多種測(cè)序技術(shù)在藥品檢測(cè)環(huán)境微生物鑒定分析中的應(yīng)用研究

周政

[摘要]目的：對(duì)多種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行研究，探究多種測(cè)序技術(shù)在藥品檢測(cè)環(huán)境微生物鑒定分析中的作用。方法：在12個(gè)月中對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行連續(xù)的樣本采集，共采集了10株細(xì)菌和11株霉菌，把采集的細(xì)菌和霉菌采用一代測(cè)序技術(shù)、生化鑒定技術(shù)分別進(jìn)行測(cè)定，將這兩種方法所得的結(jié)果進(jìn)行交叉對(duì)比分析，保證是研究結(jié)果的準(zhǔn)確。結(jié)果：通過對(duì)一代測(cè)序技術(shù)和生化鑒定技術(shù)測(cè)定的測(cè)定結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)了4株水平分類的細(xì)菌；通過生化鑒定測(cè)得了5株霉菌的信息；一代測(cè)序測(cè)得4株霉菌的信息，一代測(cè)序比生化鑒定少測(cè)了一種霉菌；結(jié)論：通過對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比可知生化鑒定技術(shù)在鑒定特異性菌種時(shí)有著不俗的表現(xiàn)，但鑒定特異性不強(qiáng)的菌種時(shí)準(zhǔn)確率不高；一代測(cè)序技術(shù)可以對(duì)菌株進(jìn)行基因測(cè)序，但在特異性區(qū)分時(shí)不如生化測(cè)定的效果好，所以為了保證藥品生產(chǎn)時(shí)的安全，減少藥品被污染的可能性我們可以利用多種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果的交叉對(duì)比，從而更好的對(duì)藥品檢測(cè)環(huán)境進(jìn)行微生物的鑒定分析，降低微生物污染。

[關(guān)鍵詞]多種測(cè)序技術(shù) 藥品檢測(cè)環(huán)境微生物鑒定分析 應(yīng)用

在藥品生產(chǎn)中很容易出現(xiàn)微生物污染藥品的情況，微生物污染藥品會(huì)對(duì)藥品的臨床作用造成影響，不利于病人的治療。但由于醫(yī)療技術(shù)和經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)的局限在生產(chǎn)藥品時(shí)很難做到無菌生產(chǎn)，而且在藥品生產(chǎn)的合格標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)空氣中的浮游細(xì)菌的數(shù)量進(jìn)行判斷。這種標(biāo)準(zhǔn)很難查找細(xì)菌的源頭，不能從源頭上對(duì)細(xì)菌進(jìn)行控制，隨著生物學(xué)和分子學(xué)的共同發(fā)展，涌現(xiàn)了很多先進(jìn)的微生物測(cè)定方法，新一代的測(cè)序技術(shù)也開始出現(xiàn)，在微生物的測(cè)定和分析領(lǐng)域得到了很大的進(jìn)步，所以為了增加微生物檢測(cè)的準(zhǔn)確度，在進(jìn)行微生物檢測(cè)時(shí)逐步開始使用多種測(cè)序技術(shù)對(duì)藥品生產(chǎn)環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行交叉對(duì)比來獲取最終的微生物檢測(cè)結(jié)果。本文通過多種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行探究，利用多種測(cè)序技術(shù)對(duì)藥品生產(chǎn)環(huán)境中的微生物數(shù)量進(jìn)行測(cè)定，探討多種測(cè)序技術(shù)在藥品檢測(cè)中微生物含量檢測(cè)中應(yīng)用的意義，為藥品生產(chǎn)中減少細(xì)菌污染提供一定的技術(shù)支持。

一、資料與方法

（一）資料數(shù)據(jù)

本次實(shí)驗(yàn)中所應(yīng)用的菌種由本院微生物實(shí)驗(yàn)室不同的研究員在不同的位置使用胰蛋白胨大豆瓊脂平板進(jìn)行采集。本次實(shí)驗(yàn)所使用的菌株是本院在12個(gè)月內(nèi)所采集的，共采集了10株細(xì)菌和11株霉菌，所有的菌株標(biāo)本在采集后都經(jīng)過了純化，標(biāo)本不存在相互污染的現(xiàn)象。

