游離β人絨毛膜促性腺激素定量測定化學(xué)發(fā)光免疫分析法的建立與性能評價

伍華穎王小艷李志雄董志寧吳英松徐偉文

游離β人絨毛膜促性腺激素（free β human chorionic gonadotrophin，f-β-hCG）是由胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞合成與分泌的一種糖蛋白激素，分子量為22.2 KD，是人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin，HCG）的特有結(jié)構(gòu)，決定其分子的生物學(xué)和免疫學(xué)特性。f-β-hCG在懷孕過程中伴隨HCG一起出現(xiàn)及增長，因此是診斷早孕和孕中期的一項(xiàng)重要的檢測指標(biāo)［1-4］。血清中f-β-hCG測定不僅能診斷先兆流產(chǎn)、異位妊娠、葡萄胎、唐氏綜合征、子癇前期等疾?。?-7］，也是治療后及預(yù)后觀察的重要檢測指標(biāo)。f-β-hCG檢測還對生殖系統(tǒng)腫瘤如卵巢癌、滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤、男性睪丸腫瘤有輔助診斷價值，對一些非生殖系統(tǒng)的腫瘤也有一定輔助診斷意義［8-9］。隨著二胎政策的開放，高齡產(chǎn)婦增加，高危妊娠、異常妊娠概率相應(yīng)增加，因此能準(zhǔn)確測定作為孕期重要檢測指標(biāo)的f-β-hCG變得尤其重要。本研究旨在研制一種快速的、靈敏度高、準(zhǔn)確性好的f-β-hCG定量測定化學(xué)發(fā)光試劑盒，以期為臨床提供新的可選用的f-β-hCG檢測試劑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本

確定參考值范圍的樣本：年齡在21～45歲未懷孕的女性健康查體者血清樣本137例，平均年齡為34.5歲；年齡在19～48歲的9～13周低風(fēng)險的孕婦血清樣本635份，平均年齡為31.2歲，其中孕9周125例、孕10周129例、孕11周123例、孕12周131例、孕13周127例。

檢測效能比對的樣本：年齡在20～46歲的孕婦血清樣本209例，平均年齡為38.3歲，其中孕9周11例、孕10周14例、孕11周62例、孕12周68例、孕13周54例。

以上血清樣本均來自中國人民解放軍蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院。

1.1.2 試劑

一對配對f-β-hCG單克隆抗體均為美國Meridian公司產(chǎn)品；人源性f-β-hCG蛋白來源于美國Fitzgerald公司；磁微球購自美國的Invitrogen公司；發(fā)光物質(zhì)吖啶鹽來自于蘇州亞科科技股份有限公司；德國羅氏公司的游離β-絨毛膜促性腺激素定量測定試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）；企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品和企業(yè)質(zhì)控品由廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司制備。

質(zhì)控品：含3個不同濃度水平的血清質(zhì)控品，批號：201701，購自廣州邦德盛生物科技有限公司。

1.1.3 儀器

廈門優(yōu)邁科醫(yī)學(xué)儀器有限公司的全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；德國羅氏公司cobas e601全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 磁微球包被抗體

取0.5 mg f-β-hCG單克隆抗體于超濾離心管中，用0.1 mol/L MES緩沖液重復(fù)洗滌8次，收集抗體待用；磁微球用0.1 mol/L MES緩沖液清洗6次后活化20 min，活化后的磁微球再用0.1 mol/L MES緩沖液重復(fù)洗滌6次，加入收集好的待用的抗體，放置37℃振蕩反應(yīng)24 h；用0.1 mol/L MES緩沖液重復(fù)洗滌2次，再用含5%BSA的Tris緩沖液37℃振蕩2 h進(jìn)行封閉未結(jié)合位點(diǎn)；用含5%BSA的Tris緩沖液洗滌2次，加入含有蛋白保護(hù)劑的緩沖液，放置于2～8℃保存。

