響應(yīng)面法優(yōu)化橄欖果渣羥基酪醇提取工藝

王 強(qiáng),黃梅桂,謝躍杰,3,趙富昌,任彥榮,3,王 波,任貴禮

(1.重慶第二師范學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院,重慶 400067; 2.南京林業(yè)大學(xué)輕工與食品學(xué)院,江蘇南京 210037; 3.重慶第二師范學(xué)院脂質(zhì)資源與兒童日化品協(xié)同創(chuàng)新中心,重慶 400067; 4.重慶江源油橄欖開發(fā)有限公司,重慶 404100; 5.甘肅出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心,甘肅蘭州 737100)

油橄欖(OleaeuropaeaL.)屬木犀科、木犀欖屬常綠喬木,是世界著名的木本油料樹種,有4000多年的栽培歷史。以油橄欖果實(shí)榨取的橄欖油富含不飽和脂肪酸、酚類物質(zhì)和脂溶性維生素等多種活性成分,具有多重保健功效[1-2]。近年來,橄欖的主要用途是生產(chǎn)初榨橄欖油,在橄欖油加工過程中,油橄欖鮮果經(jīng)磨漿、離心分離制取初榨橄欖油后,產(chǎn)生大量的果渣,果渣中含有果渣油、多酚和萜類化合物等多種活性成分[2],其中酚類物質(zhì)中的橄欖苦苷含量占25%,橄欖苦苷的性質(zhì)不穩(wěn)定,在酸、堿和酶的作用下易降解為羥基酪醇和欖香酸[3]。有研究報(bào)道，羥基酪醇具有抗氧化、抗炎、抗癌、抗血栓、抗菌、抗病毒等功能[4-7],尤其是其抗氧化活性高,被稱為是最具清除自由基能力的天然抗氧化劑之一,其對(duì)自由基清除率是槲皮素的2倍[8-9]。此外,大多數(shù)橄欖油生產(chǎn)企業(yè)將橄欖果渣直接丟棄或作堆肥及飼料,果渣中有效成分未充分開發(fā)與利用。橄欖果渣中有機(jī)物含量高,致使化學(xué)需氧量(COD)和生物需氧量(BOD5)較高[1],隨雨水或其他方式進(jìn)入土壤或湖水,影響水體或土壤的污染物承載能力,長(zhǎng)期堆放使得周圍蠅蟲飛舞、臭氣熏天,造成了資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。

目前,超聲輔助提取法與振蕩水浴法是最常用的兩種前處理提取方法[10],盡管有研究將兩種方法用于橄欖果渣中羥基酪醇的提取,但此前的研究對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取率無法達(dá)到滿意的效果。本文分別討論超聲輔助水解與振蕩水浴水解兩種提取工藝中的各因素對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇的提取效果,并進(jìn)行對(duì)比,得出較優(yōu)的提取工藝,進(jìn)而通過Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)進(jìn)行優(yōu)化,以期找到適合橄欖果渣中羥基酪醇的提取工藝,從而提高羥基酪醇的提取率,為橄欖果渣中有效成分的開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

油橄欖果渣 重慶江源油橄欖開發(fā)有限公司,羥基酪醇 純度>98%,中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心,北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司;乙腈、甲醇 色譜純,德國(guó)Merck公司;其余試劑 如無特殊說明均為分析純。

UPLC超高效液相色譜儀、二極管陣列檢測(cè)器(ACQUITY UPLC) 美國(guó)Waters公司;電子天平(±0.01 g) 常熟雙杰測(cè)試儀器廠;BL610分析天平(0.1 mg) 德國(guó)Sartorius公司;SIGMA-K615冷凍離心機(jī) 德國(guó)SIGMA公司;IKA MS3渦旋儀 德國(guó)IKA公司;Thermo Electron移液槍(100～1000、20～100 μL) 美國(guó)Thermo公司;DKZ-3恒溫水浴振蕩器 上海一恒科技有限公司;Elmasonic S 300 H超聲儀 德國(guó) Elma 公司;4001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國(guó)Heidolph公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱:BEH C18(50 mm×1.0 mm,1.7 μm);流動(dòng)相:A為0.1%(v/v)甲酸乙腈,B為0.1%(v/v)甲酸水;流速0.1 mL/min;進(jìn)樣量:2.0 μL;柱溫35 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm;梯度洗脫:流動(dòng)相A初始為5%,0.0～5.0 min流動(dòng)相A比例由5%變?yōu)?0%,5.0～8.0 min流動(dòng)相A由10%變?yōu)?0%,8.0～9.0 min流動(dòng)相A比例回到5%,平衡2.0 min。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 稱取羥基酪醇標(biāo)準(zhǔn)品適量,用0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液溶解并定容至100 mL,配制成含羥基酪醇為203.4 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,4 ℃下冷藏待用。標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別準(zhǔn)確移取10、5、2.5、0.63、0.16、0.063 mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液至10 mL容量瓶中,0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液準(zhǔn)確定容,配制成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作液,4 ℃下冷藏待用。

