TGF-β和IL-6 在乙型肝炎患者血清中的表達意義

臧 唯，王 琢，張闊野

(1.吉林市中心醫(yī)院，吉林 吉林 132000；2.齊魯醫(yī)藥學院，山東 淄博 255000；3.吉林市衛(wèi)生學校，吉林 吉林 132000)

肝癌、肝硬化是危及人類健康和生命的主要疾病之一，主要病因是乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)感染。HBV早期多無癥狀，但隨著疾病進展，HBV感染者由肝炎轉(zhuǎn)變肝硬化甚至進展為肝細胞肝癌(HCC)，HCC是由于HBV感染免疫調(diào)節(jié)所致。監(jiān)控HBV感染后疾病進展情況，盡快防御及診治，是減少HBV感染引發(fā)死亡的關(guān)鍵。本研究的目的在于通過對乙型肝炎患者血漿中TGF-β(轉(zhuǎn)化生長因子-β transforming growth factor-β) 和IL-6 (Interleukine-6,白介素-6)的測定來探討其所對疾病進展的影響，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：收集2017年1月～2017年12月吉林省肝膽醫(yī)院及吉林市中心醫(yī)院的患者血清樣本。將慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者95例設(shè)為CHB組、肝炎后肝硬化(Cirrhosis)40例設(shè)為Cirrhosis組和肝細胞肝癌(HCC)40例設(shè)為HCC組。CHB組標準：HBsAg(+)半年以上，血清HBV-DNA載量>5.0×102IU/ml，HBeAg(+)慢性乙型病毒性肝炎或HBeAg(-)慢性乙型病毒性肝炎者，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶持續(xù)或反復升高，或肝臟穿刺檢查提示炎性反應，HBeAg轉(zhuǎn)陰或HBeAg血清學轉(zhuǎn)換者；排除標準：HBV聯(lián)合丙型病毒性肝炎或其他類型肝炎及免疫缺陷疾病者，慢性乙型病毒性肝炎合并酒精性肝炎、脂肪肝、隱匿性肝硬化者。Cirrhosis組入組標準：HBeAg(+)持續(xù)時間半年以上，血清HBV-DNA載量>5.0×102IU/ml，超聲影像學檢查有肝臟纖維化表現(xiàn)或經(jīng)手術(shù)證實。HCC組入組標準：HBsAg(+)持續(xù)時間半年以上，血清HBV-DNA載量>5.0×102IU/ml，符合肝細胞肝癌的臨床表現(xiàn)，經(jīng)CT或磁共振檢查發(fā)現(xiàn)肝細胞肝癌特征的腫瘤病灶，或經(jīng)手術(shù)標本檢查確診患者。

1.2方法：血漿標本抽取外周血3 ml肝素抗凝,在4℃下,3 000 r/min，離心10 min,分離血漿,患者空腹禁食、水8 h，抽血前24 h內(nèi)不做劇烈運動。經(jīng)靜脈采血入抗凝紅色采血管3 ml。血標本收集于冷凍管內(nèi),儲存于-70℃至同一批檢測，3 000 r/min，離心10 min，分離血漿，離心后放置于1.5 ml EP管中，以乙二胺四乙酸鈉抗凝，4℃離心，采用ELISA 法分別檢測TGF-β(血漿正常值44.3 kD)和IL-6(108.85±41.48 ng/L)含量，檢測試劑盒由Elabscience生物工程有限公司提供，嚴格按照試劑盒說明進行操作。

2 結(jié)果

HCC組血清中的IL-6含量明顯高于Cirrhosis組(P<0.05)，Cirrhosis組高于CHB組(P<0.05)；HCC組血清中TGF-β的含量明顯高于Cirrhosis組，Cirrhosis組高于CHB組(P<0.05)。見表1。

組別例數(shù)TGF-β(kD)IL-6 (ng/L)CHB組9545.5±0.15120.85±46.50Cirrhosis組4050.4±0.17150.85±41.09HCC組4062.3±0.20220.85±20.44P值0.0000.000

