直接藥敏與常規(guī)藥敏試驗(yàn)在臨床血液細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值分析

李素幸 李成富 黃尚寶 張海業(yè) 李彤

【摘要】 目的：觀察直接藥敏與常規(guī)藥敏試驗(yàn)在臨床血液細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選擇2015年1月-2017年12月至本院進(jìn)行血液培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性的患者546例進(jìn)行臨床研究。所有陽(yáng)性患者均分別給予直接藥敏檢查和常規(guī)藥敏檢查，觀察546例患者所檢測(cè)到的革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌的菌種，以常規(guī)藥敏檢查結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，觀察直接藥敏試驗(yàn)菌種檢測(cè)的符合率。比較兩種方法的藥敏結(jié)果與藥敏檢測(cè)所需時(shí)間。結(jié)果：對(duì)菌種的檢測(cè)，與常規(guī)藥敏試驗(yàn)相比，直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)總符合率為94.41%，革蘭陰性桿菌符合率為95.22%，革蘭陽(yáng)性球菌符合率為92.13%。符合率最高的為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，均為100%，最低的魯氏不動(dòng)桿菌為79.63%。兩種藥敏方法對(duì)革蘭陽(yáng)性菌與革蘭陰性菌進(jìn)行檢測(cè)后，所得結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。直接藥敏試驗(yàn)用時(shí)為12～24 h，平均（15.52±2.54）h，常規(guī)藥敏試驗(yàn)用時(shí)為48～72 h，平均（57.07±5.37）h，直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)用時(shí)明顯低于常規(guī)藥敏試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=153.719，P=0.000）。結(jié)論：直接藥敏與常規(guī)藥敏試驗(yàn)在臨床血液細(xì)菌檢驗(yàn)中均具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，常規(guī)藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確性高，但用時(shí)長(zhǎng)，直接藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確性略低于常規(guī)藥敏試驗(yàn)，但是明顯縮短了檢測(cè)用時(shí)。

【關(guān)鍵詞】 直接藥敏； 常規(guī)藥敏； 血液細(xì)菌檢測(cè)

【Abstract】 Objective：To observe the application value of direct drug sensitivity and conventional drug sensitivity test in clinical blood bacterial test.Method：A clinical study was conducted in 546 patients with positive Blood culture from January 2015 to December 2017 from to our hospital.All patients were given direct drug sensitivity test and routine drug sensitivity test respectively.The Gram-negative and Gram-positive bacteria strains detected in 546 patients were observed.The coincidence rate of the direct drug susceptibility test was observed with the results of routine drug sensitivity test as the standard.The drug sensitivity results of the two methods and the time needed for drug sensitivity test were compared.Result：For the detection of bacteria，compared with the routine drug sensitivity test，the overall coincidence rate of direct drug sensitivity test was 94.41%，the coincidence rate of Gram-negative bacilli was 95.22%，and the coincidence rate of Gram-positive cocci was 92.13%.The highest coincidence rate of Escherichia coli and klebsiella pneumoniae were 100%，the lowest was Acinetobacter lwoffi（79.63%）.Two kinds of drug sensitivity methods were used to detect Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria， and the results were not statistically different（P>0.05）.Direct drug sensitivity test for 12-24 h，the average time （15.52±2.54）h，conventional drug susceptibility testing time was 48-72 h，the average time was （57.07±5.37）h，direct drug sensitivity test with significantly lower than the conventional drug susceptibility test，and had a statistically significant difference（t=153.719，P=0.000）.Conclusion：The drug sensitivity and conventional drug susceptibility testing have an important clinical value in the clinical examination of bacteria in blood，routine drug susceptibility test with high accuracy，but in long time，the accuracy of direct drug sensitivity test is slightly lower than that of conventional drug susceptibility testing，but significantly shorten the detection time.

