高效液相色譜法檢測(cè)鹽酸左氧氟沙星的方法穩(wěn)定性研究

陳宵娜 高錦國(guó)

（大同市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 山西 大同 037300）

前言

左氧氟沙星（levofloxacin）屬于第三代喹諾酮類藥物，是氧氟沙星的左旋體，體外抗菌活性約為氧氟沙星的兩倍，是右旋體的8～128倍，且不良反應(yīng)發(fā)生率低[1]。它的主要作用機(jī)理是通過抑制細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶細(xì)菌拓?fù)洚悩?gòu)酶ll的活性，阻礙細(xì)菌DNA的復(fù)制而達(dá)到抗菌作用。左氧氟沙星具有抗菌譜廣，抗菌作用強(qiáng)的特點(diǎn)，對(duì)大多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌及革蘭陰性菌有較強(qiáng)的的抗菌活性。對(duì)部分革蘭陽(yáng)性菌和軍團(tuán)菌、支原體、衣原體也有良好的抗菌作用。臨床上主要用于敏感細(xì)菌引起的輕、中度感染。

關(guān)于它的分析方法研究報(bào)道的主要有高效液相色譜法、熒光光度法、紫外分光光度法。本文采用高效液相色譜法，考察了色譜條件和測(cè)定的線性范圍，對(duì)藥品進(jìn)行含量測(cè)定，并分析了左氧氟沙星隨時(shí)間的變化，結(jié)果表明，此方法簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)。

1.儀器與試藥

儀器：BS124S德國(guó)賽多利斯電子天平、KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器、METTLER 320 pH計(jì)、島津LC-2010AHT高效液相色譜儀。

試藥：左氧氟沙星對(duì)照品批號(hào)為130455-201607（中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量97.3%），萬通鹽酸左氧氟沙星膠囊，花園藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為20170602；豪克鹽酸左氧氟沙星膠囊，四川好醫(yī)生藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)為171103；葵花古芳鹽酸左氧氟沙星膠囊，河南藍(lán)圖制藥有限公司，批號(hào)為17061701；仁和鹽酸左氧氟沙星膠囊，海南海神同洲制藥有限公司，批號(hào)為1705082；特一鹽酸左氧氟沙星膠囊，海南海力制藥有限公司，批號(hào)為170702。乙腈級(jí)別為色譜純，其他為分析純。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：InertSustainC18（250mm×4.6mm，5μm）；柱溫：30℃；流動(dòng)相：0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH至4.0）-乙腈（83:17）；流速：1.0ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：295nm，進(jìn)樣體積：10μL。

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性驗(yàn)證

對(duì)上述色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)分析后發(fā)現(xiàn)：鹽酸左氧氟沙星色譜主峰與樣品中其他成分的色譜峰達(dá)到了有效分離[16]，試驗(yàn)后的理論塔板數(shù)為4400，分離度為2.7，相對(duì)保留時(shí)間為8.1min。

2.3 重復(fù)性

精密藥品內(nèi)容物適量，加0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（pH為4.0）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1.0mg的溶液，濾過，作為重復(fù)性測(cè)定試液。進(jìn)行6次測(cè)定，左氧氟沙星峰面積RSD為0.012%，重復(fù)性良好。

2.4 重現(xiàn)性

取5個(gè)不同批號(hào)的樣品，在上述色譜條件下分別測(cè)定含量，RSD 分別為 0.058%、0.059%、0.058%、0.178%、0.212%。

2.5 線性范圍

精密稱取左氧氟沙星對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋成0.01、0.05、0.1、0.5、1mg·mL-1，分別進(jìn)樣10μl，記錄色譜峰，以左氧氟沙星濃度為縱坐標(biāo)，以峰面積為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=2.104683×10-8X-1.009133×10-2r=0.9993，結(jié)果見圖1。

圖1 左氧氟沙星對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.6 加樣回收率

精密稱取鹽酸左氧氟沙星藥品適量，置50mL容量瓶中，加入0.05 mg·mL-1磷酸二氫鉀溶液溶解，定容，分別量取1mL溶液置于3個(gè)25mL容量瓶中。精密量取左氧氟沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0、2.5、3.0mL，分別置于上述25mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為98.91%，結(jié)果見下表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性

取樣品內(nèi)容物適量，精密稱定，加0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH為4.0）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液備用。與室溫下分別放置0，12，24，36，48，60，72h，在上述色譜條件下測(cè)定。計(jì)算每個(gè)樣品7次檢測(cè)的RSD值均小于0.5%，結(jié)果見下表2。

表2 樣品72h內(nèi)穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果

2.8 檢測(cè)限與定量限

配制1.0×10-5，1.0×10-6，0.5×10-6mg/ml左氧氟沙星對(duì)照品溶液，進(jìn)樣液相色譜，檢測(cè)限按信噪比3:1，最低檢測(cè)濃度為0.85ng/ml，定量限按信噪比10:1，最低定量濃度為2.5ng/ml[3]。

2.9 樣品測(cè)定

分別精密稱取研磨后的5批鹽酸左氧氟沙星藥劑適量，加流動(dòng)相溶解并制成左氧氟沙星濃度為0.1mg/ml的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。與室溫下分別放置0，12，24，36，48，60，72h，在上述色譜條件下測(cè)定其含量，考察其藥品含量的穩(wěn)定性，結(jié)果見下表3。

表3 樣品含量穩(wěn)定性考察結(jié)果

3.討論

左氧氟沙星在臨床上應(yīng)用廣泛，其分析涉及人類健康安全問題，它的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法為高效液相色譜法，但是該方法檢測(cè)過程中要用到高氯酸鈉，高氯酸鈉不可與有機(jī)物或金屬粉末一起存放，易引起燃燒或爆炸，接觸濃硫酸也能引起爆炸，有毒，屬于高危易爆藥品，且對(duì)環(huán)境有污染。鹽酸左氧氟沙星為兩性氧化物，本實(shí)驗(yàn)采用磷酸二氫鉀溶液與乙腈為流動(dòng)相，出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，加入磷酸調(diào)節(jié)磷酸二氫鉀溶液的pH值，當(dāng)pH為4時(shí)，鹽酸左氧氟沙星的峰型良好。試驗(yàn)過程中通過多種不同流動(dòng)相比例進(jìn)行比較，最終確定流動(dòng)相為0.05molL-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH至4.0）-乙腈（83:17），色譜分離效果良好，理論塔板數(shù)為4400，鹽酸左氧氟沙星的相對(duì)保留時(shí)間為8.1min。