未動(dòng)員外周血造血干細(xì)胞采集的臨床效果評(píng)價(jià)*

鄭偉萍,方 琦,陸紫敏,劉承重,李雪晨

(同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院輸血科,上海 200065)

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者多采用重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)動(dòng)員外周血造血干細(xì)胞(PBSC)，均獲得了較高的干細(xì)胞產(chǎn)量，并應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，有關(guān)PBSC動(dòng)員采集相關(guān)研究報(bào)道較多，但對(duì)未采用rhG-CSF動(dòng)員(簡(jiǎn)稱(chēng)未動(dòng)員)的PBSC相關(guān)研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道甚少[1]。本研究對(duì)本院自2014年1月至2017年6月收集的130例未動(dòng)員采集者PBSC采集效果與部分影響因素進(jìn)行分析，旨在進(jìn)一步提高未動(dòng)員患者自身PBSC采集效果提供相關(guān)理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 所有入組者均為PBSC采集者共130例，所有采集者采集前均未采用rhG-CSF作動(dòng)員，其中25例采集者為健康自愿捐獻(xiàn)外周血干細(xì)胞的親緣者，簡(jiǎn)稱(chēng)健康組；男12例、女13例；年齡20～49歲，中位年齡37.14歲。其余105例采集者均為腫瘤疾病患者；男55例、女50例；年齡24～75歲，中位年齡53.27歲；腫瘤疾病主要包括肺癌、腸道腫瘤、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、前列腺癌、膀胱腫瘤等。50歲以下采集者共33例，簡(jiǎn)稱(chēng)疾病組；男15例、女18例；年齡24～49歲，中位年齡39.92歲。比較50歲以下2組(健康組與疾病組)采集者的年齡、性別，以及采集前的血紅蛋白(Hb)及血小板(PLT)計(jì)數(shù)、白細(xì)胞 (WBC) 計(jì)數(shù)等各項(xiàng)指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。所有入組腫瘤疾病患者在采集前3周內(nèi)均未接受過(guò)抗腫瘤治療。

1.2方法 均采用MCS+血細(xì)胞分離機(jī)(美國(guó)血液技術(shù)公司)及PBSC專(zhuān)用一次性管道(美國(guó)血液技術(shù)公司)，輸入采集者性別、身高、體質(zhì)量、外周血紅細(xì)胞壓積，按PBSC程序單采，每次循環(huán)總血量2 000～6 000 mL，全血流速30～65 mL，抗凝劑與全血的比例為1∶10～1∶12，均選用肘靜脈或股靜脈置管。采集速度為20～50 mL/min，采集時(shí)間90～240 min。所有入組的采集者術(shù)前均口服10%葡萄糖酸鈣80 mL。每袋采集的單個(gè)核細(xì)胞懸液40～80 mL。

1.3儀器與試劑 血液保存液(ACD)成分為枸櫞酸鈉、枸櫞酸等(上海輸血技術(shù)有限公司)。取混勻后的PBSC采集物少許懸液，采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(日本Sysmex公司 XS-800i)進(jìn)行WBC計(jì)數(shù)、瑞氏染色顯微鏡下行單個(gè)核細(xì)胞(MNC)分類(lèi)、采用流式細(xì)胞儀(美國(guó)Beckman Coulter公司FC-500)進(jìn)行CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.4檢測(cè)相關(guān)因素 所有入組采集者采集前均檢測(cè)WBC計(jì)數(shù)、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、三酰甘油(TG)、載脂蛋白(apo)B、紅細(xì)胞比容(Hct)、PLT計(jì)數(shù)、Hb、MNC計(jì)數(shù)等指標(biāo)，并與入組患者PBSC采集物中MNC、 WBC和CD34+細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行比較，同時(shí)分析采集循環(huán)血容量、處理血量及循環(huán)次數(shù)與采集效果(尤其是產(chǎn)品中的CD34+細(xì)胞)的關(guān)系。CD34+細(xì)胞百分率與采集物白細(xì)胞總數(shù)，以及采集量的乘積除以采集者體質(zhì)量即為采集物CD34+細(xì)胞總數(shù)。MNC百分率與采集物白細(xì)胞總數(shù)的乘積即為采集物MNC水平。

2 結(jié) 果

2.1采集效果 入組采集的130例外周血干細(xì)胞取混勻后的采集物少許懸液計(jì)數(shù)WBC、MNC、CD34+細(xì)胞數(shù)。采集物MNC%水平為(65.20%±18.29%)；CD34+%水平為(1.71%±1.32%)；WBC計(jì)數(shù)(68.25±48.81)×109/kg；MNC(0.35±0.38)×108/kg；CD34+(0.93±1.36)×106/kg。