【Key words】 Direct drug sensitivity； Conventional drug sensitivity； Blood bacterial detection

First-authors address：Xinyi Peoples Hospital，Xinyi 525300，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.18.038

細(xì)菌感染是臨床常見(jiàn)的疾病，如果感染不能得到及時(shí)有效的控制，細(xì)菌進(jìn)入血液，可能會(huì)引起菌血癥、敗血癥等嚴(yán)重疾病，甚至導(dǎo)致死亡，因此對(duì)于細(xì)菌感染的患者，尋找有效的抗生素就成為治療的關(guān)鍵[1]。臨床常見(jiàn)的致病菌多種，每種細(xì)菌都有自身的特點(diǎn)，對(duì)不同的抗生素敏感度不同[2]。對(duì)于細(xì)菌感染的患者，藥敏試驗(yàn)是必需的檢查，但是既往常規(guī)的藥敏試驗(yàn)所需時(shí)間較長(zhǎng)，重癥患者無(wú)法等到藥敏結(jié)果，醫(yī)生只能根據(jù)常規(guī)經(jīng)驗(yàn)用藥，因此部分病情被延誤[3]。近年來(lái)直接藥敏的出現(xiàn)為解決這一問(wèn)題提供了有利條件。對(duì)2015年1月-2017年12月至本院進(jìn)行藥敏檢查的患者進(jìn)行了臨床研究，以便觀察直接藥敏與常規(guī)藥敏試驗(yàn)在臨床血液細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年1月-2017年12月至本院進(jìn)行血培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性的患者546例進(jìn)行臨床研究。其中男332例，女214例，年齡16～83歲，平均年齡（52.18±10.67）歲，所有患者以發(fā)熱等全身感染癥狀來(lái)診治療。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）血培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性；（2）細(xì)菌感染且出現(xiàn)全身癥狀；（3）對(duì)本次研究知情同意[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并病毒感染；（2）合并腫瘤、血液、免疫系統(tǒng)疾病；（3）局部感染但未累及全身；（4）藥敏檢查結(jié)果為陰性[5]。

1.2 方法 所有發(fā)熱患者均做血培養(yǎng)，培養(yǎng)陽(yáng)性者均做直接藥敏檢查和常規(guī)藥敏檢查。

1.2.1 常規(guī)藥敏試驗(yàn) 將采集到的血樣置于梅里埃公司生產(chǎn)的需氧和兼性厭氧微生物培養(yǎng)瓶中充分混勻后放置3D公司的血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)，培養(yǎng)到陽(yáng)性的血樣轉(zhuǎn)種到血平板、巧克力平板上，然后在35 ℃、5% CO2條件下孵育24 h，常規(guī)進(jìn)行革蘭染色，然后根據(jù)各種菌調(diào)節(jié)菌懸濁液，選擇合適的藥敏卡片進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，藥敏卡采用梅里埃公司的革蘭陽(yáng)性菌藥敏卡AST-GP67、AST-GPP68，革蘭陰性菌藥敏卡AST-GN13、AST-GN16、AST-GN09，應(yīng)用VITEK 2compact鑒定儀系統(tǒng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

1.2.2 直接藥敏試驗(yàn) 將采集到的血樣置于梅里埃公司生產(chǎn)的需氧和兼性厭氧微生物培養(yǎng)瓶中充分混勻后放置3D公司的血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)，培養(yǎng)到陽(yáng)性的血樣用無(wú)菌注射器抽取0.5 mL直接涂抹M-H平板（江門(mén)凱林貿(mào)易有限公司所生產(chǎn)），然后貼上相應(yīng)的藥敏紙片[賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司生產(chǎn)]，使用2012 NCCLS標(biāo)準(zhǔn)對(duì)細(xì)菌的敏感度及耐藥性進(jìn)行判定。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察546例患者所檢測(cè)到的革蘭陰性和革蘭陽(yáng)性菌的菌種，以常規(guī)藥敏檢查結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，觀察直接藥敏試驗(yàn)菌種檢測(cè)的符合率。比較兩種方法的藥敏結(jié)果，以及藥敏檢測(cè)所需時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 直接藥敏與常規(guī)藥敏試驗(yàn)符合率比較 對(duì)于菌種的檢測(cè)，與常規(guī)藥敏試驗(yàn)相比，直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)總體符合率為94.41%，革蘭陰性桿菌符合率為95.22%，革蘭陽(yáng)性球菌符合率為92.13%。符合率最高的為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，均為100%，最低的魯氏不動(dòng)桿菌為79.63%，見(jiàn)表1。