1.2.2 抗體標(biāo)記吖啶鹽

取0.5 mg單克隆抗體于超濾離心管中，用0.1 mol/L PB緩沖液重復(fù)洗滌6次后收集抗體，將0.01 mg吖啶鹽加入收集好的單克隆抗體中，放置于恒溫?fù)u床上避光反應(yīng)16 h，進(jìn)行分離純化，純化后的標(biāo)記抗體加入蛋白保護(hù)劑，放置于2～8℃保存。

1.2.3 使用濃度的選擇

1.2.3.1 磁微球使用濃度的選擇

將包被有抗體的磁微球稀釋到50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL 3個使用濃度，分別加入25 μL抗原及100 μL標(biāo)記有吖啶鹽的抗體，恒溫37℃條件下反應(yīng)30 min后進(jìn)行清洗，加入預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液進(jìn)行發(fā)光值檢測。通過發(fā)光值比較得出磁微球的使用濃度為200 μg/mL。

1.2.3.2 吖啶鹽標(biāo)記物使用濃度的選擇

將標(biāo)記有抗體的吖啶鹽稀釋到15 ng/mL、30 ng/mL、60 ng/mL 3個使用濃度，分別加入25 μL抗原及50 μL 200 μg/mL磁微球，恒溫37℃條件下反應(yīng)30 min后進(jìn)行清洗，加入預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液進(jìn)行發(fā)光值檢測。通過發(fā)光值比較得出吖啶鹽標(biāo)記物使用濃度為30 ng/mL。

1.2.4 反應(yīng)步驟選擇

1.2.4.1 一步法

分別將25 μL樣本、50 μL包被有抗體的磁微球、100 μL標(biāo)記有吖啶鹽的抗體依次加入反應(yīng)杯，恒溫37℃條件下反應(yīng)30 min后進(jìn)行清洗，加入預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液進(jìn)行發(fā)光值檢測。

1.2.4.2 一點(diǎn)五步法

將25 μL樣本、50 μL包被有抗體的磁微球加入反應(yīng)杯，恒溫37℃條件下反應(yīng)15 min，再加入100 μL標(biāo)記有吖啶鹽的抗體，繼續(xù)于恒溫37℃條件下反應(yīng)15 min后進(jìn)行清洗，加入預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液進(jìn)行發(fā)光值檢測。

1.2.4.3 兩步法

將25 μL樣本、50 μL包被有抗體的磁微球加入反應(yīng)杯，恒溫37℃條件下反應(yīng)15 min后進(jìn)行清洗，加入100 μL標(biāo)記有吖啶鹽的抗體，繼續(xù)恒溫37℃條件下反應(yīng)15 min，再進(jìn)行清洗，加入預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液進(jìn)行發(fā)光值檢測。

1.2.5 反應(yīng)原理

f-β-hCG化學(xué)發(fā)光法的反應(yīng)原理如圖1。

圖1 f-β-hCG的反應(yīng)原理Figure 1 The reaction of f-β-hCG

1.3 分析性能評價

1.3.1 最低檢測限試驗(yàn)

用自制的f-β-hCG試劑盒對零濃度校準(zhǔn)品進(jìn)行重復(fù)測定20次，計(jì)算20次測量結(jié)果的平均發(fā)光值（mean，M）和標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation，SD），得出M+2SD值，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰濃度校準(zhǔn)品的發(fā)光值進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得到一次方程，將M+2SD值代入上述方程中，計(jì)算得到的濃度即為最低檢出限。

1.3.2 準(zhǔn)確性試驗(yàn)

用樣本稀釋液對游離β-絨毛膜促性腺激素國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋，使其最終濃度約為5 ng/mL和100 ng/mL，將其作為樣本重復(fù)檢測3次，測得的平均濃度記為M，根據(jù)公式：測量偏差=（M-理論值）/理論值×100%。

1.3.3 線性試驗(yàn)

用高值樣本按5個比例稀釋為5個不同濃度樣本，其中最低濃度樣本的濃度值接近最低檢測限濃度值。對5個濃度樣本分別進(jìn)行3次重復(fù)檢測，計(jì)算每個樣本的平均值，再用樣本的平均值和相應(yīng)的稀釋比例進(jìn)行四參數(shù)擬合，計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r。

