天水地區(qū)蘋果腐爛病病菌對3種殺菌劑的敏感性測定

惠娜娜 李繼平 張大為 郭建明 王立 鄭果

摘要：采用菌絲生長速率法測定了采自天水地區(qū)的8個(gè)蘋果腐爛病菌株對殺菌劑戊唑醇、噻霉酮及吡唑醚菌酯的敏感性。結(jié)果表明：戊唑醇對供試8株蘋果腐爛病病菌菌絲生長的抑制效果最為明顯， EC50值均小于1.0 μg/mL，平均為0.03 917 μg/mL;其次為吡唑醚菌酯，EC50值為0.362? 9～1.0262 6 μg/mL，平均為0.609 4 μg/mL;噻霉酮的抑制率較低， EC50值平均為20.226 39 μg/mL。

關(guān)鍵詞：蘋果;蘋果腐爛病病菌;殺菌劑;敏感性;天水地區(qū)

中圖分類號：S436.611.1? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ?文章編號：1001-1463（2018）12-0064-03

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2018.12.019

甘肅是我國的蘋果優(yōu)勢產(chǎn)區(qū)和生產(chǎn)大省，具有發(fā)展蘋果產(chǎn)業(yè)得天獨(dú)厚的自然條件。全省有18個(gè)縣被農(nóng)業(yè)部列為全國蘋果生產(chǎn)優(yōu)勢區(qū)域，其中天水地區(qū)氣候溫暖，雨量適中，土層深厚，適宜多種果樹生長，是甘肅省優(yōu)質(zhì)果品產(chǎn)區(qū)，是馳名中外的花牛蘋果的故鄉(xiāng)[1 ]。由蘋果黑腐皮殼菌（Valsa mali MiyabeYamada）侵染所致的蘋果腐爛病是蘋果的毀滅性病害，被稱為蘋果樹“癌癥”，各蘋果產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生。隨著栽培面積的不斷擴(kuò)大和樹齡增加，蘋果樹腐爛病發(fā)生日趨嚴(yán)重。該病過去通常在老果園普遍發(fā)生嚴(yán)重，近年來一些幼樹、甚至苗木也出現(xiàn)了腐爛病，常常造成死枝、死樹甚至毀園，給蘋果生產(chǎn)造成巨大損失，嚴(yán)重影響我國蘋果產(chǎn)業(yè)的持續(xù)增長[2 ]。生產(chǎn)上對該病害的防治主要依賴化學(xué)藥劑，常用的藥劑有福美胂、腐必清等。前期調(diào)查發(fā)現(xiàn)，市場上防治腐爛病的藥劑種類繁多，魚目混雜。我們選用新型高效低毒藥劑戊唑醇、噻霉酮、吡唑醚菌酯進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，以期為天水地區(qū)蘋果腐爛病防治提供支持。

1? ?材料與方法

1.1? ?供試材料

從甘肅省天水市果樹研究所果園采集病樣，采用組織分離法[3 ]，從病果果皮部病健交界處切下3 mm×3 mm×1 mm的小塊，放入3%次氯酸鈉溶液中消毒30 s，然后用70%酒精消毒 30 s，無菌水清洗 3 遍后置無菌濾紙上自然晾干，接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA） 培養(yǎng)基上。在25 ℃條件下培養(yǎng)5 d后挑取菌落邊緣的菌絲進(jìn)行初步純化，按照柯赫氏法則進(jìn)行驗(yàn)證。將純化后的菌株接種在PDA試管斜面中，于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。菌株編號等見?。

供試藥劑：98%戊唑醇原藥，青島瀚生生物科技股份有限公司生產(chǎn);97.5% 吡唑醚菌酯原藥，青島瀚生生物科技股份有限公司生產(chǎn);95%噻霉酮原藥，江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)。

1.2? ?室內(nèi)毒力測定方法

1.2.1? ? 藥液配制? ? ?將戊唑醇、吡唑醚菌酯、噻霉酮原藥溶于二甲基亞砜中，配成10 000 μg/mL 的母液，于冰箱（ 4 ℃） 中貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2? ? 含藥培養(yǎng)基的配制? ? ?在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)培養(yǎng)基的用量，用移液槍吸取一定量的藥劑母液，將其加入溶化并冷卻至50 ℃左右的PDA培養(yǎng)基中，充分搖勻后等量倒入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，配制成含系列濃度藥劑的培養(yǎng)基。重復(fù) 4 次，以加入等量二甲基亞砜溶液處理為空白對照。

1.2.3? ? 蘋果腐爛病病菌對供試藥劑的敏感性測定

采用生長速率法。先將蘋果腐爛病菌在PDA培養(yǎng)基上活化5 d，用直徑為4.0 mm的打孔器從菌落邊緣打取菌餅，分別移接到含有戊唑醇、吡唑醚菌酯、噻霉酮5個(gè)梯度濃度（吡唑醚菌酯0.10、0.50、2.50、12.50、62.50 μg/mL;異菌脲 0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μg/mL;戊唑醇0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 μg/mL;噻霉酮0.80、1.60、3.20、6.40、12.80 μg/mL）的PDA平板上，置25 ℃恒溫培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)。