1.2.3 樣品處理

1.2.3.1 超聲波輔助鹽酸水解提取橄欖果渣中羥基酪醇 超聲波輔助鹽酸水解提取橄欖果渣中羥基酪醇參見李春燕等[10]的方法,并作一定修改:稱取1.0 g橄欖果渣放入50 mL聚乙烯管中,加入一定量的鹽酸溶液,置于適當(dāng)溫度的超聲裝置(超聲功率1400 w)中,超聲反應(yīng)一定時(shí)間后取出,用2 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性,并將水解液定容,經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜后,UPLC檢測(cè)。

1.2.3.2 振蕩水浴鹽酸水解提取橄欖果渣中羥基酪醇 稱取1.0 g橄欖果渣置于50 mL聚乙烯管中,加入一定量的鹽酸溶液,置于適當(dāng)溫度的水浴振蕩器中,振蕩頻率100 r/min,反應(yīng)一定時(shí)間后取出,用2 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性,并將水解液定容,經(jīng)過0.22 μm微孔濾膜后,UPLC檢測(cè)。

1.2.4 單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.4.1 超聲輔助鹽酸水解法 鹽酸濃度對(duì)羥基酪醇提取量的影響 設(shè)定料液比為1∶20 g/mL、提取溫度為40 ℃、超聲時(shí)間為30 min,考察鹽酸溶液濃度為0.02、0.05、0.2、0.5、1.0 mol/L時(shí),對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響。

超聲時(shí)間對(duì)羥基酪醇提取量的影響:設(shè)定料液比為1∶20 g/mL,提取溫度40 ℃,鹽酸溶液濃度為0.5 mol/L,考察超聲時(shí)間為15、30、45、60、80、100、120 min時(shí),對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響。

料液比對(duì)羥基酪醇提取量的影響:設(shè)定提取溫度為40 ℃,超聲時(shí)間為60 min,鹽酸濃度為0.5 mol/L,考察料液比為1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶30 g/mL時(shí),對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響。

提取溫度對(duì)羥基酪醇提取量的影響:設(shè)定超聲時(shí)間為60 min,鹽酸濃度為0.5 mol/L,料液比為1∶20 g/mL,考察提取溫度為40、60、80、90、100 ℃時(shí),對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響。

1.2.4.2 振蕩水浴鹽酸水解法 提取溫度對(duì)羥基酪醇提取量的影響 設(shè)定鹽酸溶液濃度為0.2 mol/L,料液比為1∶15 g/mL,水解時(shí)間30 min,考察提取溫度為40、60、80、90、100 ℃時(shí),對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響。

鹽酸濃度對(duì)羥基酪醇提取量的影響:設(shè)定料液比為1∶15 g/mL,水解時(shí)間30 min,提取溫度為90 ℃,考察鹽酸溶液濃度為0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mol/L時(shí),對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響。

料液比對(duì)羥基酪醇提取量的影響:設(shè)定水解時(shí)間為30 min,鹽酸溶液濃度為1.5 mol/L,提取溫度為90 ℃,考察料液比為1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60 g/mL時(shí),對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響。

水解時(shí)間對(duì)羥基酪醇提取量的影響:設(shè)定鹽酸溶液濃度為1.5 mol/L,提取溫度為90 ℃,料液比為1∶30 g/mL,考察水解時(shí)間為30、60、120、180、240 min時(shí),對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響。

1.2.5 對(duì)比試驗(yàn) 將上述2種酸解方式中單因素的最佳條件進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn),找出水解提取羥基酪醇含量最高的水解方法。

1.2.6 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上,選取最佳酸解方式,并且選取鹽酸濃度、料液比、提取溫度、水解時(shí)間作為影響因素,根據(jù)Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)為四因素三水平共29個(gè)點(diǎn),這些實(shí)驗(yàn)點(diǎn)分為兩類:一類是自變量取值在各水平所構(gòu)成的三維析因點(diǎn),共24個(gè);一類是區(qū)域的中心點(diǎn),零點(diǎn)實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次,用來估計(jì)實(shí)驗(yàn)誤差。響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的因素與水平見表1。

表1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素與水平Table 1 Experimental factors and levels of response surface

