河南省臨床鼠傷寒沙門氏菌的耐藥性分析

李永瑞，李 艷

鼠傷寒沙門氏菌是許多國家人類胃腸炎和菌血癥的重要病原體。在全世界范圍內(nèi)每年大約有9 380萬食源性疾病暴發(fā)和15.5萬人死于沙門氏菌的感染[1]。沙門菌表面抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，血清型種類繁多，世界衛(wèi)生組織已報道的沙門氏菌大概有2 700多種血清型，其中鼠傷寒沙門氏菌屬于最常見的血清型之一[2]。此外，鼠傷寒沙門氏菌是中國第二大流行的血清型[3]。本研究通過對河南省147株臨床分離鼠傷寒沙門菌進(jìn)行藥物敏感測試從而了解當(dāng)?shù)厥髠抽T氏菌的耐藥情況，為指導(dǎo)臨床合理用藥和腸道傳染病的防控提供科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1實驗菌株收集河南地區(qū)2006年至2015年的147株鼠傷寒沙門氏菌臨床腹瀉患者分離株。

1.2主要試劑與儀器沙門菌科瑪嘉鑒定培養(yǎng)基(CHROMAgar，法國)；沙門菌診斷血清(SSI公司，丹麥)；APl20E腸桿菌科細(xì)菌鑒定板條(bioM6rieux，法國)；Sensititre 肉湯、Sensititre CMV3GNF藥敏板(Thermo Scientific，美國)；氯化鈉(國藥集團)。Sensititre微生物藥敏鑒定儀及分析系統(tǒng)、 Sensititre Nephelometer濁度儀、 Sensititre 0.5 McFarland比濁管、 標(biāo)準(zhǔn)玻璃管(Thermo Scientific,美國)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒儀器有限公司) ；純水儀(Milli-Q，美國) 。

1.3方法

1.3.1菌株的生化鑒定與血清分型從沙門菌科瑪嘉平板上挑取淡紫色圓形菌落接種至腦心浸液平板，37 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～18 h，使用0.85%生理鹽水制備0.5麥?zhǔn)蠞岫染?，然后用APl20E腸桿菌科系統(tǒng)生化鑒定，確定為沙門菌，然后用沙門菌診斷血清進(jìn)行O相玻片凝集分型，再利用0.4%營養(yǎng)軟瓊脂(參見WHO沙門菌鑒定手冊)進(jìn)行H相(1/2相)鞭毛誘導(dǎo)與血清凝集，生理鹽水為對照品。根據(jù)K-W血清分型表確定血清型別。

1.3.2藥物敏感性實驗通過使用Sensititre CMV3GNF藥敏板(Thermo Scientific,美國)的肉湯微量稀釋測定最小抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC)，實驗方法和判定 標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格遵守CLSI 2016版規(guī)定進(jìn)行執(zhí)行[4]。抗菌藥物為頭孢曲松(ceftriaxone,AXO)，頭孢噻呋(ceftiofur, XNL)，頭孢西丁(cefoxitin,FOX)，氨芐西林(ampicillin,AMP)，阿莫西林/克拉維酸( amoxicillin/clavulanic acid,2∶1 ratio,AUG2)，環(huán)丙沙星(ciprofloxacin,CIP)，萘啶酸(nalidixic acid,NAL)，阿奇霉素(azithromycin,AZI)，四環(huán)素(tetracycline,TET)，氯霉素(chloramphenicol,CHL)，甲氧芐啶/磺胺甲基異惡唑(trimethoprim/sulfamethoxazole,SXT)，磺胺異惡唑(sulfisoxazole,FIS)，慶大霉素(gentamicin,GEN)和鏈霉素(streptomycin,STR)。對3種或更多種抗生素有抗性的菌株被定義為作為多重耐藥菌株(multidrug resistant,MDR)。ACSSuT定義為同時對氨芐西林，氯霉素，鏈霉素，甲氧芐啶/磺胺甲基異惡唑和四環(huán)素有耐藥性。根據(jù)臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會的規(guī)定，大腸桿菌ATCC25922用于藥敏試驗，作為質(zhì)量控制菌株。

2 結(jié)果

2.1背景資料分析2006年至2015年河南省11個城市從腹瀉患者糞便中共分離到147株鼠傷寒沙門氏菌菌株。從6歲以下患者中分離出103株(70.07%)，其中91株(61.90%)分離自<2 歲嬰兒；從7～18歲的患者中分離出9株(6.12%)；19～59歲的患者中分離出21株(14.29%)；59歲以上的患者中分離出14株(9.52%)。 男女比例為1.7∶1，見表1。

表1 鼠傷寒沙門氏菌的人群分布情況 株(%)