1.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

用自制的f-β-hCG試劑盒分別對濃度為20 ng/mL、50 ng/mL、150 ng/mL 3個低、中、高濃度的企業(yè)質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)檢測20次，再分別計(jì)算出每個質(zhì)控品20次檢測結(jié)果的平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）值，按變異系數(shù)（variable cofficient，CV）公式CV=SD/M×100%得出變異系數(shù)。

1.3.5 批間精密度試驗(yàn)

用3個不同批次自制f-β-hCG試劑盒分別檢測3個低、中、高濃度的企業(yè)質(zhì)控品，重復(fù)檢測20次，計(jì)算60次測量結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，計(jì)算其變異系數(shù)（CV）。

1.3.6 特異性試驗(yàn)

用自制f-β-hCG試劑盒對促甲狀腺激素（300 mIU/L）、促卵泡激素（200 IU/L）及促黃體生成素（250 IU/L）進(jìn)行檢測，各檢測3次。

1.3.7 參考值范圍

用自制的f-β-hCG試劑盒檢測經(jīng)德國羅氏公司β-絨毛膜促性腺激素定量測定試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）檢測的772份血清樣本，其中635例為9～13孕周的低風(fēng)險母體血清樣本，137例為未懷孕查體者的血清樣本，根據(jù)檢測結(jié)果提供自制試劑盒的參考值范圍。

1.3.8 樣本檢測效能比對

以德國羅氏公司的β-絨毛膜促性腺激素定量測定試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）作為對照試劑，用自制的f-β-hCG試劑盒檢測209例孕婦血清樣本，分析2種試劑盒檢測結(jié)果的相關(guān)性和一致性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用OrigiPro7.5進(jìn)行四參數(shù)擬合建立自制試劑盒線性相關(guān)系數(shù)r，及對不同反應(yīng)模式的濃度梯度f-β-hCG劑量-反應(yīng)擬合Hill曲線，選擇線性關(guān)系較好的曲線對應(yīng)的反應(yīng)模式。利用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析f-β-hCG在各孕周的濃度分布情況及相關(guān)性；用Medcalc軟件進(jìn)行Bland-Altman分析，對2種試劑盒的一致性作進(jìn)一步分析。

2 結(jié)果

2.1 反應(yīng)步驟選擇

用包被有抗體的磁微球和標(biāo)記有抗體的吖啶鹽按照一步法、一點(diǎn)五步法、兩步法反應(yīng)步驟，以雙抗體夾心法建立f-β-hCG的化學(xué)發(fā)光免疫分析法，對不同濃度f-β-hCG企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測。將劑量-反應(yīng)擬合Hill曲線，結(jié)果見表1，根據(jù)表1結(jié)果可知3種反應(yīng)步驟中一步法不僅本底比較高且曲線線性相關(guān)性比較差，兩步法本底比較低且曲線線性相關(guān)性最好，R2為0.997 6。所以我們選擇了曲線線性相關(guān)性最佳的兩步法。

表1 濃度與發(fā)光值的Hill曲線方程Table 1 Hill curve equation of concentration and luminescence

2.2 分析性能評價

2.2.1 自制f-β-hCG試劑盒定標(biāo)與質(zhì)量控制

用校準(zhǔn)品對自制f-β-hCG試劑盒進(jìn)行校準(zhǔn)曲線定標(biāo)，定標(biāo)成功后，再用第三方廣州邦德盛生物科技公司的血清質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制，定標(biāo)結(jié)果見圖2，質(zhì)量控制結(jié)果見表2。

表2 質(zhì)控品檢測結(jié)果Table 2 Measurement results of control

2.2.2 最低檢測限

根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰濃度校準(zhǔn)品的濃度-發(fā)光值的結(jié)果進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合，得出一次性方程，得到零濃度校準(zhǔn)品的M值為1 051，SD值為32.41，將零濃度校準(zhǔn)品的M+2SD值1 115.82代入上述方程中，得到最低檢測限為0.006 ng/mL，不高于0.5 ng/mL。