（二）方法

采用一代測(cè)序技術(shù)、生化鑒定技術(shù)分別進(jìn)行測(cè)定，將這兩種方法所得的結(jié)果進(jìn)行交叉對(duì)比分析。

（1）生化鑒定技術(shù)測(cè)定：首先對(duì)10株細(xì)菌進(jìn)行常規(guī)的生化檢測(cè)，在對(duì)10株細(xì)菌樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)操作嚴(yán)格遵守相關(guān)規(guī)定和說明書。

（2）一代測(cè)序技術(shù)：首先要對(duì)所有菌株的DNA進(jìn)行擴(kuò)增鑒定，在操作過程中要嚴(yán)格按照操作標(biāo)準(zhǔn)和基因分析鑒定系統(tǒng)的試劑、說明書進(jìn)行操作。在操作時(shí)要對(duì)菌株的DNA進(jìn)行提、擴(kuò)增和純化，利用數(shù)據(jù)庫中的菌株信息對(duì)10個(gè)菌株的種屬進(jìn)行對(duì)比鑒定。

將所有的菌株按照以上兩種方式進(jìn)行測(cè)定，對(duì)這兩種方式進(jìn)行分析，確定鑒定結(jié)果的科學(xué)有效。

（三）評(píng)價(jià)指標(biāo)

使用兩種方法對(duì)10株細(xì)菌和11株霉菌的種屬進(jìn)行測(cè)定，驗(yàn)證多種測(cè)序技術(shù)的有效性。

二、結(jié)果

（1）細(xì)菌的種屬測(cè)定結(jié)果：把一代測(cè)序技術(shù)和生化鑒定技術(shù)測(cè)定的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行交叉比較發(fā)現(xiàn)，有4株水平分類的細(xì)菌；

（2）霉菌的種屬測(cè)定結(jié)果：通過生化鑒定測(cè)得了5株霉菌的信息；一代測(cè)序測(cè)得了4株霉菌的信息，比生化鑒定少測(cè)了一種霉菌；

三、討論

目前的藥品生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)藥品時(shí)很容易出現(xiàn)藥品被微生物污染的情況，藥品被微生物污染會(huì)嚴(yán)重影響藥品的質(zhì)量，如果患者服用被污染過的藥物不僅不能治療自身的疾病而且還有可能會(huì)引發(fā)并發(fā)癥，威脅自身的健康。所以對(duì)藥品生產(chǎn)進(jìn)行監(jiān)管是十分重要的，但由于醫(yī)療技術(shù)和經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)的局限在生產(chǎn)藥品時(shí)很難做到無菌生產(chǎn)，而且在藥品生產(chǎn)的合格標(biāo)準(zhǔn)水對(duì)空氣中的浮游細(xì)菌的數(shù)量進(jìn)行判斷的，這種檢驗(yàn)保準(zhǔn)有很大的漏洞，不能保證藥品不受污染。通過本文的研究發(fā)現(xiàn)，不同的微生物檢測(cè)技術(shù)都有著自己的優(yōu)勢(shì)和弱項(xiàng)，通過對(duì)多種測(cè)序技術(shù)的結(jié)果進(jìn)行交叉對(duì)比可以嘉禾每種衛(wèi)生我檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)和弱勢(shì)進(jìn)行優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，從而更好的檢測(cè)藥品生產(chǎn)環(huán)境中微生物的數(shù)量，降低藥品被微生物污染的概率提高藥品安全。本文通過對(duì)多種測(cè)序技術(shù)在藥品檢測(cè)環(huán)境中進(jìn)行微生物鑒定分析得知，生化鑒定技術(shù)在鑒定特異性菌種時(shí)準(zhǔn)確率很高，但鑒定特異性不強(qiáng)的菌種時(shí)準(zhǔn)確率不高；一代測(cè)序技術(shù)可以對(duì)菌株進(jìn)行基因測(cè)序，但對(duì)菌種進(jìn)行特異性區(qū)分時(shí)不如生化測(cè)定的效果好。所以，在對(duì)藥品檢測(cè)環(huán)境中進(jìn)行微生物鑒定分析時(shí)可以將多種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行應(yīng)用，上文提及的兩種微生物檢測(cè)方法各有優(yōu)劣，通過交叉檢測(cè)可以使這兩種方式進(jìn)行互補(bǔ)，提高檢測(cè)精度。