注射用醋酸去氨加壓素制備工藝及質(zhì)量考察

李遠(yuǎn)文

（深圳技師學(xué)院，廣東深圳518116）

0 引言

醋酸去氨加壓素（desmopressin acetate）為天然精氨鹽加壓素的結(jié)構(gòu)類似物，系對(duì)天然激素的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行兩處改動(dòng)而得，即1-半胱氨酸脫去氨基，以8-D-精氨酸取代8-L-精氨酸，因此本品亦稱去氨精氨酸加壓素。其分子式為C46H64N14O12S2C2H4O2，分子量為1 129.35，化學(xué)名為巰基丙酰-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-谷氨酰氨酰-L-天冬酰氨酰-L-半胱氨酰-L-脯氨酰-D-精氨酰-L-甘氨酰胺醋酸鹽（1,6-二硫環(huán)）。在常溫下，醋酸去氨加壓素為一種白色無嗅粉末。醋酸去氨加壓素是一種多肽類藥物，是手術(shù)及相關(guān)科室的新型止血藥，可有效減少出血量，并預(yù)防深靜脈血栓；是輕中度甲型血友病、血管性血友病的一線用藥，可用于治療肝硬化、尿毒癥及各種抗凝、抗血小板藥物所致的出血；也是中樞性尿崩癥及原發(fā)性遺尿癥的首選用藥。

注射用醋酸去氨加壓素系真空冷凍干燥產(chǎn)品，真空冷凍干燥是指將含水樣品凍結(jié)到冰點(diǎn)以下，使樣品中的水分凍結(jié)成小冰晶，然后在真空狀態(tài)下通過加熱使水分由固態(tài)直接升華成氣態(tài)水蒸氣而逸出，使樣品中水分失去而得到的干燥樣品。凍干工藝主要包括預(yù)凍、升華干燥、解吸干燥3個(gè)階段，本文通過考察注射用醋酸去氨加壓素凍干工藝中的各條件，得到最佳制備工藝，并經(jīng)驗(yàn)證該工藝適合批量生產(chǎn)。

1 材料與設(shè)備

1.1 材料

醋酸去氨加壓素（深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司）；甘露醇（廣西南寧化學(xué)制藥有限責(zé)任公司）；醋酸（湖南爾康制藥股份有限公司）；注射用冷凍干燥用溴化丁基膠塞（西氏醫(yī)藥包裝中國有限公司）；模制西林瓶（浙江新康藥用玻璃有限公司）；抗生素瓶用鋁塑組合蓋（泰州市永興醫(yī)藥包裝有限公司）。

1.2 主要設(shè)備

LYO-7.5真空冷凍干燥機(jī)（上海某公司）；RZGSB西林瓶灌裝半加塞機(jī)（長(zhǎng)沙某公司）；KSC-ⅡB隧道式超聲波玻璃瓶洗瓶機(jī)（南京某公司）；STE100/2/100潔凈對(duì)開門滅菌烘箱（德國EHRE公司）；KGL250自動(dòng)軋蓋機(jī)（南京某公司）。

2 方法

2.1 樣品制備

將醋酸去氨加壓素用注射用水溶解后，與經(jīng)超濾的甘露醇水溶液合并，用注射用水稀釋至所需濃度，用RZGSB西林瓶灌裝半加塞機(jī)按照所需的相應(yīng)體積進(jìn)行灌裝，送入LYO-7.5真空冷凍干燥機(jī)，依據(jù)不同的凍干工藝條件進(jìn)行凍干，凍干結(jié)束后充氮保護(hù)，壓塞，取出西林瓶，軋蓋。

2.2 冷凍干燥方法

將制備好的樣品分裝于2m L西林瓶中，放入凍干機(jī)干燥箱中進(jìn)行預(yù)凍，并保證凍結(jié)完全。之后進(jìn)行抽真空，在真空度為5～50 Pa狀態(tài)下加熱升華干燥，使樣品水分含量≤5%。