連續(xù)培養(yǎng)4 d后，用游標(biāo)卡尺測定菌落徑向線性生長量，求平均值，再減去4.0 mm菌餅直徑，即菌落增長直徑。測量每次重復(fù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算每處理對病原菌菌絲增長的抑制率。通過菌絲生長抑制概率值和藥劑濃度對數(shù)值之間的線性回歸分析，計(jì)算各藥劑對菌株的有效抑制中濃度（EC50）值。

菌絲抑制生長率 =[（對照菌落生長直徑-處理菌落生長直徑） /對照菌落生長直徑]×100。

2? ?結(jié)果與分析

3種殺菌劑對蘋果腐爛病病菌菌絲生長的抑制效果見表2。其中戊唑醇對供試8株蘋果腐爛病病菌的菌絲生長抑制作用最好，EC50值為0.000 29～0.109 54 μg/mL，均低于1.00 μg/mL，相關(guān)系數(shù)均在0.8以上。不同菌株間的敏感性差異顯著，戊唑醇對菌株P(guān)GFL-1抑制活性最高，EC50值為0.000 29 μg/mL;對菌株P(guān)GFL-2抑制活性最低，EC50值為0.109 54 μg/mL，兩者之間相差377倍。其次為吡唑醚菌酯，其對供試蘋果腐爛病病菌菌絲的生長抑制作用顯著，其EC50值為0.362 90～1.026 26 μg/mL，相關(guān)系數(shù)均在0.97以上，不同菌株間的敏感性差異較小，表現(xiàn)相對穩(wěn)定。噻霉酮對蘋果腐爛病菌的菌絲生長有一定的抑制作用，EC50為8.473 55～66.904 12 μg/mL，相關(guān)系數(shù)在0.91以上，不同菌株間的敏感性差異明顯。噻霉酮對菌株P(guān)GFL-1的抑制活性較好，EC50值為8.473 55 μg/mL;對菌株P(guān)GFL-3的抑制活性較差，EC50值高達(dá)66.904 14 μg/mL。從表3可知，同一菌株對不同殺菌劑的敏感性均表現(xiàn)出明顯差異，但從總體來看，3種殺菌劑的抑制活性由高到低為戊唑醇、吡唑醚菌酯、噻霉酮。

3? ?小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，戊唑醇對天水地區(qū)蘋果腐爛病病菌的抑制作用最強(qiáng)， 其EC50均低于1.0 μg/mL，平均EC50值為0.039 17 μg/mL;其次為吡唑醚菌酯，平均EC50值為0.609 40 μg/mL;噻霉酮對蘋果腐爛病菌的抑制作用較弱。該結(jié)果僅為室內(nèi)毒力測定的結(jié)果，田間防效有待于驗(yàn)證。

戊唑醇一種三唑類殺菌劑，具有高效、內(nèi)吸、廣譜等特點(diǎn)，為目前頗具開發(fā)應(yīng)用潛力的藥劑，對蘋果主要病害有較好的防治效果。王磊等 [4 ]研究表明，戊唑醇對蘋果腐爛病病菌菌絲生長抑制作用明顯，優(yōu)于其他藥劑。吡唑醚菌酯是一種新型、高效、低毒的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，對作物具有保護(hù)作用、治療作用、內(nèi)吸傳導(dǎo)性和耐雨水沖刷性能，持效期較長，應(yīng)用范圍較廣，也是防治蘋果病害的主要推薦藥劑。周建波等[5 ]等研究發(fā)現(xiàn)，室內(nèi)毒力測定吡唑醚菌酯對蘋果腐爛病病菌生長抑制作用強(qiáng)。噻霉酮屬于有機(jī)雜環(huán)類化合物，具有高效、廣譜、低毒、綠色環(huán)保等優(yōu)良特性，是防治多種細(xì)菌、真菌性病害的殺菌劑。馬永強(qiáng)等[6 ]研究表明，戊唑醇、吡唑醚菌酯對蘋果腐爛病病菌菌絲生長有一定的抑制作用。我們推薦選用戊唑醇、吡唑醚菌酯等藥劑對甘肅天水果區(qū)的蘋果腐爛病進(jìn)行化學(xué)防治，同時(shí)注意藥劑的交替和混配使用。

參考文獻(xiàn)：

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[6] 馬永強(qiáng)，李繼平，王? ?立，等.? 5種殺菌劑對蘋果樹腐爛病菌的抑制作用[J].? 甘肅農(nóng)業(yè)科技，2012（6）：20-22.

（本文責(zé)編：陳? ? 珩）