1.2.7 羥基酪醇提取量的計(jì)算 計(jì)算方法如下所示:

羥基酪醇提取量(mg/g)=提取液中羥基酪醇的質(zhì)量(mg)/稱取的橄欖果渣的質(zhì)量(g)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Design-Expert 8.0.6軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 線性范圍和最低檢出限 分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)工作液按“1.2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以峰面積Y為縱坐標(biāo),濃度X為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程:Y=5962.8X-18124,r=0.9991,結(jié)果表明羥基酪醇在1.28～203.40μg/g的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,能滿足對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的檢測(cè)要求。當(dāng)信噪比(S/N)為3和10時(shí),該方法的最低檢出限為0.22 μg/g,定量限為0.67 μg/g。

2.1.2 加標(biāo)回收率和精密度 在混勻的橄欖果渣樣品中添加高(50 μg/g)、中(25 μg/g)、低(5 μg/g)濃度的羥基酪醇標(biāo)準(zhǔn)溶液,渦旋2.0 min后靜置10 min,按“2.5.4”最佳優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件處理樣品,“1.2.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,以濃度值計(jì)算加標(biāo)回收率。每一添加濃度樣品重復(fù)測(cè)定6次來計(jì)算其精密度。結(jié)果顯示,加標(biāo)回收率在81.73%～104.09%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在3.7%～4.9%之間。

2.1.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取橄欖果渣樣品,按照“2.5.4”最佳優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件處理樣品,“1.2.1”所述色譜條件分析,在室溫條件下,分別經(jīng)0、4、12、24、48、72 h進(jìn)樣分析可知,橄欖果渣中羥基酪醇在12 h后開始降解,在48 h內(nèi)降解超過23.56%,故樣品處理完成后需在12 h內(nèi)進(jìn)行分析。

2.1.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取混勻的橄欖果渣樣品6份,按“2.5.4”最佳優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件處理樣品,“1.2.1”所述的色譜條件進(jìn)樣分析,通過計(jì)算提取的羥基酪醇含量及RSD,可以看出,6份同一橄欖果渣樣品中羥基酪醇提取量的RSD分別為1.94%和3.07%，表明方法重復(fù)性較好。

2.2 超聲輔助水解提取橄欖果渣中羥基酪醇單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 鹽酸濃度對(duì)羥基酪醇提取量的影響 不同鹽酸濃度對(duì)羥基酪醇提取量的影響結(jié)果見圖1A。由圖1A可知,羥基酪醇提取量隨著鹽酸濃度的增加而增加,當(dāng)鹽酸濃度達(dá)到0.5 mol/L時(shí),羥基酪醇提取量趨于平穩(wěn),說明此時(shí)橄欖果渣中的橄欖苦苷已水解完全[11],故試驗(yàn)選擇鹽酸濃度為0.5 mol/L。

2.2.2 超聲時(shí)間對(duì)羥基酪醇提取量的影響 不同超聲時(shí)間對(duì)羥基酪醇提取量的影響結(jié)果見圖1B。由圖1B可知,超聲時(shí)間為60 min時(shí),羥基酪醇提取量達(dá)到最高,超聲60 min后,其提取量有所下降,主要原因是，橄欖果渣在長(zhǎng)時(shí)間水解的過程中導(dǎo)致部分羥基酪醇被氧化[11],因此,試驗(yàn)選水解時(shí)間為60 min。

2.2.3 料液比對(duì)羥基酪醇提取量的影響 不同料液比對(duì)羥基酪醇提取量的影響結(jié)果見圖1C。由圖1C可知,羥基酪醇提取量隨著料液比的增加呈先上升后下降趨勢(shì),因?yàn)檫m當(dāng)?shù)牧弦罕瓤梢蕴岣吡u基酪醇的溶出率,料液比過小,溶劑量少，導(dǎo)致物料的黏度大,羥基酪醇的擴(kuò)散速度慢會(huì)阻止其的有效溶出,提取不完全,提取量較低,隨著料液比的增加,羥基酪醇提取量先呈上升趨勢(shì)，而當(dāng)料液比達(dá)到1∶20 g/mL時(shí),羥基酪醇提取量最高,幾乎所有的羥基酪醇已經(jīng)全部溶出,再增加溶劑的量會(huì)使這種擴(kuò)散平衡被打破,提取量下降?？紤]到提升羥基酪醇的提取量和盡量減少用水的情況下[3],選取料液比為1∶20 g/mL。

