四君子湯對(duì)急性放射性腸炎大鼠腸道功能、 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)的影響

張琨，康純嘉

(1.河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州 451191；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000)

放射性腸炎是盆腔、腹腔或腹膜后惡性腫瘤放療后的主要并發(fā)癥，為非特異性炎癥，表現(xiàn)為腹痛、膿液膿血便、腹瀉等，病變累及小腸、結(jié)腸、直腸黏膜及黏膜下層，迄今為止其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明[1-2]。隨著生活方式及飲食結(jié)構(gòu)改變，西醫(yī)臨床主要采用手術(shù)、營養(yǎng)支持療法及對(duì)癥處理，療效均不佳[3-4]。急性放射性腸炎大鼠模型為該病的防治和發(fā)病機(jī)制研究提供了重要參考，該動(dòng)物模型可以很好的模擬免疫功能失衡的放射性腸炎，但在腸道無菌環(huán)境下不發(fā)生腸道炎性反應(yīng)[5]。放射性腸炎屬中醫(yī)“痢疾”“便血”等范疇，氣機(jī)不暢、氣血瘀滯以及濕熱內(nèi)蘊(yùn)為其發(fā)病機(jī)制，四君子湯為益氣健脾的經(jīng)典方劑，對(duì)放射性腸炎具有較好的療效，但其作用機(jī)制尚不明確[6-7]。本研究采用X線直線加速器全腹照射建立急性放射性腸炎大鼠模型，探討四君子湯對(duì)小腸功能、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1 動(dòng)物與試藥

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

30只健康清潔級(jí)SD大鼠，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供(SCXK(京)2011-0011)，雌雄各半，體質(zhì)量(250±20)g。自然光線，以標(biāo)準(zhǔn)飼料和無菌蒸餾水喂養(yǎng)。

1.1.2 試藥

水合氯醛(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；HE染色液(Sigma公司)；血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33試劑盒(南京建成生物科技有限公司)。四君子湯藥物組成：人參10 g、白術(shù)9 g、茯苓6 g、甘草6 g，藥材均為本院中藥房提供，并制成1 g/mL的濃縮液。

1.1.3 儀器

Primus直線加速器(西門子)；NI500顯微鏡(日本尼康公司)；RM2125切片機(jī)和TPIIZO全自動(dòng)封閉式組織脫水機(jī)(德國徠卡公司)；Y6-6LF生物組織包埋機(jī)(湖北亞光易用電子技術(shù)有限公司)；Biotek aQuant型酶標(biāo)儀(上海坤肯生物化工有限公司)。

1.2 動(dòng)物模型及分組

20只健康SD大鼠分籠飼養(yǎng)，自然光照，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)，水合氯醛麻醉后，X線直線加速器全腹照射(DT9.0Gy)建立急性放射性腸炎大鼠模型[8-9],隨機(jī)分為模型組和試驗(yàn)組。試驗(yàn)組給予四君子湯灌胃，4.5 ml/kg，每天1次，模型組給予生理鹽水灌胃，4.5 ml/kg，每天1次。另取10只清潔級(jí)SD大鼠0.25 ml生理鹽水灌腸，同時(shí)生理鹽水灌胃，4.5 ml/kg，每天1次，為對(duì)照組。分別灌胃14天，14天后處死大鼠進(jìn)行觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、飲食進(jìn)水、排便情況、體質(zhì)量等一般情況，精神狀態(tài)、飲食進(jìn)水、排便情況分為好、較好、一般、較差、很差，分別為0分、1分、2分、3分和4分，評(píng)分越高，一般情況越差[10]。處死后各組大鼠，剖取大鼠小腸組織組織，洗凈內(nèi)容物，濾紙吸取多余水分，生理鹽水清洗后，10%甲醛固定液固定48 h后，二甲苯脫脂，酒精脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，觀察各組大鼠的結(jié)腸組織病理。眼球取血，3 000 r/min離心15 min，分離血清后-80℃保存。采用ELISA法檢測(cè)血清血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)水平，嚴(yán)格按照說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況比較

模型組大鼠的精神狀態(tài)、飲食進(jìn)水、排便情況評(píng)分高于對(duì)照組，而試驗(yàn)組大鼠的精神狀態(tài)、飲食進(jìn)水、排便情況低于模型組，但高于對(duì)照組，模型組大鼠的體質(zhì)量低于對(duì)照組，試驗(yàn)組高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠一般情況比較(分，

