祖師麻凝膠膏劑皮膚刺激和過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)研究

蔡香菊 馬駿 馬蘭 王志曉 劉旭霞 沈薇 石曉峰

【摘 要】 目的：觀察祖師麻凝膠膏劑對(duì)皮膚的刺激性和過(guò)敏性反應(yīng)。方法：皮膚刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)選用新西蘭白家兔，分完整皮膚組和破損皮膚組，兩組均分別在同一家兔的左右脊柱兩側(cè)分別貼敷基質(zhì)和祖師麻凝膠膏劑，連續(xù)給藥7d，對(duì)家兔皮膚評(píng)分并觀察恢復(fù)情況。皮膚過(guò)敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)采用豚鼠主動(dòng)皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)，分為2，4-二硝基氯苯組、受試藥物祖師麻凝膠膏劑組、基質(zhì)對(duì)照組，于第0、7、14 天右側(cè)脫毛皮膚給藥致敏，第 28 天左側(cè)脫毛皮膚給藥激發(fā)，觀察是否引起皮膚過(guò)敏或全身性過(guò)敏反應(yīng)。結(jié)果：祖師麻凝膠膏劑對(duì)家兔完整皮膚無(wú)紅斑、水腫反應(yīng)，無(wú)刺激性；對(duì)破損皮膚有輕度刺激性。豚鼠皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)未出現(xiàn)皮膚明顯紅斑、水腫等過(guò)敏反應(yīng)。結(jié)論：祖師麻凝膠膏劑有較好的安全性。

【關(guān)鍵詞】 祖師麻凝膠膏劑；多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)；皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R-332 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2018）02-0052-04

Abstract：Objective To observe the skinirritation and allergic reactions of Zushima Gel Cream. Methods The skin irritation test was performed in New Zealand white rabbits， all animals weredivided into intact skin group and damaged skin group， and distilled water or Zushima Gel Cream were applied to the two groups on the two sides of shaved rabbits back skin respectively for 7days. Skin irritation actionswere observed and scored. Skin allergic reactions were performed on guinea pigs with active skin hypersensitivity test ， guinea pigs were divided into 2，4-dinitrochlorobenzene group， tested drug Zushima Gel Cream group， matrix group. Skin sensitization was performed on the right side of the skin at 0， 7， 14th day，on the 28th day， the left side of the hair removal skin to stimulate. Observe whether it causes skin allergies or systemic allergies. Results Zushima Gel Creamdid not induce any dermal irritation to complete skin of New Zealand white rabbits，without skin full of erythema，edema， no irritation； Have a slight irritation to damaged skin. Guinea pig skin allergic test did not appear obvious skin erythema， edema and other allergic reactions. Conclusion External use of Zushima Gel Cream on the animal skin is safe.