2.2不同組別采集前指標(biāo)、采集物參數(shù)比較 兩組的相關(guān)指標(biāo)比較，健康組采集物中MNC(0.51±0.19)×108/kg、WBC計(jì)數(shù)(104.14±34.27)×108/kg均高于疾病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。健康組采集前MNC、WBC指標(biāo)及采集物MNC%、CD34+%與疾病組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

2.3影響PBSC采集物多元回歸分析 分別對(duì)采集者BMI、TG、apoB、Hct、PLT、WBC、Hb、MNC等指標(biāo)，以及采集時(shí)循環(huán)數(shù)、循環(huán)血量等因素與采集物MNC%、CD34+%、WBC 計(jì)數(shù)、MNC水平、MNC計(jì)數(shù)、CD34+細(xì)胞數(shù)的影響進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示：采集前BMI、MNC水平對(duì)采集物MNC%有影響(P均<0.05，回歸系數(shù)分別為1.264和10.173)，見(jiàn)表2。采集前所有檢測(cè)指標(biāo)及采集時(shí)循環(huán)因素對(duì)采集物CD34+%均無(wú)影響；采集時(shí)循環(huán)血量對(duì)采集物WBC計(jì)數(shù)有影響(P<0.05，回歸系數(shù)為0.016)，見(jiàn)表3。采集前MNC水平與采集物MNC水平呈正相關(guān)(P<0.05 ，回歸系數(shù)為19.860)，其他采集前檢測(cè)指標(biāo)以及采集時(shí)循環(huán)因素與采集物MNC水平均無(wú)相關(guān)性；采集前Hct和采集時(shí)循環(huán)數(shù)對(duì)采集物MNC計(jì)數(shù)有影響，見(jiàn)表4。采集時(shí)循環(huán)血量、循環(huán)數(shù)對(duì)采集物CD34+細(xì)胞數(shù)也有影響(P均<0.05 ，回歸系數(shù)分別為0.001和-0.192)，采集前所有檢測(cè)指標(biāo)與采集物CD34+細(xì)胞數(shù)均無(wú)相關(guān)性。

表1 兩組采集者PBSC采集效果

表2 130例采集者M(jìn)NC多元回歸分析

表3 130例采集者WBC多元回歸分析

表4 130例采集者M(jìn)NC多元回歸分析

續(xù)表4 130例采集者M(jìn)NC多元回歸分析

3 討 論

有效的PBSC主要是通過(guò)血細(xì)胞分離機(jī)利用重力離心法分離獲得的。然而影響PBSC采集數(shù)量和質(zhì)量因素較多，雖然采用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)動(dòng)員的PBSC較未動(dòng)員的PBSC產(chǎn)量要高，但其費(fèi)用高并存在采集者用藥4～5 d出現(xiàn)不同程度全身不適癥狀(包括低熱或骨骼酸痛等)而容易遭采集者拒絕[2]。因此有必要對(duì)未動(dòng)員的PBSC采集影響因素及采集效果進(jìn)行研究。本研究入組的130例外周血干細(xì)胞采集者術(shù)前均未采用G-CSF作動(dòng)員，筆者對(duì)其進(jìn)行自身PBSC采集并檢測(cè)采集物的WBC、MNC、CD34+細(xì)胞總數(shù)及MNC、 CD34+百分率，分別是(68.25±48.81)×109/kg、(0.35±0.38)×108/kg、(0.93±1.36)×106/kg、(65.20%±18.29%)、(1.71%±1.32%)，提示未作動(dòng)員的采集者其外周血中是存在并能夠采集到一定數(shù)量的MNC、CD34+細(xì)胞的，而且其數(shù)量是達(dá)到細(xì)胞免疫治療所需要的臨床治療閾值，即能夠在患者體內(nèi)得到增殖與分化的。本研究還對(duì)50歲以下采集者進(jìn)行分組：即健康組與疾病組，并比較兩組采集前MNC、WBC計(jì)數(shù)指標(biāo)的差異，確定差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其兩組采集物參數(shù)結(jié)果方有可比性。健康組采集物參數(shù)與疾病組采集物參數(shù)作統(tǒng)計(jì)比較分析，結(jié)果顯示：健康組采集物中MNC(0.51±0.19)×108/kg、WBC計(jì)數(shù)(104.14±34.27)×108/kg均高于疾病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這可能與腫瘤患者本身骨髓細(xì)胞儲(chǔ)備較差，加上反復(fù)的化療，導(dǎo)致骨髓細(xì)胞增生能力的減弱，PBSC的數(shù)量相應(yīng)減少[3]。然而本研究健康組采集物CD34+細(xì)胞數(shù)與疾病組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其結(jié)果與沈亞文等[4]報(bào)道相似。CD34+是造血干細(xì)胞重要標(biāo)志，但其檢測(cè)方法在不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果差異很大，重復(fù)性、可比性較差；而MNC可以用來(lái)估計(jì)CD34+細(xì)胞的水平，其僅用顯微鏡及全自動(dòng)細(xì)胞分析儀兩種儀器即可，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定[5]。有學(xué)者認(rèn)為，CD34+細(xì)胞采集量與外周血MNC數(shù)值有明顯相關(guān)，并可考慮MNC數(shù)值作為預(yù)測(cè)采集物中CD34+細(xì)胞數(shù)的簡(jiǎn)單預(yù)測(cè)指標(biāo)[6]。本研究現(xiàn)象提示用MNC計(jì)數(shù)取代CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)作為造血干細(xì)胞移植中的造血干細(xì)胞水平的指標(biāo)是完全可行的[4]。