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05

2.2 小腸組織病理學(xué)比較

對(duì)照組大鼠小腸黏膜完整，各層結(jié)構(gòu)清晰，未見充血水腫;模型組大鼠小腸絨毛稀疏，高度降低，炎性細(xì)胞浸潤明顯，部分上皮細(xì)胞脫落，腺體變形萎縮;試驗(yàn)組大鼠小腸絨毛均較完整，未見明顯潰瘍和炎性滲出物，絨毛高度和隱窩深度較大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見圖1。

圖1 各組大鼠結(jié)腸黏膜組織病理改變比較(HE染色，200×)

2.3 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)比較

試驗(yàn)組大鼠的血清血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)顯著低于模型組，且高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠血清血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和 白介素-33表達(dá)比較

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05

3 討論

放射性腸炎嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，但目前臨床療效欠佳[11-12]。放射性腸炎易引起患者的氧化應(yīng)激，炎癥介質(zhì)刺激腸黏膜，加重疾病，血管活性物質(zhì)可調(diào)節(jié)腸道平滑肌的舒張，促進(jìn)胃腸道腺體分泌，抑制腸道蠕動(dòng)，與放射性腸炎病情密切相關(guān)。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子維持血管正常狀態(tài)和完整性，提高血管通透性，促進(jìn)血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞增殖，在組織修復(fù)、血管再生方面具有重要作用[13]。白介素-33是近年來新發(fā)現(xiàn)的白介素家族的新成員，表達(dá)于多種類型細(xì)胞，如炎性細(xì)胞、上皮細(xì)胞和間葉細(xì)胞，可作為機(jī)體炎性反應(yīng)和組織破壞的信號(hào)分子，高表達(dá)可促進(jìn)炎癥反應(yīng)，與腸炎疾病具有密切關(guān)系[14]。腸道細(xì)菌在放射性腸炎的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，參與放射性腸炎致病的始動(dòng)和持續(xù)因素，急性放射性腸炎在腸道無菌環(huán)境下不發(fā)生腸道炎性反應(yīng)，但在恢復(fù)正常腸道菌群狀態(tài)時(shí)則出現(xiàn)腸道炎性反應(yīng)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，放射性腸炎主要病機(jī)是脾氣虧虛，濕熱余邪內(nèi)蘊(yùn)，瘀血阻滯腸絡(luò)，濕熱蘊(yùn)久影響脾胃運(yùn)化功能，脾失健運(yùn)，正氣難復(fù)，遂出現(xiàn)血瘀，致使本病纏綿難愈[7,15]。本研究旨在探討四君子湯對(duì)急性放射性腸炎大鼠腸道功能、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)的影響，更好指導(dǎo)臨床治療。

本研究發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組大鼠的精神狀態(tài)、飲食進(jìn)水、排便情況、體質(zhì)量等一般情況與模型組比較均有所改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明四君子湯可保護(hù)急性放射性腸炎大鼠腸道功能。與四君子湯能夠調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡，促進(jìn)受損腸上皮細(xì)胞的再生和重建，修復(fù)腸黏膜屏障有關(guān)。與模型組比較,試驗(yàn)組大鼠小腸絨毛均較完整，未見明顯潰瘍和炎性滲出物，絨毛高度和隱窩深度較大,說明四君子湯對(duì)急性放射性腸炎大鼠具有較好的治療作用。

四君子湯方中人參補(bǔ)中益氣為君藥，白術(shù)健脾燥濕為臣藥，茯苓健脾滲濕為佐藥，甘草和中緩急，調(diào)和諸藥為使藥，四藥合用，可共奏健脾益氣之功[16]。四君子湯可針對(duì)放射性腸炎氣機(jī)郁滯，瘀血內(nèi)阻病因病機(jī)，標(biāo)本兼治。試驗(yàn)組大鼠的血清血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)顯著低于模型組，且高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明四君子湯可降低急性放射性腸炎大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)水平。這與四君子湯抑制結(jié)腸γ-氨基丁酸受體的表達(dá)，改善上皮細(xì)胞修復(fù)，抗氧自由基損傷及改變白細(xì)胞介素水平，腸黏膜受損屏障和精密鏈接蛋白，改善腸黏膜滲透性，控制腸炎炎性反應(yīng)等有關(guān)[17-18]。

綜上所述，急性放射性腸炎大鼠精神狀態(tài)、飲食進(jìn)水、排便情況、體質(zhì)量較差，小腸受損，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)水平升高，四君子湯可保護(hù)急性放射性腸炎大鼠小腸功能，降低血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和白介素-33表達(dá)水平。