2.2.4 提取溫度對(duì)羥基酪醇提取量的影響 不同提取溫度對(duì)羥基酪醇提取量的影響結(jié)果見圖1D。從圖1D可知,提取溫度越高,羥基酪醇提取量越高,過低的提取溫度不利于最大限度地提取羥基酪醇[3]。但當(dāng)提取溫度達(dá)到80 ℃時(shí),羥基酪醇提取量基本趨于平穩(wěn),說明在此條件下就水解完全。因此選擇提取溫度為80 ℃。

圖1 鹽酸濃度、水解時(shí)間、料液比和提取溫度對(duì)羥基酪醇含量的影響Fig.1 Effect of hydrochloric acid concentration,time,solid-liquid ratio and temperature on the hydroxytyrosol extraction content

2.3 振蕩水浴提取橄欖果渣中羥基酪醇單因素實(shí)驗(yàn)

2.3.1 提取溫度對(duì)羥基酪醇提取量的影響 不同提取溫度對(duì)羥基酪醇提取量的影響結(jié)果見圖2A。由圖2A可知,提取溫度越高,羥基酪醇提取量越高,當(dāng)提取溫度達(dá)到90 ℃時(shí),羥基酪醇提取量基本趨于平穩(wěn),說明羥基酪醇在此條件下就可水解完全[3]。因此選擇提取溫度為90 ℃。

圖2 水解時(shí)間對(duì)羥基酪醇含量的影響Fig.2 Effect of hydrolysis temperature,hydrochloric acid concentration, solid-liquid ratio and time on the hydroxytyrosol extraction content

2.3.2 鹽酸濃度對(duì)羥基酪醇提取量的影響 不同鹽酸濃度對(duì)羥基酪醇提取量的影響結(jié)果見圖2B。從圖2B可以看出,羥基酪醇提取量隨著鹽酸濃度的增加而逐漸增大,當(dāng)濃度增加至1.5 mol/L時(shí),羥基酪醇提取量達(dá)到最高,隨著鹽酸濃度的進(jìn)一步增加,羥基酪醇提取量逐漸減少,說明此時(shí)橄欖果渣中的橄欖苦苷已水解完全[11],故試驗(yàn)選擇鹽酸濃度為1.5 mol/L。

2.3.3 料液比對(duì)羥基酪醇提取量的影響 不同料液比對(duì)羥基酪醇提取量的影響結(jié)果見圖2C。由圖2C可知,羥基酪醇提取量隨著料液比的增加先上升后下降再趨于平穩(wěn),當(dāng)料液比達(dá)到1∶30 g/mL時(shí),羥基酪醇提取量最高。因此,選擇料液比為1∶30 g/mL。

2.3.4 水解時(shí)間對(duì)羥基酪醇提取量的影響 不同水解時(shí)間對(duì)羥基酪醇提取量的影響結(jié)果見圖2D。由圖2D可知,羥基酪醇提取量在60 min時(shí)達(dá)到最高,60 min以后提取量有所下降,時(shí)間越長(zhǎng),導(dǎo)致橄欖苦苷分解,羥基酪醇提取量減少[12],因此,選擇水解時(shí)間為60 min。

2.4 超聲輔助水解與振蕩水浴水解提取橄欖果渣中羥基酪醇對(duì)比實(shí)驗(yàn)

針對(duì)2種水解工藝的單因素試驗(yàn),選取超聲輔助水解工藝參數(shù):鹽酸濃度為0.5 mol/L,超聲時(shí)間為60 min,提取溫度為80 ℃,料液比為1∶20 g/mL;振蕩水浴水解工藝參數(shù):提取溫度為90 ℃,鹽酸濃度為1.5 mol/L,料液比為1∶30 g/mL,水解時(shí)間為60 min,分別平行制備6份樣品,考察方法的重現(xiàn)性,結(jié)果顯示2種水解工藝重現(xiàn)性均較好,RSD均小于2%。其中,振蕩水浴水解工藝所得的羥基酪醇提取量為(1.51±0.23) mg/g,超聲輔助水解工藝所得的羥基酪醇提取量為(0.84±0.11) mg/g,可知,振蕩水浴水解工藝所得的羥基酪醇提取量約為超聲輔助水解工藝的2倍,基于此,試驗(yàn)擬采用響應(yīng)面法對(duì)振蕩水浴水解提取羥基酪醇工藝進(jìn)行優(yōu)化。

2.5 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

2.5.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 見表3。

表3 響應(yīng)面法試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 3 Experimental results and analysis of response surface method

2.5.2 響應(yīng)面曲面方差分析 運(yùn)用Design Expert 8.0.6軟件對(duì)表3數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,可得出四因素與羥基酪醇提取量之間的多元二次方程關(guān)系式:羥基酪醇提取量Y=3.00-0.034A-9.167E-003B+0.20C+0.17D-0.13AB+0.21AC-0.27AD-0.34BC-0.34BD-0.10CD-0.47A2-0.089B2-0.19C2-0.092D2。