2.2 直接藥敏與常規(guī)藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較 兩種藥敏方法對(duì)革蘭陽(yáng)性菌與革蘭陰性菌進(jìn)行檢測(cè)后，所得結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

2.3 直接藥敏與常規(guī)藥敏試驗(yàn)時(shí)間比較 直接藥敏試驗(yàn)用時(shí)為12～24 h，平均（15.52±2.54）h，常規(guī)藥敏試驗(yàn)用時(shí)48～72 h，平均（57.07±5.37）h，直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)用時(shí)明顯低于常規(guī)藥敏試驗(yàn)（t=153.719，P=0.000）。

3 討論

致病菌或者條件致病菌侵入血液循環(huán)后，在血液中生長(zhǎng)繁殖，引發(fā)急性全身感染根據(jù)輕重程度被稱(chēng)為菌血癥、敗血癥和膿毒血癥[6-7]。如果入侵病菌不能及時(shí)控制，可能在其他臟器引發(fā)炎癥，甚至導(dǎo)致死亡。對(duì)于這種情況，需要大量抗生素進(jìn)行抗菌治療。但是隨著細(xì)菌耐藥性的增加，菌血癥、敗血癥等疾病的發(fā)病率逐年增加，而因此死亡的人數(shù)也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)[8-9]。大量研究已經(jīng)證明，如果使用抗菌藥后仍有存活細(xì)菌，此種細(xì)菌繁殖的后代就會(huì)有一定的耐藥性，對(duì)后續(xù)感染的治療造成嚴(yán)重影響[10-11]。如果此種細(xì)菌再次發(fā)生感染，則對(duì)引發(fā)耐藥性的抗生素敏感性會(huì)明顯降低，只有增加抗生素使用劑量，或者更換抗生素種類(lèi)。但是如果大劑量的抗生素使用后，細(xì)菌存活概率會(huì)超出原始菌株，因此增加了臨床治療的困難[12-13]。如果快速、準(zhǔn)確地對(duì)導(dǎo)致患者血液感染的細(xì)菌種類(lèi)和藥物敏感性進(jìn)行檢測(cè)就成為臨床研究的重點(diǎn)課題。

常規(guī)的藥敏試驗(yàn)是通過(guò)定性方法進(jìn)行測(cè)試，使用比濁儀測(cè)定菌懸液的濃度。VITEK 2 compact鑒定儀是一種使用光電技術(shù)、電腦技術(shù)和細(xì)菌八進(jìn)制數(shù)碼鑒定技術(shù)相結(jié)合的鑒定技術(shù)[14]，每個(gè)鑒定卡內(nèi)含有64項(xiàng)生化反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果獲得生物碼，在電腦控制下，讀數(shù)器每隔15 min讀卡一次，掃描各反應(yīng)孔底物情況，動(dòng)態(tài)觀察其反應(yīng)變化，直到試卡內(nèi)終點(diǎn)指示孔達(dá)到臨界值，完成檢測(cè)，然后根據(jù)最后一次判讀所得到的生物數(shù)碼與資料庫(kù)內(nèi)相比較，從而獲得最終鑒定結(jié)果[15-16]。這種藥敏試驗(yàn)方法通常準(zhǔn)確性較高，技術(shù)成熟，但是對(duì)試驗(yàn)條件有較高的要求，因此在臨床的應(yīng)用中有一定的局限，低等級(jí)醫(yī)院通常沒(méi)有條件開(kāi)展藥敏試驗(yàn)。此外，常規(guī)藥敏試驗(yàn)所需要時(shí)間較長(zhǎng)，一般需要2～3 d的時(shí)間進(jìn)行，在藥敏結(jié)果得到之前，醫(yī)生只能根據(jù)自己的經(jīng)驗(yàn)對(duì)患者用藥，如果使用的藥物恰恰是細(xì)菌敏感性差的藥物，則可能延誤治療，對(duì)患者的病情造成影響[17-18]。