2.2.3 準(zhǔn)確性

對濃度稀釋至5 ng/mL和100 ng/mL的2個f-β-hCG國家標(biāo)準(zhǔn)品樣本進(jìn)行檢測，濃度為5 ng/mL的國家標(biāo)準(zhǔn)品樣本的檢測結(jié)果為（5.13±0.21）ng/mL，相對偏差為4.43%；濃度為100 ng/mL的國家標(biāo)準(zhǔn)品樣本的檢測結(jié)果為（98.45±2.33）ng/mL，相對偏差為2.56%。本試劑盒準(zhǔn)確性相對偏差均在±10%范圍內(nèi)。

2.2.4 線性

用濃度為200 ng/mL高值樣本按5個比例稀釋為5個不同濃度樣本，對5個濃度樣本分別進(jìn)行3次重復(fù)檢測，計(jì)算每個樣本的平均值，將檢測結(jié)果進(jìn)行四參數(shù)擬合，得出線性方程為Y=359 847.365 87+（0.068 94-359 847.365 87）/（1+（X/1 924.888 42）0.99185，線性相關(guān)系數(shù)R2為1，線性很好（表3、圖3）。

表3 線性檢測結(jié)果（n=3）Table 3 Measurement results of linearity（n=3）

2.2.5 重復(fù)性

其變異系數(shù)（CV）在1.83%～4.35%之間，均小于8%，結(jié)果見表4。

2.2.6 批間精密度試驗(yàn)

用3個批次自制f-β-hCG試劑盒分別檢測濃度為20 ng/mL、50 ng/mL、150 ng/mL 3個低、中、高濃度的企業(yè)質(zhì)控品，其變異系數(shù)（CV）分別為2.88%、5.43%、3.67%，均小于15%，結(jié)果見表4。

圖2 f-β-hCG定標(biāo)曲線Figure 2 Calibration curve of f-β-hCG

圖3 f-β-hCG線性擬合Figure 3 Linear fitting of f-β-hCG

表4 重復(fù)性和批間精密度的結(jié)果Table 4 The results of repeatability and precision between different assays

2.2.7 特異性

將促甲狀腺激素（300 mIU/L）、促卵泡激素（200 IU/L）及促黃體生成素（250 IU/L）作為樣本用自制f-β-hCG試劑盒檢測，結(jié)果見表7，本自制試劑盒對促甲狀腺激素檢測結(jié)果為（0.32±0.015）ng/mL、促卵泡激素檢測結(jié)果為（0.24±0.031）ng/mL、促黃體生成素檢測結(jié)果為（0.45±0.024）ng/mL，交叉反應(yīng)檢測結(jié)果均不高于0.5 ng/mL。

2.3 參考值范圍建立

用自制f-β-hCG試劑盒對137份未懷孕查體者的血清樣本進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并對檢測結(jié)果按百分?jǐn)?shù)法進(jìn)行排序，得到未懷孕查體者樣本研究的參考范圍為0～0.5 ng/mL，結(jié)果見圖4。

用自制f-β-hCG試劑盒對635份9～13周低風(fēng)險的孕婦血清樣本進(jìn)行檢測，分別列出每個孕期的平均值、中位數(shù)、第二點(diǎn)五位百分?jǐn)?shù)和第九十七點(diǎn)五位百分?jǐn)?shù)，為自制f-β-hCG試劑盒提供不同孕周f-β-hCG的正常值參考范圍，結(jié)果見表5。

圖4 137份未懷孕查體者f-β-hCG測值直方圖Figure 4 Historgram of f-β-hCG in 137 unpregnant women

表5 不同孕周孕婦血清中f-β-hCG的濃度Table 5 Concentrations of f-β-hCG in serum at different weeks of gestation

