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    唐山地區(qū)漢族人群特應性皮炎患者外周血IL-10基因多態(tài)性分析

    2018-09-26 03:14:36王生劉洋康康
    山東醫(yī)藥 2018年32期
    關(guān)鍵詞:等位基因單體多態(tài)性

    王生,劉洋,康康

    (1唐山市工人醫(yī)院,河北唐山063000;2開灤總醫(yī)院)

    特應性皮炎(AD)是一種慢性復發(fā)性皮膚炎癥,具有較強的遺傳性[1]。研究發(fā)現(xiàn),AD在同卵雙胞胎和異卵雙胞胎中的一致患病率分別為77%和15%,其發(fā)病可能與皮膚免疫失調(diào)相關(guān),T輔助細胞Th-1和Th-2細胞因子之間的失衡在AD的發(fā)病機制中具有重要作用[2]。近年來候選基因策略逐漸用于鑒定基因多態(tài)性與疾病發(fā)生風險的相關(guān)性,前期研究已證實細胞因子基因內(nèi)單核苷酸多態(tài)性(SNP)與AD發(fā)病密切相關(guān)[3]。IL-10具有抑制Th1和Th2細胞因子的作用,IL-10基因多態(tài)性與體外細胞因子產(chǎn)生的差異有關(guān),其多個多態(tài)性位點已被證實與癌癥、部分傳染病和炎癥(包括AD)具有一定的相關(guān)性[4]。但上述IL-10基因多態(tài)性的相關(guān)研究是在不同民族人群中進行的,其結(jié)果并不一致。本研究觀察了唐山地區(qū)漢族人群IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871位點的多態(tài)性,現(xiàn)分析IL-10基因多態(tài)性與AD發(fā)病風險的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選擇2016年6月~2017年6月唐山市工人醫(yī)院收治的唐山地區(qū)漢族AD患者300例作為觀察組,男150例、女150例,年齡(21.33±11.55)歲,病程(92.4±31.6)個月,嚴重程度(7.4±2.1)分。患者均為漢族,符合Hanifin[5]研究中的AD診斷標準,排除既往有皮膚病史、合并慢性疾病、嚴重代謝性疾病及內(nèi)分泌疾病患者。選擇同期體檢健康志愿者300例作為對照組,男150例、女150例,年齡(22.64±10.98)歲。受試者之間無直接親屬關(guān)系,本研究通過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準,患者或家屬均簽署知情同意書。

    1.2 IL-10基因5個SNP位點基因型檢測 采用Sequenom MassARRAY SNP 基因分型技術(shù)檢測外周血IL-10基因5個SNP位點(rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871)基因型。觀察組入院第2天、對照組體檢當天采集外周靜脈血5 mL,置于EDTA-K2抗凝管中,-70 ℃冰箱保存。采用全血DNA純化試劑盒(美國Thermo Fisher公司)進行DNA提取,操作步驟嚴格按照說明書進行。單堿基延伸引物委托上海生工生物工程股份有限公司進行設(shè)計和合成,反應在MassArray質(zhì)譜儀(美國Sequenom公司)中進行,基因分型使用Sequenom MassARRAY RS1000軟件。記錄IL-10基因5個相關(guān)SNP位點的染色體位置、基因型及等位基因頻率。

    1.3 3個遺傳模型下IL-10基因5個SNP位點與AD發(fā)病風險的相關(guān)性分析 通過無條件邏輯回歸模型,采用SNPstats在線統(tǒng)計軟件(https://www.snpstats.net/start.htm)計算在3個遺傳模型(顯性、隱性和加性)下IL-10基因5個SNP位點與AD發(fā)病風險的相關(guān)性。

    1.4 IL-10基因5個SNP位點單體型與AD風險的相關(guān)性分析 構(gòu)建IL-10基因5個SNP位點單體型,采用Haploview 4.2軟件評估位點間的連鎖不平衡情況,并進行單體型與AD風險的相關(guān)性分析。

    1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。驗證IL-10基因5個SNP位點是否符合哈德-溫伯格平衡,采用直接計數(shù)法統(tǒng)計各位點的等位基因及基因型頻數(shù),組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    IL-10基因5個SNP位點均符合哈德-溫伯格平衡(P-HWE> 0.05)。IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871位點染色體位置分別為206944233、206944645、206944952、206945311、206946634,等位基因分別為G/A、C/T、G/T、C/A、G/A。

    2.1 兩組IL-10基因5個SNP位點基因型占比比較 觀察組IL-10基因rs1554286位點AG、GG基因型(OR分別為1.98、3.27,95%CI分別為1.36~2.86、2.03~5.26),rs1518111位點CT、TT基因型(OR分別為2.04、2.64,95%CI分別為1.42~2.94、1.63~4.27),rs3024490位點AC、CC基因型(OR分別為2.05、2.44,95%CI分別為1.43~2.96、1.50~3.97),rs1800871位點AG、GG基因型(OR分別為1.83、2.37,95%CI分別為1.27~2.62、1.47~3.83)占比均高于對照組(P均<0.01);rs3021094位點GT、GG基因型(OR分別為0.49、0.13,95%CI分別為0.34~0.69、0.07~0.25)占比均低于對照組(P均<0.01)。兩組IL-10基因5個SNP位點基因型占比見表1。

    表1 兩組IL-10基因5個SNP位點基因型分布比較(例)

