云南10種花的抗腫瘤活性研究

倪廣惠 趙正波 陳左麗

【摘 要】 目的：探索云南花朵的抗腫瘤活性。方法：花朵烘干后磨成粉末，用乙醇提取后濃縮得花朵提取物。將體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞分成對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。用MTS法測(cè)試花朵提取物對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用。將有對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖有較好抑制作用的花朵提取物進(jìn)一步進(jìn)行腫瘤活性測(cè)試。將該花朵提取物分為不同濃度，測(cè)試其對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的抑制活性。結(jié)果：在采集來的10種花朵中，蔥蓮對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞具有較好的抑制活性，抑制率（43.07±4.52%）與陽(yáng)性對(duì)照藥物（47.62±3.24%）接近。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，蔥蓮對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞均有抑制活性，并且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論：蔥蓮花朵提取物具有較好的抗腫瘤應(yīng)用前景。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌；肺癌；花提取物；體外抑制；蔥蓮

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）09-0024-03

Abstract： ObjectiveTo investigate the effects of ten flowers in Yunnan province on cancer cells. Methods Flowers were dried， pulverized and extracted with ethanol. The cancer cell proliferation inhibition of the extracts of flowers was tested by MTS assays. Human cancer cells were cultured in vitro and divided into control and test groups. Every group was set 6 wells. The positive control group was treated with 5mg/L of arsenic trioxide. The negative control group was treated 1‰ of DMSO. Test groups were treated with 20 mg/L of the extracts of flowers. The extract which showed excellent inhibition of breast cancer MDA-MB-23 cells proliferation was further tested several concentrations on breast cancer MDA-MB-23 cells and lung cancer A549 cells. Results Extract of Zephyranthes candida（Lindl.）Herb showed excellent inhibition of breast cancer MDA-MB-23 cells proliferation the concentration of 20 mg/L. The inhibition rate （43.07±4.52%）was appreciated to that of the positive control group（47.62±3.24%）. The further investigation shows that the extract inhibited cell proliferation of breast cancer MDA-MB-23 cells and lung cancer A549 cells in a dose-dependent manner. Conclusion The extract of Zephyranthes candida（Lindl.）Herb showed an excellent profile in anti-tumor.

Keywords：Breast cancer； Lung cancer； Extract of flowers； Inhition in vitro；Zephyranthes candida（Lindl.）Herb.

在《本草綱目》中，花類藥物至少在80種以上，約占植物類藥物的1/10以上[1]?；愘|(zhì)地輕靈[2]，花類藥物藥性較為平和，副作用小，是各名家的常用藥物[3-11]，在婦科疾病中應(yīng)用甚廣。惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康和生命的疾病，抗腫瘤藥物長(zhǎng)春花堿由夾竹桃科植物長(zhǎng)春花中提取而來。云南鮮花四季盛開，花朵品質(zhì)高、產(chǎn)量大[12]。筆者對(duì)云南常見的花朵進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，為進(jìn)一步開發(fā)利用“云花”、“云藥”提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、試劑和儀器 乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所。所有花朵采集自云南中醫(yī)學(xué)院呈貢校區(qū)和昆明醫(yī)科大學(xué)呈貢校區(qū)。乙醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠），三氧化二砷（云南文山金馳砒霜有限公司）。RPMI1640培養(yǎng)液（美國(guó)Hyclone公司）；胎牛血清（蘭州百靈生物技術(shù)有限公司）；MTS一步法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Promega公司）。電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；SK3300LH 型超聲清洗機(jī)（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo公司）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備 采集茼蒿菊、桂花、鳳仙、蜀葵、牽牛、蔥蓮、百日菊、葉子花、大麗花、杜鵑等云南常見的花朵。50℃烘干，干燥花朵粉碎后浸泡在10倍量的90%乙醇溶液中過夜，過濾后，將濾渣超聲提取，重復(fù)提取兩次，濾液合并后濃縮，得到樣品。