2.4 樣本檢測效能比對

對年齡在20～46歲的孕9～13周的209份孕婦血清樣本進(jìn)行檢測，根據(jù)各孕周的正常參考值范圍，對照試劑檢測出高值樣本46例，低值樣本33例，正常樣本130例；自制試劑盒檢測出高值樣本46例，低值樣本35例，正常樣本128例，兩者不一致樣本有4例，見表6。從定性結(jié)果的一致性上分析，自制試劑盒與對照試劑盒的高值異常符合率為97.8%，低值異常符合率為94.3%，正常符合率為99.2%，總符合率為98.1%。

表6 樣本統(tǒng)計(jì)歸納表Table 6 Table of sample statistics summary

表7 樣本一致性的計(jì)算結(jié)果Table 7 The calculated results of Kappa values for sample

表8 樣本相關(guān)性分析結(jié)果Table 8 The results of correlation analysis for sample

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算卡方值及其置信區(qū)間、相關(guān)性r值、線性回歸方程和畫出散點(diǎn)圖。一致性達(dá)0.965（P＜0.01，95%置信區(qū)間為0.934～0.992）（表7），相關(guān)性r值為0.992（P＜0.01，95%置信區(qū)間為0.989～0.995）（表8），線性回歸方程為y=1.131x+0.826（P＜0.01，B的95%置信區(qū)間為1.111～1.151）（表9），散點(diǎn)圖見圖5，判定系數(shù)R2=0.980。采用MedCalc統(tǒng)計(jì)軟件作Bland-Altman分析，對自制試劑盒和對照試劑盒的一致性作進(jìn)一步分析，為了使Bland-Altman分析圖成正態(tài)分布，將自制試劑盒與對照試劑盒的測值進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換，使用其對數(shù)值進(jìn)行Bland-Altman分析，以自制試劑盒測值對數(shù)與對照試劑盒測值對數(shù)的均值為X軸，以兩者的差值為Y軸，繪制散點(diǎn)圖（圖6），由圖6可見，差值的均數(shù)為-0.07，差值95%的分布界限，即95%一致性界限為（-0.01～0.14）ng/mL，經(jīng)反對數(shù)變換，95%一致性界限為（0.98～1.38）ng/mL，偏差在±2.5 ng/mL之間。在95%一致性界限的可信區(qū)間之外，僅有6.2%（13/209）的點(diǎn)存在；在95%一致性界限的可信區(qū)間之內(nèi)，其中差值絕對值的最大值為0.02，而其均值為1.90，經(jīng)反對數(shù)變換，差值絕對值的最大值為1.08 ng/mL，其均值為79.4 ng/mL。

表9 樣本線性回歸分析表Table 9 The analysis of linear regression for sample

圖5 相關(guān)性分析散點(diǎn)圖Figure 5 The scatter plot of correlation analysis

3 討論

在女性健康方面，f-β-hCG的測定在臨床上有助于診斷和檢測妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾?。?0-13］及早期診斷不良妊娠，是識別絨毛膜癌和胎盤部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的一個標(biāo)志物。f-β-hCG也是女性多種非滋養(yǎng)細(xì)胞惡性腫瘤中的一個標(biāo)志物，如宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌。f-β-hCG聯(lián)合CA125檢測可提高卵巢癌的診斷率。

然而f-β-hCG并非女性的專屬腫瘤標(biāo)志物，在男性生殖細(xì)胞腫瘤特別是睪丸癌的檢測與跟蹤中，f-β-hCG的檢測也具有很重要的意義。對于胃腸道、肝部的惡性腫瘤的檢出，f-β-hCG的檢測同樣具有意義［14］。

圖6 Bland-Altman分析圖Figure 6 The chart of Bland-Altman analysis

f-β-hCG檢測對預(yù)后評價起著重要的作用。在胃腸道腫瘤和卵巢癌中，f-β-hCG是一個獨(dú)立的預(yù)后因子；f-β-hCG在臨床上亦用于監(jiān)控肺癌；f-β-hCG蛋白的高表達(dá)是乳腺癌不良預(yù)后的明顯標(biāo)志。因此，腫瘤患者在治療之前檢測f-β-hCG可為臨床醫(yī)生提供非常重要的治療指導(dǎo)作用［15］。

