白抑制劑可能對肝癌患者癌細胞的轉(zhuǎn)移具有抑制的作用，這為肝癌的臨床治療提供了新的思路。

本次研究的結(jié)果證實，肝癌組織中COX-2蛋白的過度表達，可促進肝癌組織中微血管和微淋巴管的生長，使MVD和MLVD增加，從而使腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移。