新生兒巨細(xì)胞病毒感染的臨床檢測(cè)研究

張美娜，趙 虎，李仁哲，唐敏英，吳 琳，詹世淮，王慶華，譚建明

(福州總醫(yī)院泌尿外科，福州 350025)

巨細(xì)胞病毒 (CMV)是新生兒產(chǎn)后感染最常見的病原微生物之一，可導(dǎo)致新生兒出現(xiàn)黃疸、耳聾、智力障礙等癥狀，嚴(yán)重威脅新生兒的身心健康[1]。因CMV感染通常呈無癥狀的感染，隱密性較強(qiáng)，早期確診CMV對(duì)新生兒的治療顯得尤為重要[2-4]。本研究選取本院收治的662例疑似感染CMV的新生兒作為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行CMV核酸檢測(cè)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性研究2015年1 月至2016 年6 月來本院就診疑似感染CMV的新生兒患者662例。年齡0～120 d，中位年齡76 d。根據(jù)新生兒的患病情況，收集其尿液或血液標(biāo)本，進(jìn)行后續(xù)的核酸定量檢測(cè)。根據(jù)收集標(biāo)本類型的不同分為尿液組(337例)、血液組(325例)。

1.2儀器與試劑 CMV DNA定量檢測(cè)試劑為廣州達(dá)安基因股份有限公司人CMV核酸定量檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光法)，所用擴(kuò)增儀器為ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國 Life Technologies)。

1.3方法 嚴(yán)格按照說明書操作和PCR實(shí)驗(yàn)條件具體要求。PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增，根據(jù)CMV不同拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品(1.0×104、1.0×105、1.0×106、1.0×107)、陰性質(zhì)控品及待檢樣本的擴(kuò)增曲線，觀察得出結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1CMV DNA PCR擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果 4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品(1.0×104、1.0×105、1.0×106、1.0×107)、代表性陽性樣品(DNA拷貝數(shù)5.2×105，黑箭頭所指)以及陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線如圖1所示，證明CMV PCR擴(kuò)增結(jié)果準(zhǔn)確、可信。

圖1 CMV DNA PCR擴(kuò)增曲線圖(箭頭所指為陽性標(biāo)本)

2.2新生兒不同標(biāo)本CMV陽性檢出率 以CMV DNA拷貝數(shù)≥1×103判讀為陽性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，662例新生兒檢出CMV 49例，陽性檢出率為7.40%,其中尿液標(biāo)本陽性檢出率為8.9%(30/ 337),血液標(biāo)本陽性檢出率為5.85%(19/ 325)，見表1。

2.3新生兒CMV陽性感染標(biāo)本的拷貝數(shù)分布 兩組新生兒CMV陽性感染標(biāo)本的拷貝數(shù)分布均呈右偏態(tài)分布，數(shù)據(jù)大多集中在103～105，尤以103～104段的人數(shù)最多。尿液組和血液組陽性標(biāo)本CMV拷貝數(shù)的幾何均數(shù)分別為3.19×104、4.75×103，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.024 6)，見圖2。

表1 新生兒不同標(biāo)本類型CMV感染陽性檢出率的比較

圖2 新生兒CMV陽性感染標(biāo)本DNA拷貝數(shù)分布

3 討 論

CMV是新生兒產(chǎn)后感染最常見的病原微生物之一，可在尿液、血液等廣泛傳播[5]。PCR擴(kuò)增檢測(cè)是診斷CMV 的標(biāo)準(zhǔn)方法之一[6]。然而在臨床檢測(cè)中CMV的檢出率始終不高。本研究擬采集新生兒尿液、血液等不同來源標(biāo)本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)尿液、血液樣本中CMV的DNA拷貝數(shù)，探索最佳的標(biāo)本選擇途徑，從而提高新生兒CMV的正確檢出率。

CMV最容易侵犯的部位是腎臟、肝膽系統(tǒng)的管道上皮細(xì)胞，在腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制后經(jīng)尿液排出，因此尿液中CMV DNA拷貝數(shù)較高[7]。沈丹等[8]在確診或高度懷疑為CMV性肝炎的兒童患者中，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，檢測(cè)患者血清、外周血單個(gè)核細(xì)胞及3次混合尿3種標(biāo)本CMV DNA的水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本的CMV檢出率最高，定量檢測(cè)結(jié)果最高。鐘瑞芬等[9]采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和IgM抗體化學(xué)發(fā)光法兩種方法分別檢測(cè)新生兒尿液和血液中的CMV，結(jié)果發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果與上述結(jié)果類似。本研究采用新生兒尿液和血液標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)尿液CMV檢出率較血液高，且拷貝數(shù)的幾何均數(shù)為3.19×104，顯著高于血液中CMV的拷貝數(shù)(4.75×103)一個(gè)數(shù)量級(jí)。由于新生兒的特殊性，尿液較血液更易于采集，有利于后續(xù)治療連續(xù)采集、檢測(cè)。因此，尿液是新生兒檢測(cè)CMV DNA的最佳標(biāo)本選擇。

早期使用更昔洛韋對(duì)免疫能力較強(qiáng)的新生兒進(jìn)行抗CMV病毒治療，可在很大程度上減輕癥狀、降低病死率。前期研究結(jié)果顯示，CMV在感染機(jī)體后通常呈潛伏期感染，90%以上的新生兒先天性感染無任何臨床癥狀[10]。與此同時(shí)，CMV DNA檢測(cè)是確診新生兒感染CMV的最可靠方法。因此CMV DNA檢測(cè)結(jié)果的假陰性會(huì)極大地延誤新生兒患者的治療時(shí)機(jī)。本研究發(fā)現(xiàn)，尿液標(biāo)本中CMV的陽性檢出率較血液標(biāo)本高，且其平均拷貝數(shù)也較血液標(biāo)本高出一個(gè)數(shù)量級(jí)，可在一定程度上降低CMV檢出假陰性的發(fā)生，進(jìn)而有效地對(duì)臨床是否采取抗病毒治療給予指導(dǎo)意見。

綜上所述，新生兒CMV感染的陽性檢出率與標(biāo)本的采集途徑存在一定的相關(guān)性，尿液是新生兒CMV DNA檢測(cè)的最佳標(biāo)本。采用尿液檢測(cè)新生兒CMV的感染狀況，對(duì)于臨床指導(dǎo)CMV的抗病毒治療，提高新生兒CMV感染的預(yù)后有很好的積極意義。