Keywords：Zushima Gel Cream； Multiple Skin Irritation Test； Skin Allergic Test

祖師麻味辛、苦，性溫，具有祛風(fēng)除濕、活血止痛、舒筋活絡(luò)、消腫等功效，主治風(fēng)濕痹痛、四肢麻木、腰痛、跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛等癥。目前，臨床上應(yīng)用的含有祖師麻的外用制劑為祖師麻膏藥、祖師麻風(fēng)濕膏和祖師麻關(guān)節(jié)止痛膏，前兩者為傳統(tǒng)黑膏藥，后者為橡膠膏劑，這些膏劑由于具有載藥量較?。?.2%～2.0%）、生物利用度低、對(duì)皮膚有刺激性、使用需要溫?zé)彳浕N敷于皮膚上不易揭去等缺點(diǎn)[1]，使其應(yīng)用受到限制；而凝膠膏劑的載藥量大，一般為5%～10% ，最大可達(dá)20%[2]，基質(zhì)中透皮吸收促進(jìn)劑、保濕劑、高分子親水基質(zhì)以及交聯(lián)調(diào)節(jié)劑的使用，使其透皮吸收更好、生物利用度高，且對(duì)皮膚刺激小，可反復(fù)貼敷[3]，用于皮膚表面涂展性好，無(wú)油膩感，不污染衣物。因此，甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院將以前的祖師麻膏劑通過(guò)劑型改變，選用合適的基質(zhì)，自主研發(fā)制成了祖師麻凝膠膏劑，為使其安全進(jìn)入臨床觀察，進(jìn)行醫(yī)院制劑的申報(bào)，同時(shí)也為臨床使用提供可靠的科學(xué)依據(jù)，實(shí)驗(yàn)根據(jù)外用藥皮膚實(shí)驗(yàn)的要求，進(jìn)行了皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)和過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 祖師麻凝膠膏劑及基質(zhì)，由甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院提供；2，4-二硝基氯苯（批號(hào)：789204，天津市化學(xué)試劑一廠。使用時(shí)用丙酮配制成 1% 致敏濃度，0.1% 激發(fā)濃度）；硫化鈉（批號(hào)：120311，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；生石灰（批號(hào)：120916，上海中秦化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年新西蘭白家兔16只，雌雄各半，體重2.0～2.5 kg，合格證號(hào)：62000600000160，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（甘） 2015-0001。健康白色豚鼠，18只，雌雄各半，體重 300～400 g，合格證號(hào)：62000600000159，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK （甘） 2015-0001。均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)提供。

1.3 方法

1.3.1 祖師麻凝膠膏劑的家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 取16只家兔，給藥24 h前先將背部脊柱左右兩側(cè)用剪毛剪剪出面積為3 cm×3 cm的區(qū)域，再用脫毛劑（硫化鈉20g+生石灰30 g，用40%乙醇配成200 ml的溶液[4]）將該區(qū)域脫毛，毛發(fā)軟化之后用40℃溫水洗去，再用紙巾擦干脫毛處皮膚即可，24 h后檢查脫毛皮膚是否受傷，受傷的皮膚不能作完整皮膚的刺激性實(shí)驗(yàn)。將16只已脫毛家兔，隨機(jī)分為兩組，完整皮膚組和破損皮膚組各8只，破損皮膚組兩側(cè)脫毛皮膚用細(xì)砂紙摩擦造成局部擦傷，以擦傷表皮、不傷真皮、輕度滲血為度，兩側(cè)皮膚的破損程度應(yīng)基本一致。將祖師麻凝膠膏劑和基質(zhì)剪成3 cm×3 cm的小方塊，兩組給藥均為左邊基質(zhì)、右邊藥物，將藥物和基質(zhì)貼上之后用醫(yī)用膠布和紗布纏繞固定，保持藥物與皮膚接觸4 h后去除醫(yī)用膠布和紗布，揭去藥物和基質(zhì)，然后以溫水洗去殘留藥物，分別在0 h、24 h后觀察皮膚刺激性情況。每天給藥1次，連續(xù)7 d。末次給藥后，觀察去除藥物后0 h、24 h、48h、72h用藥部位的紅斑和水腫情況，進(jìn)行皮膚刺激實(shí)驗(yàn)反應(yīng)評(píng)分和刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)[5-7]。

1.3.2 祖師麻凝膠膏劑的豚鼠皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn) 將18只豚鼠在給藥24 h前背部右側(cè)脫毛，脫毛方法同上，隨機(jī)分為3組，第一組為陽(yáng)性對(duì)照2，4-二硝基氯苯組，第二組為受試藥物祖師麻凝膠膏劑組，第三組為基質(zhì)對(duì)照組，每組6只。將1%的2，4-二硝基氯苯（用丙酮配制）0.2 mL滴加于3 cm×3 cm的濾紙上，濾紙貼于第一組右側(cè)脫毛區(qū)，用1層玻璃紙和2層紗布覆蓋，膠布與紗布固定；將祖師麻凝膠膏劑和基質(zhì)剪成3 cm×3 cm的小方塊，分別貼敷于第二組和第三組動(dòng)物的右側(cè)脫毛區(qū)，用醫(yī)用膠布和紗布纏繞固定。給藥后動(dòng)物單籠飼養(yǎng)，保持藥物與皮膚接觸6 h后去除醫(yī)用膠布和紗布，揭去濾紙、藥物和基質(zhì)，然后以溫水洗去殘留藥物，分別在0 h、24 h后觀察皮膚過(guò)敏性情況并評(píng)分。第7天和第14天用同樣方式各重復(fù)給藥1次并觀察。第28天激發(fā)給藥，用上述同樣方法將相應(yīng)藥物分別貼在各組動(dòng)物背部的左側(cè)脫毛區(qū)，其中陽(yáng)性對(duì)照組濃度改用0.1% 2，4-二硝基氯苯激發(fā)，基質(zhì)對(duì)照組和受試藥物祖師麻凝膠膏劑組同前，包裹固定6 h后去除藥物即刻觀察，并于24 h、48 h及72 h再次觀察皮膚過(guò)敏反應(yīng)情況并作評(píng)分[7-8]，同時(shí)密切觀察動(dòng)物是否出現(xiàn)有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身性過(guò)敏反應(yīng)。