以血細(xì)胞分離機(jī)單位循環(huán)量所得的產(chǎn)物中MNC數(shù)和CD34+細(xì)胞數(shù)是衡量PBSC采集效果，有關(guān)對(duì)采集前的外周血WBC計(jì)數(shù)、MNC計(jì)數(shù)等指標(biāo)與未動(dòng)員采集PBSC的采集效果是否相關(guān)的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道甚少。本研究分別對(duì)采集者BMI、TG、apoB、Hct、PLT、WBC、Hb、MNC等指標(biāo)，以及采集時(shí)循環(huán)數(shù)、循環(huán)血量等因素與采集物MNC%、CD34+%、WBC計(jì)數(shù)、MNC計(jì)數(shù)、CD34+細(xì)胞數(shù)的影響進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，采集前BMI、MNC水平與采集物MNC%呈正相關(guān)，與國(guó)內(nèi)報(bào)道結(jié)果相似[7]。本研究超重供者采集前并未經(jīng)G-CSF動(dòng)員，其機(jī)制考慮與供者體質(zhì)量增大其MNC儲(chǔ)備量增加有關(guān)；研究還發(fā)現(xiàn)采集時(shí)循環(huán)血量與采集物WBC計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)，其原因可能與個(gè)體內(nèi)外周血WBC總數(shù)相對(duì)固定有關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)采集前Hct與采集物MNC數(shù)也呈負(fù)相關(guān)，有學(xué)者研究證實(shí)紅細(xì)胞表面存在炎性因子受體，炎性細(xì)胞因子可通過(guò)受體來(lái)抑制紅細(xì)胞成熟，而WBC是機(jī)體常見(jiàn)的炎性標(biāo)志物，Hct與采集物MNC數(shù)的相關(guān)性還有待進(jìn)一步大樣本研究[8-9]。同時(shí)筆者還觀察到采集前外周血MNC水平與采集物MNC水平呈正相關(guān)，這為提前預(yù)測(cè)MNC數(shù)量，進(jìn)行采集量的控制提供了一定的數(shù)據(jù)參考。本研究還發(fā)現(xiàn)采集時(shí)采集循環(huán)數(shù)與采集物MNC計(jì)數(shù)正相關(guān)，采集循環(huán)血量、循環(huán)數(shù)對(duì)采集物CD34+細(xì)胞數(shù)也有影響因素，但循環(huán)血量與CD34+細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)，采集物中的CD34+細(xì)胞數(shù)與采集時(shí)的循環(huán)數(shù)、循環(huán)血量變化不一致性可能與個(gè)體內(nèi)外周血CD34+細(xì)胞數(shù)量相對(duì)固定有關(guān)，還可能與諸如個(gè)體采集時(shí)機(jī)、疾病種類(lèi)、年齡、性別等因素有關(guān)聯(lián)，還有待進(jìn)一步大樣本研究。

綜上所述，應(yīng)用血細(xì)胞分離機(jī)對(duì)未動(dòng)員采集者進(jìn)行PBSC采集，不僅安全、采集成功，而且能夠采集到一定濃度的、并能夠滿足臨床治療需要的PBSC。采集者在采集前的外周血MNC、BMI、Hct及采集時(shí)循環(huán)血量、循環(huán)數(shù)對(duì)采集效果有相關(guān)影響，其中采集前MNC數(shù)量可預(yù)測(cè)采集者PBSC采集效果。