2.2藥物敏感性實驗結(jié)果147株鼠傷寒沙門氏菌臨床分離株對β內(nèi)酰胺類抗生素氨芐西林的耐藥率為89.8%，阿莫西林/克拉維酸的耐藥率為66.00%，對頭孢曲松的耐藥率為16.33%，對頭孢噻呋的耐藥率為17.00%，對頭孢西丁的耐藥率為6.12%；對一代喹諾酮類抗生素萘啶酸的耐藥率為78.23%，對三代氟喹諾酮類抗生素環(huán)丙沙星的耐藥率為29.25%，其中有13株同時對頭孢菌素類有耐藥性；對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素阿奇霉素的耐藥率為10.20%，其中有3株同時對環(huán)丙沙星和頭孢菌素共同耐藥；對四環(huán)素的耐藥率為89.80%；對氯霉素類抗生素的耐藥率為76.87%；對磺胺類增效抗生素甲氧芐啶/磺胺甲基異惡唑耐藥率為77.55%，對磺胺異惡唑的耐藥率均為89.80%；對氨基糖苷類抗生素慶大霉素的耐藥率為69.39%，對鏈霉素的耐藥率為68.71%。147株鼠傷寒沙門氏菌中耐3類抗菌劑的共有134株(91.15%)屬于多重耐藥菌。其中，對至少4類抗菌劑、5類抗菌劑、6類抗菌劑和所有抗菌劑耐藥的分別為133株(90.48%)、117株(79.59%)、97株(65.99%)和6株(4.08%)。70株(47.61%)多重耐藥菌株表現(xiàn)出ACSSuT耐藥模式，其中31株對環(huán)丙沙星共耐藥，18株對頭孢類抗生素(cephalosporins,CEP)共耐藥，7株對阿奇霉素共耐藥。值得注意的是，兩株(1.36%)ACSSuT型分離株對這3種抗生素同時耐藥。具體數(shù)據(jù)見表2-3。

表2 臨床患者鼠傷寒沙門氏菌抗生素耐藥性結(jié)果

表3 147株鼠傷寒沙門氏菌的多重耐藥結(jié)果

注：ACSSuT:多重耐藥方式；AII：阿奇霉素；CIP:環(huán)丙沙星；CEP：頭孢類抗生素。

3 討論

鼠傷寒沙門氏菌是世界范圍內(nèi)食源性腹瀉最常見的病原菌之一，嚴(yán)重威脅著全球的公共衛(wèi)生健康問題，抗生素的使用是治療鼠傷寒沙門氏菌感染的有效辦法，但隨著抗生素的不合理使用，其耐藥問題越來越嚴(yán)重。尤其是在20世紀(jì)90年代首次出現(xiàn)鼠傷寒沙門氏菌多重耐藥菌株104型(DT104)[5]，使鼠傷寒沙門氏菌對抗生素的耐藥性成為這是全球關(guān)注的問題。

本研究通過對河南省2006年至2015年147株臨床分離的鼠傷寒沙門氏菌的抗生素耐藥性分析結(jié)果顯示，菌株對傳統(tǒng)的抗生素如氨芐西林，四環(huán)素，磺胺異惡唑，萘啶酸L表現(xiàn)出較高的耐藥性。目前，氟喹諾酮類藥物和頭孢類藥物作為臨床治療沙門氏菌感染的一線治療藥物，阿奇霉素最近也被美國食品和藥物管理局批準(zhǔn)用作另外的治療方法[6-7]。但是在一些國家均已報道了對氟喹諾酮類藥物敏感性降低的沙門氏菌分離株的出現(xiàn)[8-9]。同時Hohmann EL報道過對三代頭孢類耐藥菌株的出現(xiàn)[10]。在作者的研究中河南省鼠傷寒沙門氏菌對頭孢菌素類，環(huán)丙沙星的耐藥率高達(dá)21.77%和29.25%，而這些數(shù)值也遠(yuǎn)高于美國NARMS監(jiān)測結(jié)果[11]。同時在本研究中收集的鼠傷寒沙門氏菌株91.15%的菌株為多重耐藥菌株，明顯高于我國廣東以及上海的報道[12-13]。

另外有13株鼠傷寒沙門氏菌分離株同時對環(huán)丙沙星和頭孢菌素類共同耐藥，并且這些菌株均對至少5類抗生素產(chǎn)生耐藥性，表明對一線臨床用藥環(huán)丙沙星和頭孢菌素類產(chǎn)生耐藥性的鼠傷寒沙門氏菌分離株已經(jīng)在河南社區(qū)傳播。更應(yīng)引起足夠關(guān)注的是，13株分離株中有3株同時對阿奇霉素也表現(xiàn)出抗性。同時對三代頭孢菌素、環(huán)丙沙星和阿奇霉素耐藥的菌株在2014年被報道[14]。上述分析顯示近年來鼠傷寒沙門氏菌耐藥模式可能已經(jīng)發(fā)生了變化，臨床治療以及耐藥檢測應(yīng)該與這些變化保持同步。同時河南省位于中國中部，約占中國人口的7.00%，是人口流動性很大的主要交通樞紐。如果河南省的這些多重耐藥菌株與DT104型細(xì)菌一樣流行的話，將會對國家和國際公共衛(wèi)生構(gòu)成更嚴(yán)重的威脅。因此，必須監(jiān)測抗生素耐藥性并選擇合適的藥物用于鼠傷寒沙門氏菌感染。

綜上所述，本研究主要分析了河南省鼠傷寒沙門氏菌對14種抗生素的耐藥性。研究發(fā)現(xiàn)這些菌株不僅對傳統(tǒng)抗菌藥物表現(xiàn)出高耐藥性，而且對沙門氏菌感染的一線治療也表現(xiàn)出高耐藥性。同時作者發(fā)現(xiàn)，對頭孢菌素、環(huán)丙沙星和阿奇霉素共同耐藥菌株的出現(xiàn)，將使沙門氏菌感染治療的選擇變得越來越困難，所以應(yīng)做好鼠傷寒沙門氏菌感染的檢測，臨床也應(yīng)該合理選擇治療藥物。