1.4 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[6]，按表 1、表 2 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分并判斷刺激強(qiáng)度。根據(jù)中藥、天然藥物免疫毒性（過(guò)敏性、光過(guò)敏反應(yīng)）研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[8]，按表3、4 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分，按皮膚過(guò)敏反應(yīng)程度評(píng)價(jià)各組豚鼠皮膚過(guò)敏反應(yīng)分值。

2 結(jié)果

2.1 家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 祖師麻凝膠膏劑及其基質(zhì)對(duì)破損及完整皮膚連續(xù)用藥7天，按照評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)記錄出現(xiàn)紅斑和水腫分值，并進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。皮膚刺激實(shí)驗(yàn)反應(yīng)平均值=（紅斑形成總分+水腫形成總分） /合計(jì)動(dòng)物數(shù)[9]。皮膚完整組家兔多次給藥皮膚刺激反應(yīng)最高平均分值為0.25，說(shuō)明祖師麻凝膠膏劑及其基質(zhì)對(duì)完整皮膚無(wú)刺激性；皮膚破損組家兔在第3、5和6天，去除藥物0h后皮膚刺激反應(yīng)最高平均分值為0.5，皮膚刺激反應(yīng)強(qiáng)度表現(xiàn)為輕度刺激性，但在去除藥物24h后即可恢復(fù)。見(jiàn)表5、表6。

2.2 豚鼠皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn) 按表3皮膚過(guò)敏性反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)記錄各組各時(shí)間的平均分值，反應(yīng)平均分值=（紅斑形成總分+水腫形成總分）/合計(jì)動(dòng)物數(shù)[10]。同時(shí)還應(yīng)密切觀察動(dòng)物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身性過(guò)敏反應(yīng)出現(xiàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物皮膚反應(yīng)的差別，判斷受試物對(duì)皮膚過(guò)敏反應(yīng)的性質(zhì)，并計(jì)算過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率。過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率（%）[11] =（有過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物例數(shù)/合計(jì)動(dòng)物數(shù)）×100% ，根據(jù)過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率判斷受試物的過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度。陽(yáng)性致敏組在去除藥物72 h內(nèi)有不同程度的紅斑與水腫，反應(yīng)平均值0.8～2.6，致敏率為100%。祖師麻凝膠膏劑及其基質(zhì)在3次給藥致敏過(guò)程中，皮膚過(guò)敏反應(yīng)平均分值均為0；第28 d再次接觸此藥（激發(fā)），即刻觀察直至72 h 后，均無(wú)紅斑或水腫反應(yīng)，亦無(wú)哮喘、站立不穩(wěn)等全身性過(guò)敏反應(yīng)，反應(yīng)平均值為0，致敏率為0。表明祖師麻凝膠膏劑經(jīng)皮膚給藥無(wú)致敏作用。見(jiàn)表7、表8。

