PCR技術(shù)在食品微生物檢測中的應(yīng)用

張昳

摘要：本文介紹了PCR方法的幾種原理，主要就PCR技術(shù)的各種特性、檢測速度、準(zhǔn)確性、在食品微生物檢測中的應(yīng)用等進行分析討論。

關(guān)鍵詞：微生物檢測;PCR;食品

聚合酶鏈反應(yīng)就是常說的PCR技術(shù)，是由美國學(xué)者提出的一種特定DNA片段擴增的方法。因為該技術(shù)存在其特殊的性質(zhì)特征，又不斷應(yīng)用于食品微生物檢測工作中，因此，該技術(shù)的運用不但可以讓食品微生物的檢出率不斷提高，更重要的是可以讓微生物一些導(dǎo)致人類患病的安全隱患問題排除。

一、關(guān)于食品微生物的PCR檢測技術(shù)

PCR的通用檢測。PCR檢測技術(shù)的原理非常簡單，在DNA模板與其對應(yīng)引物的混合物質(zhì)當(dāng)中添加適當(dāng)?shù)木酆厦?，利用催化的DNA片段逐漸進行擴增，在此過程中主要是按照DNA模板來進行，并且需要通過各個周期，在這些周期內(nèi)均會創(chuàng)造出各有差別的DNA片段，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的產(chǎn)物在此過程中會不斷增加。其實，早在幾十年前就有研究人員對沙門氏菌的基因進行設(shè)計，而研究過程也就是對PCR檢測技術(shù)進行使用，在檢測過程中，檢測出的菌類極多，其檢出率大約可達到99.5%左右。由此可知，PCR檢測方式是可以大幅度推廣的^[1]。

PCR的多重檢測。PCR多重檢測技術(shù)和以往的PCR檢測技術(shù)具有較為相似的大量構(gòu)成，在此當(dāng)中，綜合的反應(yīng)體系應(yīng)該由大量的引物構(gòu)成，混合物內(nèi)的引物主要呈現(xiàn)出互補關(guān)系。在反應(yīng)罐內(nèi)添加進種類各異的DNA片段，不僅能夠令以往檢測的特征仍然存在，還能夠簡化檢測的流程，對更多的基因進行檢測。不過，這種檢測方式也存在一定缺點，比如敏感度、檢測效率等，因此，需要較為客觀的對問題進行分析。

在多年的發(fā)展中，各類學(xué)者以及專家都對其檢測方式進行了研究，而其中最有典型意義的菌種就是沙門氏菌以及大腸桿菌。通過研究數(shù)據(jù)可以看出，其檢測率大約在63%，具有一定的可行性。

RT-PCR。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)是其全稱，原理是對細(xì)胞中的RNA進行提取并作為模板來進行CDNA獲取，分析并作為模板來對PCR進行擴增，以較好地表示基因。大量的實驗數(shù)據(jù)表明，該措施可以令檢測的靈敏度有效增強，甚至還可以提高更多的數(shù)量級，使RNA樣品的研究工作更加精確。RT-PCR檢測方式在進行過程當(dāng)中，大多數(shù)的檢測對象都是動物的糞便或者是河流當(dāng)中的樣品，而經(jīng)過檢驗可以得知，其中的菌體之間存在較多的區(qū)別。因此，在檢測菌體情況的時候，特別容易識別噬菌體的屬性究竟為陽性或是陰性。

二、PCR技術(shù)應(yīng)用于食品微生物檢測的優(yōu)勢

操作簡便。微生物的檢測工作涵蓋多個領(lǐng)域，比如，微生物生長應(yīng)用的培養(yǎng)基、微生物的生長環(huán)境PH值和生長溫度等不同的因素，由于微生物的種類各異，為了對微生物和生理特性進行徹底觀察，需要耗費過多的物力、人力以及財力，盡管有大量的時間和人力資源，但很難提高工作效率。而PCR技術(shù)就可以很好地解決這些問題。

檢測快捷。用傳統(tǒng)自動化檢測技術(shù)檢測微生物一般需要48小時96小時，甚至?xí)_到7天或更久。但如果檢測時間較久，總是會出現(xiàn)食品進入市場流轉(zhuǎn)以致不能準(zhǔn)確辨別檢測結(jié)果等現(xiàn)象，給我國的食品實際生產(chǎn)造成滯后的后果，也對我國的經(jīng)濟發(fā)展和社會穩(wěn)定造成一定影響。使用高自動化檢測技術(shù)PCR就可以避免這一弊端，在短時間內(nèi)就可以得到檢測結(jié)果，通常僅僅需要幾小時，較長的也僅僅需要一天便能結(jié)束。因此，高自動化檢測技術(shù)PCR對我國的食品行業(yè)有著重大意義^[2]。

結(jié)果精準(zhǔn)。食用微生物很難辨別，其中活性薄弱的細(xì)菌最難檢測出來，并且通常情況下不僅檢測不出，還很難培養(yǎng)。然而利用高自動化檢測技術(shù)PCR能夠詳細(xì)地將食品微生物的種類檢測出來，為我國的食品安全提供較大保障。

發(fā)展空間巨大。傳統(tǒng)檢測技術(shù)的生產(chǎn)效率落后，而PCR在現(xiàn)階段屬于高自動化技術(shù)，在各個方面都比傳統(tǒng)的食品檢測技術(shù)優(yōu)勢明顯，對于我國的食品行業(yè)和食品市場都有重要意義。

三、結(jié)論

經(jīng)過以上論述可知，高自動化檢測技術(shù)PCR不光是對檢測效率的提高，更重要的是可以讓其中的精準(zhǔn)度提高，從而讓食品安全更有保障。筆者相信，隨著時代的不斷發(fā)展，我國的微生物檢測技術(shù)還會不斷提高、不斷發(fā)展，并在生物學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科之中進行應(yīng)用。

參考文獻：

[1]陳諾，唐善虎，岑璐伽，等.多重PCR技術(shù)在食品微生物檢測中的應(yīng)用進展[J].中國畜牧獸醫(yī)，2010，37（10）：72-75.

[2]李勤，盛占武，孫志高.實時熒光定量PCR技術(shù)在食品微生物檢測和研究中的應(yīng)用[J].食品與發(fā)酵科技，2006，42（5）：9-12.