CXCR-2和MMP-9在非小細胞肺癌癌組織中的表達水平及其與肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

曾媛媛，劉 哲，雷 舒，李 敏

相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，全球新發(fā)肺癌病例明顯增加，多數(shù)新發(fā)病例在城市人口[1]，其中非小細胞型肺癌（NSCLC）約占所有肺癌的80%。目前，對于誘導(dǎo)NSCLC產(chǎn)生機制及NSCLC與炎癥之間關(guān)系的研究較少見[2]。最近有學(xué)者提出，免疫相關(guān)的細胞因子及與其相關(guān)的調(diào)節(jié)因子涉及NSCLC發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等各個方面[3]。本研究擬通過對NSCLC組織與癌旁正常肺組織的臨床病理特征進行回顧性分析，比較二者間CXCR-2和MMP-9的表達水平差異，探討CXCR-2和MMP-9與肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，為NSCLC的發(fā)病機理研究和臨床診治提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2012年3月～2014年9月醫(yī)院手術(shù)切除的73例NSCLC組織、48例癌旁正常肺組織標本，均經(jīng)病理、組織學(xué)檢查確診，所有病例的病理、臨床、隨訪資料均完整；入選病例隨訪時間截止于2017年9月或者患者死亡。NSCLC組中，患者男 46 例，女 27 例；年齡 26～76（59.3±10.1）歲；腫瘤長徑≥3.0 cm 44例，腫瘤長徑＜3.0 cm 29例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者46例；高-中分化47例，低-未分化26例。癌旁正常肺組織均距離腫瘤邊緣＞5 cm，經(jīng)病理檢查證實無腫瘤細胞浸潤；患者年齡 25～76（59.27±10.08）歲。

1.2 試劑 CXCR-2檢測用兔抗人CXCR4單克隆抗體、MMP-9檢測用免疫人多克隆抗體MMP-9均購自于北京博奧生物公司；即用型 SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 標本制備[4]組織標本經(jīng)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，56℃烘烤 48 h后取出，37℃烤箱過夜，行免疫組化學(xué)染色。免疫人多克隆抗體MMP-9工作濃度為 1∶25，兔抗人CXCR-2多克隆抗體工作濃度為 1∶25，封閉時用正常羊血清，工作濃度為 1∶20。染色標本在光學(xué)顯微鏡高倍鏡(400倍)下觀察，胞質(zhì)或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。染色成功后，任意選擇5個高倍鏡視野，每個高倍視野下計數(shù)100個細胞。根據(jù)陽性細胞所占比例分別記分：無陽性細胞記為0分；陽性細胞所占比例＜30.0%記為1分；陽性細胞所占比例≥30.0%記為2分。另根據(jù)陽性細胞表達強弱分別記分：未出現(xiàn)著色記為0分；淺黃色或者黃色記為1分；棕黃色記為2分；棕褐色記為3分。將兩項的記分進行相乘，0～1分為陰性；2～6分為陽性記。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以例和構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CXCR-2和MMP-9陽性表達比較CXCR-2和MMP-9主要定位于NSCLC細胞的胞質(zhì)中，呈淺黃色至棕黃色顆粒（圖1、2）；NSCLC組織CXCR-2和MMP-9陽性表達率明顯高于癌旁正常肺組織（P＜0.05，表 1）。

表1 兩組CXCR-2和MMP-9陽性表達比較［n(%）］

圖1 癌旁正常肺組織

2.2 NSCLC組織CXCR-2和MMP-9表達與臨床病理因素的關(guān)系 在隨訪過程中，73例NSCLC患者中，有46例（63.01%）未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，27例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，在出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中，24例（88.89%）CXCR2表達陽性，25例 （92.59%）MMP-9表達陽性。腫瘤分期高和出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的NSCLC組織中，CXCR-2和MMP-9的陽性表達率顯著上升（P＜0.05），見表 2。

2.3 CXCR-2和MMP-9表達與NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析 根據(jù)相關(guān)性結(jié)果顯示，CXCR-2和MMP-9的陽性表達率與NSCLC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率均呈正相關(guān)（r=0.437、0.348，P＜0.01）。

3 討論

近年來，肺癌發(fā)病率呈上升趨勢，且發(fā)病逐漸趨于年輕化[5]。雖然臨床上予以外科手術(shù)及聯(lián)合藥物治療取得了一定的療效，但是，患者的預(yù)后生存率仍然很低，尤其對于已經(jīng)發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移以及不能切除的肺癌患者的治療仍然十分困難[6]。據(jù)報道，NSCLC約占所有肺癌的80%，絕大部分患者確診時已經(jīng)到了癌癥中晚期，5年生存率很低[7]。文獻報道[8]，CXCR-2是腫瘤細胞常見的趨化因子受體，在腫瘤的相關(guān)轉(zhuǎn)移過程中起著尤為關(guān)鍵的生物學(xué)作用，在腫瘤中的陽性表達率均較高；基質(zhì)金屬蛋白(MMPs)可以降解機體組織細胞外基底膜以及基質(zhì)，從而對腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移起促進作用，MMP9屬于MMPs家族，腫瘤中MMP 9表達較高，則腫瘤的浸潤性和轉(zhuǎn)移性強[8-9]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NSCLC組織CXCR-2陽性和MMP-9陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織，與上述結(jié)論相似，這可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，由此推測，CXCR-2和MMP-9表達與NSCLC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征存在著一定的關(guān)系。

表2 NSCLC組織中CXCR -2和MMP-9與臨床病理因素的關(guān)系(n=73）

既往有研究表明[10]，炎癥因子的異常表達會提高同源細胞的致癌潛能，也會提高癌細胞的轉(zhuǎn)移能力。梁乃超等[11]研究發(fā)現(xiàn)，CXCR-2和MMP-9水平被抑制后，可以抑制癌細胞的生成和轉(zhuǎn)移，同時降低癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，CXCR-2和MMP-9高陽性表達患者的臨床分期更晚，浸潤深度更深，更容易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且本組數(shù)據(jù)還顯示：CXCR-2和MMP-9的陽性表達率與NSCLC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率均呈正相關(guān)（P＜0.05），與楊大運等[12]研究報道一致。分析原因可能是[12]：CXCR-2和MMP-9的高水平表達常合并有異?；虻拇嬖冢嚓P(guān)異?；虻拇嬖诳梢欢ǔ潭壬霞涌彀┘毎纳L，促使其對脈管等進一步產(chǎn)生侵犯，從而隨著血液出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移，增加了腫瘤的侵襲行為。

綜上所述，NSCLC組織中CXCR-2和MMP-9均呈高水平表達，且與腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，二者聯(lián)合檢測對評估NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后具有指導(dǎo)意義。但本組研究所選樣本量較小，且未研究CXCR-2和MMP-9是否受其他因素的影響，因此，有待進一步深入研究證實。