1.2.2 活性測(cè)試 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞接種于96孔板，每孔1×103個(gè)細(xì)胞。置CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育24 h后加入樣品。試驗(yàn)組用DMSO溶解，96孔板中DMSO的濃度為千分之一；陰性對(duì)照組加入含百分之一DMSO的培養(yǎng)液10 μL，DMSO終濃度為千分之一；陽(yáng)性對(duì)照組加入5 μL五十分之一DMSO的培養(yǎng)液與5 μL三氧化二砷溶液，三氧化二砷溶液終濃度為0.5 mg/L；每組設(shè)6復(fù)孔，每個(gè)實(shí)驗(yàn)分別重復(fù)3次。放入37℃ CO2培養(yǎng)箱中。48 h后加入20 μL MTS溶液，37℃ CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2 h，用全自動(dòng)酶標(biāo)儀在490nm測(cè)定吸光度（A）。在測(cè)試十種花對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用的過程中，試驗(yàn)組花朵提取物的濃度均為20 mg/L。進(jìn)一步測(cè)試蔥蓮花對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的抑制作用時(shí)，試驗(yàn)組蔥蓮提取物的濃度為20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L。

2 結(jié)果

2.1 10種花對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用 采集了云南常見的10種花朵，分別為茼蒿菊、桂花、鳳仙、蜀葵、牽牛、蔥蓮、百日菊、葉子花、大麗花、杜鵑等。將這10種花朵的提取物作為試驗(yàn)組，測(cè)試其對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制活性（圖1）。其中，蔥蓮的抑制率（43.07±4.52%）與陽(yáng)性對(duì)照的抑制率（47.62±3.24%）相近。

2.2 蔥蓮對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的抑制作用 為了進(jìn)一步探索蔥蓮的抗腫瘤活性，考察了蔥蓮提取物對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用（圖2）。試驗(yàn)結(jié)果顯示，蔥蓮提取物的濃度為20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制率分別為（43.06±1.59）%、（30.20±3.93）%、（2.29±2.12）%；對(duì)肺癌A549細(xì)胞的抑制率分別為（56.96±0.48）%、（13.85±1.52）%、（0.36±2.71）%；增殖抑制作用呈現(xiàn)量效關(guān)系。

3 討論

藥物是治療惡性腫瘤的重要方法之一，抗腫瘤藥物的研究與開發(fā)已進(jìn)入一個(gè)嶄新的時(shí)代[13]。目前應(yīng)用的很多抗腫瘤藥物的副作用較大，而花類藥物藥性較為平和[2]，從花中可能篩選到副作用較小的抗腫瘤藥物。筆者采集了云南常見的10種花朵，將其提取物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選。大部分花朵對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的增殖無抑制作用，而令人欣喜的是其中蔥蓮花的提取物對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制活性較好，與陽(yáng)性對(duì)照三氧化二砷抑制率相當(dāng)，并且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。

蔥蓮（Zephyranthes candida （Lindl.）Herb.），又名玉簾、蔥蘭等，多年生草本植物，在云南各處有種植。有平肝熄風(fēng)、散熱解毒的功能；用于小兒急驚風(fēng)、癲癇；外用于癰瘡紅腫[14]。楊簡(jiǎn)賽等從蔥蓮鱗莖中分離得到6個(gè)化合物[15]，Zengwei Luo等[16]從蔥蓮整株植物中提取分離到具有抗腫瘤活性的生物堿，尚無對(duì)蔥蓮的花朵進(jìn)行化學(xué)成分及藥理活性的相關(guān)報(bào)道。筆者對(duì)蔥蓮花朵進(jìn)行抗腫瘤活性測(cè)試，提取物濃度為4 mg/L即顯示出顯著的抗腫瘤活性，并有劑量效應(yīng)關(guān)系。為蔥蓮在抗腫瘤藥物的開發(fā)提供了依據(jù)。

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（收稿日期：2018-03-29 編輯：陶希睿）