2.3 擴(kuò)大批量驗(yàn)證

將3批注射用醋酸去氨加壓素配制液，按照試驗(yàn)優(yōu)化后的凍干工藝進(jìn)行冷凍干燥。3批半成品批量為27 000瓶。分別按2015版《中華人民共和國藥典》二部及國家食品藥品監(jiān)督管理局《注射用醋酸去氨加壓素藥品標(biāo)準(zhǔn)》（YBH 01702010）的相關(guān)規(guī)定，檢定各批次制品的殘余水分、細(xì)菌內(nèi)毒素、酸堿度以及含量，統(tǒng)計(jì)結(jié)果，以驗(yàn)證該工藝的適用性。

2.4 質(zhì)量考察

本次試驗(yàn)工藝生產(chǎn)的樣品及3批驗(yàn)證工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品，由深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司QC部進(jìn)行抽樣檢測(cè)。

2.4.1 水分測(cè)定

取本品，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0832）中的容量滴定法進(jìn)行檢查，要求含水分不得超過5.0%。

2.4.2 細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定

取本品，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（1143）中的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法進(jìn)行檢查，要求細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)小于0.6 EU/μg。

2.4.3 酸度

取本品，加水溶解并稀釋制成每lm L中含2.5mg的溶液，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0631）中的pH值測(cè)定法進(jìn)行檢查，要求pH值應(yīng)為5.0～7.0。

2.4.4 溶液澄清度檢查

取本品，加水溶解并稀釋制成每lm L中含2.5mg的溶液，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0902）中的溶液澄清度檢查法進(jìn)行檢查，要求溶液應(yīng)澄清無色。

2.4.5 含量測(cè)定

按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0512）中的高效液相色譜法測(cè)定含量。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽溶液（取0.067mol/L磷酸氫二鈉與0.067mol/L磷酸二氫鉀等混合，調(diào)節(jié)pH值至7.0）-乙腈（80∶20）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。取醋酸去氨加壓素、雜質(zhì)A與縮宮素對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成每lm L中各約含20μg的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。理論板數(shù)按醋酸去氨加壓素峰計(jì)算不低于2 000。

測(cè)定方法：取本品10支，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每lm L中約含8μg的溶液，精密量取50μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取醋酸去氨加壓素對(duì)照品適量，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

3 結(jié)果

3.1 裝量的確定

將稀釋好的醋酸去氨加壓素溶液分別裝入2m L西林瓶中，每瓶裝量分別為0.5m L、0.8m L、1.1m L、1.4m L，每瓶含量都是15μg，進(jìn)行凍干試驗(yàn)，對(duì)樣品進(jìn)行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結(jié)果如表1所示。

從表1結(jié)果對(duì)比可知：裝量規(guī)格為0.8m L/瓶和1.1m L/瓶時(shí)，樣品性狀、餅狀物外觀最好；0.5m L/瓶裝量規(guī)格的樣品餅狀物出現(xiàn)萎縮；1.4m L/瓶裝量規(guī)格的樣品餅狀物過于疏松，容易散開。4種裝量規(guī)格的凍干樣品的溶液澄清度沒有明顯差異，均符合質(zhì)量要求。

綜合考慮，本試驗(yàn)確定0.8m L/瓶為本產(chǎn)品最適宜的凍干裝量，既節(jié)約物料，裝在2m L西林瓶中又顯得美觀。

3.2 預(yù)凍溫度的確定

設(shè)置好相應(yīng)的板層溫度，開動(dòng)壓縮機(jī)對(duì)前箱制冷，使制品溫度迅速降溫（降溫時(shí)間≤2 h），制品溫度分別在-20℃、-30℃、-40℃、-45℃以下保持2 h以上，對(duì)樣品進(jìn)行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結(jié)果如2所示。

從表2結(jié)果對(duì)比可知：-20℃和-30℃預(yù)凍溫度的樣品均出現(xiàn)不同程度的餅狀物外觀萎縮，可能是由于溫度較高，樣品沒有完全凍結(jié)，在真空升華階段極易溶解周圍樣品所致。而-40℃和-45℃預(yù)凍溫度的樣品試驗(yàn)結(jié)果沒有明顯差別，均符合質(zhì)量要求。由于過低的預(yù)凍溫度會(huì)使能耗增加，因此本試驗(yàn)選擇-40℃為本產(chǎn)品最適宜的預(yù)凍溫度。

3.3 升華溫度的確定

在真空度為5～50 Pa狀態(tài)下加熱升華干燥，使制品最終溫度分別控制在-15℃、-20℃、-25℃、-30℃，整個(gè)升華干燥階段需要8 h，對(duì)樣品進(jìn)行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結(jié)果如表3所示。