直接藥敏試驗(yàn)是將培養(yǎng)瓶培養(yǎng)出的陽(yáng)性血液涂布于瓊脂表面，因?yàn)槠鋾r(shí)間短，因此也被稱(chēng)為快速藥敏試驗(yàn)[19-20]。這樣就明顯節(jié)省下了轉(zhuǎn)種再生長(zhǎng)菌落的時(shí)間。因此直接藥敏試驗(yàn)具有耗時(shí)短，節(jié)省耗材，簡(jiǎn)化操作步驟，降低試驗(yàn)環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)。

為了觀察直接藥敏試驗(yàn)的臨床應(yīng)用價(jià)值，對(duì)2015年1月-2017年12月至本院進(jìn)行藥敏檢查的患者進(jìn)行了臨床研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)于菌種的檢測(cè)，與常規(guī)藥敏試驗(yàn)相比較，直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)總體符合率為94.41%，革蘭陰性桿菌符合率為95.22%，革蘭陽(yáng)性球菌符合率為92.13%。符合率最高的為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，均為100%，最低的魯氏不動(dòng)桿菌為79.63%。說(shuō)明直接藥敏試驗(yàn)對(duì)患者血液感染中細(xì)菌菌種的鑒定具有較高的準(zhǔn)確性。兩種藥敏方法對(duì)革蘭陽(yáng)性菌與革蘭陰性菌進(jìn)行檢測(cè)后，所得結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明直接藥敏試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌藥物敏感性的判斷，雖然較常規(guī)的藥敏試驗(yàn)略低，但是無(wú)明顯差，說(shuō)明直接藥敏試驗(yàn)對(duì)于菌種的檢出和藥敏結(jié)果的檢測(cè)具有較高的敏感性，而且對(duì)于革蘭陰性桿菌和革蘭陽(yáng)性球菌，其細(xì)菌檢測(cè)情況和藥敏試驗(yàn)結(jié)果均與常規(guī)藥敏試驗(yàn)結(jié)果無(wú)明顯差異，說(shuō)明革蘭陰性菌與革蘭陽(yáng)性菌的直接藥敏結(jié)果均具有較高的可靠性。直接藥敏試驗(yàn)用時(shí)為12～24 h，平均（15.52±2.54）h，常規(guī)藥敏試驗(yàn)用時(shí)為48～72 h，平均（57.07±5.37）h，直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)用時(shí)明顯低于常規(guī)藥敏試驗(yàn)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=153.719，P=0.000）。說(shuō)明直接藥敏試驗(yàn)極大地節(jié)省了試驗(yàn)時(shí)間，這對(duì)于重癥感染患者的治療和搶救具有重要的意義。

綜上所述，直接藥敏與常規(guī)藥敏試驗(yàn)在臨床血液細(xì)菌檢驗(yàn)中均具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，常規(guī)藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確性高，但用時(shí)長(zhǎng)，對(duì)試驗(yàn)環(huán)境要求嚴(yán)格，而直接藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確性略低于常規(guī)藥敏試驗(yàn)，但明顯縮短了檢測(cè)用時(shí)，放寬了對(duì)試驗(yàn)環(huán)境的要求。因此在臨床應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況選擇藥敏方法，也可以在必要的時(shí)候?qū)煞N檢測(cè)方法綜合使用，從而在提高檢測(cè)速度的基礎(chǔ)上保證檢測(cè)的可靠性。

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