血液分析儀散點(diǎn)圖法檢測異型淋巴細(xì)胞的價(jià)值探討

丁 飛，楊 洋，熊 林，唐詩鳳，王曉珊，朱 歡

(遵義市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,貴州 遵義 563000)

近年研究表明，異型淋巴細(xì)胞(以下簡稱異淋)是由藥物或病毒等刺激導(dǎo)致應(yīng)激反應(yīng)而產(chǎn)生幼稚細(xì)胞化或原始細(xì)胞化等形態(tài)變異的一類非典型淋巴細(xì)胞。已有研究證實(shí)[1]，EBV感染引起的傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)患者，其外周血異型淋巴細(xì)胞顯著升高，甚至超過20.0%。異型淋巴細(xì)胞的大量出現(xiàn)對診斷IM有重要意義[2]，對于篩查病毒感染性疾病類型有輔助意義。 異淋檢測的傳統(tǒng)方法是顯微鏡檢查(鏡檢)，其準(zhǔn)確率高，但隨著檢驗(yàn)標(biāo)本量的不斷增多，若僅憑鏡檢，準(zhǔn)確性雖高，但耗費(fèi)人力、物力，且檢測時(shí)限長。全自動血液分析儀通過復(fù)檢規(guī)則部分減少了血液標(biāo)本涂片的鏡檢率，大大減輕了檢驗(yàn)人員的工作量。但血液分析儀不能對相關(guān)異淋細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行有效識別，極易造成漏診和誤診。本研究對232例作異淋檢測的血常規(guī)標(biāo)本進(jìn)行儀器法檢測和血液標(biāo)本涂片復(fù)檢的同時(shí)，作血液分析儀散點(diǎn)圖分析，現(xiàn)將結(jié)果分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：2016年6月～2016年12月我院收治的、已行儀器檢測、血液分析儀散點(diǎn)圖分析和血液標(biāo)本涂片鏡檢以檢測異淋的發(fā)熱患兒共232例，其中男109例,女124例，年齡2～14歲。

1.2材料：①儀器設(shè)備：顯微鏡(型號：OLYMPUS CX31，日本奧林巴斯株式會社)；全血細(xì)胞分析儀(型號：Sysmex 800i，日本森美康株式會社)。②試劑：瑞氏染液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)。

1.3方法：選擇232例要求作異淋檢測的血常規(guī)標(biāo)本，均以血液標(biāo)本涂片瑞氏-姬姆薩染色后鏡檢為標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，用血液分析儀散點(diǎn)圖法與復(fù)檢規(guī)則法檢測異淋結(jié)果，復(fù)檢規(guī)則法異淋陽性報(bào)警見圖1。

圖1 含異淋的復(fù)檢規(guī)則報(bào)警

1.3.1儀器檢測：取患者EDTA-K2抗凝血，用Sysmex 800i血液分析儀于1 h內(nèi)檢測，通過觀察是否出現(xiàn)Lymph%-1 /Atypical Variant lymphs(-)報(bào)警而提示異淋的有無。

1.3.2血液分析儀散點(diǎn)圖分析：通過觀察在單核細(xì)胞散點(diǎn)圖的上方是否出現(xiàn)異常均勻分布的、呈橢圓形或近似長方形的典型散點(diǎn)圖，或在淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞所在區(qū)域融合成灰白色并且向上延升的典型散點(diǎn)圖，從而判斷異淋的有無。

1.3.3血液分析儀涂片鏡檢：取EDTA-K2抗凝血制成涂片進(jìn)行瑞氏染色，在顯微鏡下用油鏡做WBC分類計(jì)數(shù)，觀察異淋的有無并計(jì)算其陽性率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS13.5統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料用百分比(%)表示，采用四格表，行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

散點(diǎn)圖法和復(fù)檢規(guī)則法檢測異淋結(jié)果比較：散點(diǎn)圖法檢出真陽性83例，假陽性7例，假陰性2例，真陰性140例，該方法靈敏度為97.65%，特異度為95.24%，陽性預(yù)測值為92.22%，陰性預(yù)測值98.59%; 樣本總符合率96.12%，陽性提示復(fù)檢89例，復(fù)檢率為38.79%；血液分析儀復(fù)檢規(guī)則法檢出真陽性84例，假陽性48例，假陰性1例，真陰性99例，該方法靈敏度為98.82%，特異度為67.35%，陽性預(yù)測值為 63.63%，陰性預(yù)測值99.00%; 樣本總符合率78.88%，陽性提示復(fù)檢132例，復(fù)檢率為56.90%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，散點(diǎn)圖法與復(fù)檢規(guī)則法比較，其特異度、陽性預(yù)測值、樣本正確率、復(fù)檢率結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，其靈敏度 、陰性預(yù)測值結(jié)果相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1、表2。

表1散點(diǎn)圖法與復(fù)檢規(guī)則法與直接鏡檢法檢測結(jié)果比較(例)

鏡檢結(jié)果例數(shù)散點(diǎn)圖法 陽性 陰性 復(fù)檢規(guī)則法 陽性 陰性 真陽性85832841真陰性14771404899合計(jì)23290142132100