表1 不同裝量規(guī)格的試驗(yàn)結(jié)果

表2 不同預(yù)凍溫度的試驗(yàn)結(jié)果

從表3結(jié)果對(duì)比可知：當(dāng)升華溫度為-15℃時(shí)，凍干樣品性狀為類白色結(jié)晶，凍干餅狀物有萎縮現(xiàn)象，溶解后溶液渾濁。這是因?yàn)樵摐囟仍谄涔簿c(diǎn)附近時(shí)，冰晶部分溶解成液態(tài)，吸熱蒸發(fā)，使樣品顏色加深、餅狀物出現(xiàn)萎縮。升華溫度過低，制冷能耗增加，成本提高。真空冷凍干燥是通過升高板層的溫度，相應(yīng)地使干燥物表面的溫度升高，用以加快升華速度。但是，板層溫度并非越高越好，必須要考慮樣品的性狀因素。綜合表明，-25℃為本產(chǎn)品最適宜的凍干升華溫度。

3.4 解吸溫度的確定

在真空度為1～10Pa狀態(tài)下加熱進(jìn)行解吸干燥，使制品最終溫度分別控制在25℃、30℃、35℃、40℃，整個(gè)解吸干燥階段需要5 h，對(duì)樣品進(jìn)行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度、水分檢查，結(jié)果如表4所示。

從表4結(jié)果對(duì)比可知：解吸干燥溫度為30℃時(shí)，雖然樣品各方面指標(biāo)基本合格，但水分接近標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的上限。解吸干燥溫度為25℃時(shí)，樣品水分不合格。解吸干燥溫度為40℃時(shí)，樣品餅狀物外觀、性狀不合格。故選擇35℃為本產(chǎn)品最適宜的解吸干燥溫度。

3.5 擴(kuò)大批量驗(yàn)證

為了驗(yàn)證優(yōu)選的凍干工藝的穩(wěn)定性，車間連續(xù)生產(chǎn)了20120301、20120302、20120303這3批注射用醋酸去氨加壓素配制液，按照上述試驗(yàn)優(yōu)選后的凍干工藝進(jìn)行冷凍干燥工藝的驗(yàn)證。3批半成品的裝量均為0.8m L/瓶，批量為27 000瓶，結(jié)果如表5所示。

從表5結(jié)果可以看出：這3批凍干制品的檢定結(jié)果均符合國家標(biāo)準(zhǔn)，表明該凍干工藝符合生產(chǎn)要求，穩(wěn)定性良好。

4 結(jié)語

凍干制劑主要存在產(chǎn)品萎縮、自溶、分層等缺陷。其主要原因是：預(yù)凍溫度高，制品尚未完全凍結(jié)；升華干燥溫度高、速度快，使部分制品融化。本試驗(yàn)中，注射用醋酸去氨加壓素溶液的共晶點(diǎn)為-14℃，溶液共晶點(diǎn)在凍干工藝中很重要，它是制定凍干工藝的主要依據(jù)。預(yù)凍時(shí)，必須冷凍到共晶點(diǎn)以下，為了確保產(chǎn)品在預(yù)凍時(shí)完全凍結(jié)，本試驗(yàn)選擇-40℃為其預(yù)凍溫度。在升華干燥過程中，不能超過共晶點(diǎn)溫度，本試驗(yàn)中的升華溫度確定為-25℃，可以保證水分最大限度地升華。

表3 不同升華溫度的試驗(yàn)結(jié)果

表4 不同解吸溫度的試驗(yàn)結(jié)果

表5 成品檢驗(yàn)結(jié)果

在凍干生產(chǎn)過程中，應(yīng)密切關(guān)注凍干機(jī)板層溫度、制品溫度、冷凝器溫度、真空度等的變化，確保其符合相關(guān)要求。同時(shí)，應(yīng)關(guān)注時(shí)間和溫度的變化速率，盡可能選用自動(dòng)控制模式。除自動(dòng)記錄外，還應(yīng)人工記錄上述參數(shù)的設(shè)定和變化情況，并定時(shí)觀察產(chǎn)品的變化情況及凍干機(jī)的運(yùn)行狀況，這樣才能確保生產(chǎn)出合格的產(chǎn)品。