    注:與對照組相比,*P<0.01。

    2.2 IL-10基因5個SNP位點等位基因頻率比較 觀察組IL-10基因rs1554286位點等位基因G、rs1518111位點等位基因C、rs3024490位點等位基因C、rs1800871位點等位基因G頻率均高于對照組(rs1554286的OR=1.852,95 %CI:1.470~2.335;rs1518111的OR=1.689,95 %CI:1.339~2.131;rs3024490的OR=1.633,95 %CI:1.294~2.060;rs1800871的OR=1.593,95 %CI:1.263~2.009;P均<0.01)。IL-10基因rs3021094位點G等位基因頻率低于對照組(OR=0.397,95 %CI:0.309~0.510,P<0.01)。見表2。

    2.3 3個遺傳模型下IL-10基因5個SNP位點與AD風險的相關(guān)性 3個遺傳模型下IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3024490、rs1800871位點均與AD發(fā)病風險增加有關(guān)(P均<0.05);rs3021094位點均與AD發(fā)病風險降低有關(guān)(P均<0.05)。

    表2 兩組IL-10基因5個SNP位點最小等位基因頻率比較(例)

    注:與對照組相比,*P<0.01。

    表3 三個遺傳模型下IL-10基因5個SNP位點與AD風險的相關(guān)性

    2.4 IL-10基因5個SNP位點單體型與AD風險的相關(guān)性 IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871這5個位點具有強連鎖關(guān)系。ATGAA單體型與AD發(fā)病風險增加有關(guān)(OR=2.43,95%CI:1.83~3.23,P<0.01),GTTAA單體型與AD發(fā)病風險降低有關(guān)(OR=0.13,95%CI:0.04~0.44,P<0.01)。見表4。

    3 討論

    表4 IL-10基因候選SNP位點單體型與AD發(fā)病風險的相關(guān)性

    IL-10是一種抗炎細胞因子,由多種細胞分泌,包括調(diào)節(jié)性T細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞[6]。IL-10可下調(diào)抗微生物肽表達,導致AD患者細菌性皮膚感染發(fā)生率升高,其在IL-4和CD40的聯(lián)合刺激下可增強B細胞增殖和IgE合成[7]。研究發(fā)現(xiàn),AD患者外周血單個核細胞及損傷皮膚組織中IL-10表達升高,血清IL-10水平與AD病情呈負相關(guān)[8]。IL-10亦可通過與IL-4、IL-3結(jié)合而刺激肥大細胞生長[9]。研究顯示,IL-10基因幾個SNP位點與其血清水平和核結(jié)合活性差異有關(guān),某些單體型與IL-10、IgE產(chǎn)生和嗜酸性粒細胞計數(shù)增加有關(guān)[10]。而關(guān)于IL-10啟動子區(qū)域內(nèi)的幾個SNP與AD之間的關(guān)聯(lián)性文獻報道結(jié)論并不一致。Arkwright等[11]和Reich等[12]研究顯示,IL-10啟動子區(qū)SNP與AD發(fā)病沒有相關(guān)性。Sohn等[13]報道,AD的發(fā)生與IL-10啟動子-1082A、-819C、-592C之間存在相關(guān)性。Shin等[14]表明,IL-10遠端啟動子的單體型多態(tài)性(-1082A、-819C、-592C、+ 117T)與低IgE水平相關(guān)。Stavric等[15]和Kayserovaet等[16]研究顯示,AD發(fā)生與IL-10基因多態(tài)之間有關(guān)。

    本研究從NCBI和HapMap數(shù)據(jù)庫中查詢IL-10基因的SNP位點,選擇在中國北京漢族人群具有較高頻率(最小等位基因頻率≥5%)的位點,最終確定了rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871這5個位點。上述IL-10基因5個SNP位點已在多種疾病的關(guān)聯(lián)分析研究中被報道。Yoo等[17]研究顯示,IL-10基因rs1554286位點與韓國人群良性前列腺增生有關(guān)。Halstrom等[18]報道,IL-10基因rs1518111多態(tài)性對非結(jié)核性分枝桿菌疾病的易感性有顯著影響。有關(guān)IL-10基因rs3021094位點多態(tài)性的報道較多,其多態(tài)性與突眼性甲狀腺腫、結(jié)直腸癌和慢性肝炎等疾病的發(fā)生風險均具有相關(guān)性[19]。值得注意的是,Zidi等[20]報道突尼斯人群中IL-10基因rs3024490位點多態(tài)性與血清IL-10水平顯著相關(guān); IL-10基因rs3024490位點GG基因型攜帶者患強制性脊柱炎的風險是攜帶參考等位基因型TT者的3.03倍[21];IL-10基因rs1800871與乳腺癌、IgA腎病和非霍奇金淋巴瘤均具有相關(guān)性[22]。本研究結(jié)果顯示,IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3024490和rs1800871位點均與AD發(fā)病風險升高有關(guān),而rs3021094位點與AD發(fā)病風險降低有關(guān);由5個位點組成的ATGAA單體型與AD發(fā)病風險升高有關(guān),而GTTAA單體型與AD發(fā)病風險降低有關(guān)。

    綜上所述,唐山地區(qū)漢族人群AD發(fā)病風險可能與其外周血IL-10基因rs1554286、rs1518111、rs3021094、rs3024490、rs1800871這5個位點多態(tài)性有關(guān)。后續(xù)研究將收集更多其他地區(qū)和民族樣本,以驗證IL-10基因上述位點與AD風險的相關(guān)性是否具有地區(qū)及民族特異性。

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