3 討論

風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是急性或慢性結(jié)締組織炎癥的常見(jiàn)疾病之一，給患者正常生活帶來(lái)極大的負(fù)面影響，病情可反復(fù)發(fā)作或累及心臟。其臨床癥狀以關(guān)節(jié)、肌肉游走性酸痛為特征，受累關(guān)節(jié)多為肩、膝、踝、肘等大關(guān)節(jié)，多由一個(gè)關(guān)節(jié)轉(zhuǎn)至另一關(guān)節(jié)，病變區(qū)域局部呈紅腫、劇痛、灼熱，也可多個(gè)關(guān)節(jié)同時(shí)發(fā)病。該病屬中醫(yī)痹證范疇，臨床表現(xiàn)變化多端，病證復(fù)雜，“虛邪瘀”為其基本病機(jī)[12]。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種以多發(fā)性、對(duì)稱性關(guān)節(jié)炎癥為主，可引起肢體嚴(yán)重畸形的慢性全身性自身免疫性疾病，主要病理改變?yōu)殛P(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥、增生形成絨毛狀突起，侵犯關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腱等，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。

祖師麻是臨床治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的有效藥物，其提取物祖師麻甲素具有抗炎、鎮(zhèn)痛等作用，在臨床應(yīng)用中具有獨(dú)特的療效優(yōu)勢(shì)。為提高載藥量、增強(qiáng)保濕性、減少對(duì)皮膚的刺激性，甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院結(jié)合臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，改變目前的祖師麻制劑的劑型，將其制成了祖師麻凝膠膏劑，“內(nèi)病外治” [13]，直接貼敷于關(guān)節(jié)處，經(jīng)皮給藥。研究考察了祖師麻凝膠膏劑外用的安全性，結(jié)果顯示，祖師麻凝膠膏劑對(duì)家兔完整皮膚無(wú)刺激性，對(duì)破損皮膚有輕度刺激性，但在去除藥物24h后即可恢復(fù)，對(duì)豚鼠皮膚也未見(jiàn)過(guò)敏性反應(yīng)，表明該制劑皮膚給藥具有較好的安全性。

參考文獻(xiàn)

[1]李欣孺.淺談橡膠膏劑、巴布劑、透皮貼劑的研究進(jìn)展[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2010，9（24） ： 24-26.

[2]李希珍，張慶賀，董剛，等.祖師麻凝膠膏劑的制備工藝及含量測(cè)定[J].特產(chǎn)研究，2015， （2） ： 18-22.

[3]董禮，徐希明，余江南.中藥凝膠膏劑研究概述[J].中國(guó)藥師，2011，14（1） ： 129-132.

[4]文潔，俞勵(lì)平，孫素蘭，等. 冰辛軟膏皮膚安全性的研究[J].食品與藥品，2005，7（10） ： 41-43.

[5]楊曄，焦正花，張小華，等. 止痛膏抗炎鎮(zhèn)痛和皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)研究[J]. 西部中醫(yī)藥，2014，27（3）：26-28.

[6]《中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性-研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心，2005：11-20.

[7]李彥林， 周云豐， 李琳，等. 平痤洗劑皮膚刺激和過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志， 2016， 23（2）：56-58.

[8]《中藥天然藥物免疫毒性（過(guò)敏性、光過(guò)敏反應(yīng)）研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組.中藥、天然藥物免疫毒性（過(guò)敏性、光過(guò)敏反應(yīng)）研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心，2005：11.

[9]李艷，艾儒棣，譚正懷，等. 復(fù)方苦蛇乳膏皮膚刺激性和過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35（1） ： 14-15.

[10]張美松，何新軍，陳宇，等. 祛癜復(fù)色軟膏對(duì)動(dòng)物皮膚過(guò)敏性反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2013，48（6） ： 410-411.

[11]李跟旺，劉效栓，焦正花，等. 消定膏皮膚刺激性及致敏性研究[J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥，2013，15（07）：560-562.

[12]陜大艷，陳啟明，王嫻默，等. 針灸治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，29（9） ： 1387-1388.

[13]夏裕發(fā)，褚克丹，李煌，等. 治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的中藥經(jīng)皮給藥制劑研究概況[J].中醫(yī)外治雜志，2012，21（1） ： 44-46.