3 討論

HBV是通過不閉合的雙鏈環(huán)形結(jié)構(gòu)構(gòu)成[1]，其中包含P、C、X、S四個區(qū)。S區(qū)主要編碼乙型病毒性肝炎s抗原(Hepatitis B s antigen，HBsAg)，是HBV感染的標志物。C區(qū)有前C、C基因區(qū)，分別為編碼乙型肝炎病毒e抗原(Hepatitis B e antigen，HBeAg)前體和乙型病毒性肝炎核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)，HBeAg前體通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的加工修飾，轉(zhuǎn)化為可溶性的HBeAg，在細胞和體液免疫中起到清除乙型肝炎病毒的作用[2]。C基因的編碼產(chǎn)物乙型病毒性肝炎核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)，是乙型病毒性肝炎感染肝細胞后導致肝臟細胞損傷的最主要機制之一，同時是參與殺傷病毒的最主要機制之一。HBV-DNA前C區(qū)突變和BCP區(qū)與肝炎肝硬化和肝細胞肝癌的聯(lián)系是目前研究引人注目的主要問題。肝臟中活化的免疫細胞通過分泌細胞因子[3]，起到重要的抗病毒作用。細胞因子是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物，主要通過活化的免疫細胞或間質(zhì)細胞參與肝臟組織的炎性反應及纖維化的進程[4]。HBV感染患者血清中TNF-α (Tumor necrosis factor-α，腫瘤壞死因子-α)、INF-γ(Interferon-γ，干擾素-γ)和IL-6 (Interleukine-6,白介素-6)一些細胞因子的增高與病毒性肝炎的進展有密切的聯(lián)系[5],肝細胞肝癌的血清中轉(zhuǎn)化生長因子-β、腫瘤壞死因子-α、IL-6、IL-8等細胞因子明顯高于乙型肝炎病毒感染者。針對乙型肝炎病毒感染誘導的免疫反應過程中產(chǎn)生的細胞因子較多，如干擾素-γ、IL-12以及腫瘤壞死因子-α，能通過不同途徑的調(diào)節(jié)機制誘導激活淋巴細胞、巨噬細胞等，從而清除乙型肝炎病毒感染肝細胞，同時又是把雙刃劍可以直接引發(fā)肝細胞的損傷及功能障礙。還有大量的細胞因子具有抗炎免疫調(diào)節(jié)功能，如IL-6和轉(zhuǎn)化生長因子-β，炎性反應調(diào)節(jié)以及抗炎調(diào)節(jié)的失衡可以誘導機體免疫功能的失衡紊亂，引發(fā)機體抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)功能異常，腫瘤細胞不能被及時和有效地清除。在機體炎性反應免疫調(diào)節(jié)反應的進程中，可分泌一些因子如活性氧、一氧化氮等，導致肝細胞損傷，引發(fā)細胞產(chǎn)生出現(xiàn)異形及基因突變，最終機體失去代償功能形成腫瘤細胞[6]。

IL-6 (白介素-6,Interleukine-6)是一種多肽，IL-6由2條糖蛋白鏈組成，一條為α鏈，分子量80 kd，α鏈缺少胞內(nèi)區(qū)，只能以低親合性與IL-6結(jié)合，所形成復合物迅速與另一條分子量130 kd、復合物與高親和性的β鏈結(jié)合，通過β鏈向細胞內(nèi)傳遞信息。IL-6與IL-1一起可協(xié)同促進T細胞增殖，部分與T細胞IL-2受體上調(diào)有密切聯(lián)系。IL-6和IL-1一樣參與炎性反應及發(fā)熱反應，HCC可分泌IL-6作為自身生長因子刺激其生長。探討HBV感染研究人群中IL-6 與HCC患病風險的關(guān)系,分析各基因型與肝癌家族史、吸煙、飲酒等肝癌危險因素在HCC發(fā)生中的交互作用以及基因與基因的交互作用及誘導HCC的發(fā)病機理，為尋找個體對肝癌易感的分子標志物提供參考依據(jù)。

TGF-β(轉(zhuǎn)化生長因子-β)是屬于一組調(diào)節(jié)細胞成熟以及分化的轉(zhuǎn)化生長因子超家族，機體內(nèi)許多細胞因子都可以分泌非活性狀態(tài)的轉(zhuǎn)化生長因子[7]。在體外，非活性狀態(tài)的轉(zhuǎn)化生長因子又稱為latency associated peptide(LAP)，通過體外立即可被活化，蛋白質(zhì)的本質(zhì)裂解作用可使TGF-β復合體轉(zhuǎn)化為活化的TGF-β。一般情況下細胞分化活躍的組織中TGF-β的表達會很高，如肝細胞、成骨細胞、腎臟、骨髓和胚胎。TGF-β1在人血小板和哺乳動物骨中含量最高，而TGF-β2在豬血小板和哺乳動物骨中含量最高，TGF-β3以間充質(zhì)干細胞產(chǎn)生為主。活化后的B細胞或T細胞產(chǎn)生TGF-β水平比靜止細胞顯著升高。通常幾乎所有的腫瘤細胞可檢測到TGF-β[8]。

本研究結(jié)果提示，通過檢測感染HBV人群血清中的TGF-β 和IL-6，能夠初步評估HBV感染者的病情、進展及預后，能夠在臨床中對HBV感染者的進展情況、肝臟損傷程度及預后的預判起到提示作用。