目前臨床上用于定量檢測f-β-hCG的方法主要有放射免疫分析法、時間分辨熒光法、酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法、化學(xué)發(fā)光法等。過去以放射免疫分析法為代表的游離β人絨毛膜促性腺激素測定試劑盒，由于受方法學(xué)的限制，存在試劑穩(wěn)定性差、放射性污染等缺點(diǎn)，且操作過程比較復(fù)雜，已基本上退出市場，目前應(yīng)用較廣泛的是酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)和化學(xué)發(fā)光技術(shù)［16-17］。

本研究以雙抗體夾心法建立了一種定量檢測f-β-hCG的化學(xué)發(fā)光技術(shù)新方法，用磁微球以共價交聯(lián)的方式包被抗體作為固相載體，不僅實(shí)現(xiàn)管式全自動化，還能增強(qiáng)發(fā)光信號，提高穩(wěn)定性［18］。用吖啶鹽作為標(biāo)記物，以過氧化氫和氫氧化鈉為啟動劑，直接發(fā)光反應(yīng)、簡單、快速、穩(wěn)定、無放射性同位素?fù)p傷和污染。

迄今國內(nèi)外暫未有用吖啶鹽標(biāo)記測定f-β-hCG的化學(xué)發(fā)光方法的相關(guān)報道，因此，本研究在質(zhì)控品檢測結(jié)果均符合要求、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的情況下，對自制f-β-hCG試劑盒進(jìn)行各項(xiàng)性能評價，自制試劑盒的最低檢測限能達(dá)到0.006 ng/mL，而國內(nèi)外市場使用率較高的羅氏進(jìn)口f-β-hCG試劑盒最低檢測限為0.01 ng/mL，自制試劑盒靈敏度更優(yōu)；通過樣本效能比對試驗(yàn)，自制試劑盒與羅氏進(jìn)口試劑盒的相關(guān)性達(dá)到0.992、一致性達(dá)到0.965，總符合率為98.1%，說明自制試劑盒與進(jìn)口試劑盒具有較好的一致性，同時也說明了自制試劑盒質(zhì)量甚至更優(yōu)于進(jìn)口試劑盒。自制試劑盒的準(zhǔn)確度的相對偏差最高為4.43%，其具有良好的重復(fù)性和精密性，批內(nèi)重復(fù)性CV值小于8%，批間精密度試驗(yàn)CV值小于15%，線性范圍在0～200 ng/mL之間，相關(guān)性很好，特異性比較高。

自制試劑盒與羅氏進(jìn)口試劑盒進(jìn)行樣本檢測效能比對，自制試劑盒的一致性達(dá)到0.965，相關(guān)性r值達(dá)到0.992，說明自制試劑盒與應(yīng)用較廣的進(jìn)口試劑盒具有較好的一致性及等效性。

根據(jù)郭翀等人［19］和鄒麗萍［20］分別用時間分辨熒光法及光激化學(xué)發(fā)光法評價f-β-hCG的結(jié)果，時間分辨熒光法及光激化學(xué)發(fā)光法的靈敏度分別為0.09 ng/mL和0.11 ng/mL、重復(fù)性均CV值小于10%，而自制試劑盒的靈敏度能達(dá)到0.006 ng/mL、重復(fù)性CV值小于8%。因此，本研究用化學(xué)發(fā)光法研究的自制試劑盒各項(xiàng)性能均優(yōu)于用時間分辨熒光法及光激化學(xué)發(fā)光法研制的試劑盒。綜上所述，用化學(xué)發(fā)光法建立的游離β人絨毛膜促性腺激素定量測定試劑盒靈敏度高、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、線性范圍寬、特異性高，有望能替代昂貴的進(jìn)口試劑應(yīng)用于臨床檢測及研究。