表2散點(diǎn)圖法與復(fù)檢規(guī)則法檢測效能比較(%)

方法SNSPPPVNPVRETCR散點(diǎn)圖法97.6595.242.2298.5938.7996.12復(fù)檢規(guī)則法98.8267.3563.6399.0056.9078.88

注：SN:靈敏度；SP：特異度；PPV:陽性預(yù)測值；NPV:陰性預(yù)測值；RE：復(fù)檢率；TCR:總符合率

3 討論

異型淋巴細(xì)胞根據(jù)形態(tài)不同,分為幼稚型異型淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞型異型淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞型異型淋巴細(xì)胞[3]，其多見于病毒感染的外周血中，其中以傳染性單核細(xì)胞增多癥、流行性出血熱、病毒性肝炎、流行性上呼吸道感染、帶狀皰疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹等較多見，正常人偶可見到。顯微鏡檢查法作為異淋檢測的傳統(tǒng)方法，要求檢驗(yàn)人員能夠熟練掌握血片的制作和染色,并能掌握鏡下正常及病理狀態(tài)的不同細(xì)胞形態(tài),能綜合運(yùn)用血液分析、顯微鏡檢查、其他實(shí)驗(yàn)室檢查與臨床表現(xiàn)等才能對相關(guān)疾病作出明確的判斷。因此，該法準(zhǔn)確率雖高，但對檢驗(yàn)人員的形態(tài)學(xué)知識和經(jīng)驗(yàn)要求較高，且費(fèi)人力物力，對所有待檢血常規(guī)標(biāo)本均行鏡檢將無法實(shí)現(xiàn)。

全自動血液分析儀運(yùn)用復(fù)檢規(guī)則部分減少了血液標(biāo)本涂片的鏡檢率，減輕了人員的工作量,但血液分析儀不能有效識別相關(guān)異淋細(xì)胞形態(tài)。近年來，隨著全自動血液分析儀的不斷升級運(yùn)用，血涂片復(fù)檢率的降低，導(dǎo)致異淋的檢出率明顯下降，特別是臨床醫(yī)師未申請檢查異淋的標(biāo)本，其檢出率更低，造成較多誤診和漏診。Sysmex血液分析儀由日本希森美康公司采用4-DIFF和WBC/BASO兩個(gè)通道進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類。4-DIFF通道采用流式細(xì)胞術(shù)、核酸熒光染色技術(shù)，使用專一溶血劑溶解紅細(xì)胞，用聚次甲基核酸熒光染料與白細(xì)胞內(nèi)的DNA和RNA結(jié)合，從而使之著色。當(dāng)細(xì)胞通過激光束被照射時(shí)，細(xì)胞因其體積大小、染色程度、細(xì)胞質(zhì)成分濃度或細(xì)胞核密度等不同，而產(chǎn)生與其特征相應(yīng)的各種散射光和熒光，以側(cè)向散射光(SSC)作為橫坐標(biāo)來反映細(xì)胞內(nèi)容物的多少；以側(cè)向熒光(SFL)作為縱坐標(biāo)來反映細(xì)胞內(nèi)核酸的含量，并得到白細(xì)胞4-DIFF散點(diǎn)圖[4]。

從表1可見，散點(diǎn)圖法與復(fù)檢規(guī)則法比較，其方法特異度(95.9%)、陽性預(yù)測值(92.1%)、樣本正確率(96.6%)、復(fù)檢率(38.4%)與復(fù)檢規(guī)則法的特異度(67.3%)、陽性預(yù)測值(63.6%)、樣本正確率(78.9%)、復(fù)檢率(56.9%)比較，結(jié)果均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示血液分析儀散點(diǎn)圖法更為準(zhǔn)確；其復(fù)檢率較復(fù)檢規(guī)則法低，可明顯縮短檢測時(shí)限。兩種方法比較，散點(diǎn)圖法的靈敏度(97.6%)、陰性預(yù)測值(98.6%)與復(fù)檢規(guī)則法的靈敏度(98.9%)、陰性預(yù)測值(99.0%)結(jié)果相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。因此，對于采用儀器法的復(fù)檢規(guī)則和散點(diǎn)圖法同時(shí)判定為陰性的病例，可結(jié)合臨床資料初步篩查有無異淋細(xì)胞，從而大大減低了異淋檢驗(yàn)的復(fù)檢率，達(dá)到了快速篩檢,提高工作效率的目的。

本研究中，對于儀器法復(fù)檢規(guī)則132例異型淋巴細(xì)胞陽性病例，采用散點(diǎn)圖法觀察，僅89例陽性，鏡檢的真陽性為85例,散點(diǎn)圖法的識別率與鏡檢法較為接近。工作中，對于儀器法復(fù)檢規(guī)則陽性病例，應(yīng)結(jié)合散點(diǎn)圖觀察，后者陽性再進(jìn)一步結(jié)合顯微鏡復(fù)檢。儀器法和血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合應(yīng)用，不但保證了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，還有效降低了異淋檢驗(yàn)的漏診和誤診率，為相關(guān)疾病的診斷提供準(zhǔn)確的依據(jù)。