由表4方差分析可知,本實(shí)驗(yàn)擬合的模型p<0.0001,表明響應(yīng)回歸模型極顯著,決定系數(shù)R2=0.9209,表明92.09%的數(shù)據(jù)可以用此方程來解釋,該模型與實(shí)際數(shù)據(jù)相關(guān)性較好;失擬項(xiàng)p=0.07987>0.05不顯著,說明回歸方程與實(shí)際擬合性好,因此,此擬合模型適用于對(duì)振蕩水浴鹽酸水解橄欖果渣中羥基酪醇的提取量進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。通過該模型的方差分析可知:料液比(C)、水解時(shí)間(D)對(duì)羥基酪醇提取量的影響差異均顯著(p<0.05),而提取溫度(A)、鹽酸濃度(B)對(duì)羥基酪醇提取量的影響差異不顯著(p>0.05)。這四個(gè)因素對(duì)橄欖果渣中羥基酪醇提取量的影響效應(yīng)大小依次為料液比(C)>水解時(shí)間(D)>提取溫度(B)>鹽酸濃度(A)。

表4 方差分析Table 4 Variance analysis

2.5.3 兩因素交互作用的響應(yīng)曲面分析 吸附率對(duì)應(yīng)于提取溫度、鹽酸濃度、料液比、水解時(shí)間所形成的三維空間曲面,可直接形象地反映各因素及其之間的交互作用對(duì)羥基酪醇提取量的影響。

運(yùn)用Design Expert 8.0.6軟件分析得到的響應(yīng)曲面如下圖3所示。由圖3可以看出,(b)、(d)、(e)呈現(xiàn)的是曲面較陡峭的曲線,說明提取溫度與料液比、溫度與水解時(shí)間、鹽酸濃度與料液比、鹽酸濃度與水解時(shí)間的交互作用對(duì)羥基酪醇提取量的影響較大,而溫度與鹽酸濃度、料液比與水解時(shí)間的交互作用曲面更平緩,說明它們的交互作用對(duì)羥基酪醇提取量的影響較小,這與上表中的交互作用結(jié)果的趨勢(shì)也是一致的。

圖3 兩因素交互影響吸附率響應(yīng)曲面圖Fig.3 Response surface plot

2.5.4 回歸方程及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 借助Design Expert 8.0.6軟件中多元二次回歸模型對(duì)羥基酪醇提取量進(jìn)行估算,對(duì)二次函數(shù)模型進(jìn)行極值分析,預(yù)測(cè)四因素的最佳組合為:提取溫度(A)87.8 ℃、鹽酸濃度(B)1.14 mol/L、料液比(C)1∶35.8 g/mL、水解時(shí)間(D)86.4 min,此時(shí)模型預(yù)測(cè)羥基酪醇提取量極大值為3.39 mg/g?？紤]到實(shí)際操作的便利,在預(yù)測(cè)的最佳優(yōu)化條件的基礎(chǔ)上將工藝參數(shù)修正為提取溫度88 ℃、鹽酸濃度1.2 mol/L、料液比1∶36 g/mL、水解時(shí)間86 min,并驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),平行制備6份樣品進(jìn)行測(cè)定,實(shí)測(cè)羥基酪醇提取量為(3.38±0.12) mg/g,與預(yù)測(cè)值無明顯差異。

3 結(jié)論

本研究建立了分離檢測(cè)橄欖果渣中羥基酪醇的超高效液相色譜方法,其在1.28～203.40 μg/g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,方法的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、精密度均達(dá)到要求。同時(shí),分別討論了超聲輔助酸解與振蕩水浴鹽酸酸解提取橄欖果渣中羥基酪醇的單因素條件,再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)比,發(fā)現(xiàn)振蕩水浴鹽酸水解工藝所得羥基酪醇的提取量約為超聲輔助水解工藝的2倍。在振蕩水浴水解單因素的基礎(chǔ)上,對(duì)其工藝條件進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化,最終確定最優(yōu)的水解工藝條件為提取溫度88 ℃、鹽酸濃度1.2 mol/L、料液比1∶36 g/mL、水解時(shí)間86 min,優(yōu)化工藝后得到橄欖果渣中羥基酪醇的提取量為(3.38±0.12) mg/g。通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)說明所建立的模型可以很好的應(yīng)用于實(shí)踐,為橄欖果渣中羥基酪醇的提取開發(fā)利用提供可靠的技術(shù)支持。