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    菌草灰樹花蛋白質(zhì)提取工藝優(yōu)化研究

    2018-09-10 22:57:41陳少美薛小蘭
    福建農(nóng)業(yè)科技 2018年2期
    關(guān)鍵詞:工藝優(yōu)化

    陳少美 薛小蘭

    摘要:利用正交法篩選菌草灰樹花蛋白質(zhì)最優(yōu)提取工藝,結(jié)果表明:提取因素對指標影響依次為C(細胞超聲破碎次數(shù))>D(浸提pH值)>B(浸提溫度)>A(料液比);最優(yōu)提取工藝為料液比1∶50、浸提溫度45℃、浸提pH值10、細胞超聲粉碎5次,提取率達到095%。

    關(guān)鍵詞:灰樹花;蛋白質(zhì)提?。还に噧?yōu)化

    DOI: 1013651/jcnkifjnykj201802011

    Optimization of Protein Extraction Technology for Grifola Frondosa

    CHEN Shaomei, XUE Xiaolan

    (Fujian Vocational College of Bioengineering, Fuzhou, Fujian 350007)

    Abstract: An orthogonal experimental design was used to optimize the protein extraction technology for Grifola frondosa. The results showed that the influence of extraction factors on the index was decreased in order C>D>B>A. The optimal extraction technology included, the ratio of material to liquid was 1∶50, the extracting temperature was 45℃, the pH value was 10, and 5 times of the cells ultrasonic crush, and under these conditions, the extraction rate for protein of Grifola frondosa reached 095%.

    Key words: Grifola frondosa; protein extraction; technology optimization

    灰樹花俗稱“栗子蘑”,又名貝葉多孔菌、蓮花菌等,隸屬于擔子菌綱、多孔菌目。灰樹花是一種十分珍貴的藥用真菌[1],化學(xué)成分主要包括多糖、蛋白質(zhì)、核酸、多酚等,除多糖外,灰樹花中含量較高的另一功能性成分是蛋白質(zhì), Nanba h等[2]最早發(fā)現(xiàn)了灰樹花中的抗腫瘤多糖,其組分中含有1%~20%的蛋白可能具有獨特作用。另研究表明,從灰樹花中提取的小分子蛋白具有抗單純孢疹病毒I型的作用[3]。Tsao y w等[4]研究發(fā)現(xiàn)灰樹花蛋白具有刺激小鼠樹突狀細胞和增強小鼠抗腫瘤免疫的功能。

    國內(nèi)對灰樹花菌絲體蛋白的提取工藝鮮有報道。真菌蛋白的提取一般采用堿提法或水浸提法,但耗時長而且效率較低[5-6]。為提高提取效率和縮短提取時間,通過正交試驗對提取條件進行優(yōu)化,以期為灰樹花蛋白提取提供參考。

    1材料與方法

    11材料與試劑

    灰樹花干品(來源于浙江金華)粉碎過篩備用。試劑:硫酸銨、氫氧化鈉、鹽酸、乙醇、磷酸(以上試劑均為分析純),考馬斯亮藍G-250。

    12儀器與設(shè)備

    細胞超聲粉碎機(scientz-ⅡD)、高速冷凍離心機(sigma1-15k)、紫外分光光度計(T6)。

    13方法

    稱取一定量的灰樹花干粉,一定料液比細胞超聲破碎,在一定溫度下堿液溶解、過濾,取上清液加硫酸銨固體(20%)→靜置,離心(10000 r·min-1, 10℃,20 min)→取上清液,繼續(xù)加硫酸銨固體(80%)→離心(10 000 r·min-1, 10℃,20 min),棄去上清液,留取粗蛋白,待透析完全后冷凍干燥備用。

    稱考馬斯亮藍G-25020 mg,溶于20 mL 95%的乙醇后,再加入85%的磷酸20 mL,稀釋至100 mL。標準蛋白質(zhì)溶液配制:用牛血清蛋白(BSA)配制成10 mg·mL-1標準蛋白質(zhì)溶液。樣品蛋白配制:取透析完全的蛋白經(jīng)冷凍干燥按20 μg·mL-1,在波長595 nm下比色,測定吸光度值。

    14提取工藝優(yōu)化設(shè)計

    141單因素試驗設(shè)計干粉→水浸提→細胞破碎→堿液下溶解,分別研究A料液比(1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70)、B浸提溫度(30、35、40、45、50、55、60)℃、C細胞超聲破碎次數(shù)(4、5、6)、D浸提pH值(80、85、90、95、100、105、110)4個因素對提取率的影響。

    陳少美等:菌草灰樹花蛋白質(zhì)提取工藝優(yōu)化研究2018年第2期2018年第2期陳少美等:菌草灰樹花蛋白質(zhì)提取工藝優(yōu)化研究142正交法試驗設(shè)計在單因素的基礎(chǔ)上,采用L9(34)正交試驗設(shè)計料液比、浸提溫度、pH值、超聲破碎對蛋白質(zhì)提取的影響,確定最優(yōu)提取工藝條件。各因素及水平設(shè)計見下表1。

    2結(jié)果與分析

    21單因素試驗結(jié)果

    211料液比對提取率的影響從圖1可知,隨料液比增加,蛋白質(zhì)提取率呈提高趨勢,料液比在1∶40時提取率達最大值;繼續(xù)增加,提取率無明顯提高。說明最佳料液比區(qū)間1∶30~50。

    212浸提溫度對提取率的影響從圖2可知,隨著浸提溫度升高,提取率增加,在50℃時達最大值,隨后呈降低趨勢。最佳浸提溫度區(qū)間40~50℃。

    213細胞超聲破碎次數(shù)對提取率的影響由圖3可知,超聲次數(shù)在5次后提取率保持穩(wěn)定,溶出物較完全。因此超聲次數(shù)以5次為最佳。

    214浸提溶液pH值對提取率的影響由圖4可知,浸提pH值100時提取率達最大值,pH值 大于105提取率呈降低趨勢。表明提取pH值100左右為最佳。

    3結(jié)論

    在單因素試驗的基礎(chǔ)上,正交試驗得到灰樹花子實體蛋白質(zhì)提取因素對提取率影響的次序為:C>D>B>A,采用的最佳工藝條件組合為:C3D2B2A2,即料液比1∶50、浸提溫度45℃、浸提pH值10、細胞超聲粉碎5次,該組合下提取率達到095%。該工藝操作簡便,提取效果好,可用于工業(yè)化生產(chǎn)。

    參考文獻:

    [1]吳智艷,閆訓(xùn)友,等灰樹花生理活性物質(zhì)的研究進展[J]北方園藝,2006(6):173-174

    [2]NANBA H,HAMAGUCHI A,KURODA H.The chemical stmcture of an antitumor polysaccharide in fruit bodies of Grifola frondosa (maital)[J].Chem Pharm Bull,1987,35(3):1162-1168.

    [3]GU C Q,U J W,CHA0 FH,et al.Isolation,identification and function of a novel anti-HSV-l protein from Grifola frondosa[J]Antivir Res,2007,75(3):250-257.

    [4]TSAO Y W,KUAN Y C,WANG J L,et a1.Characterization of a noveI maitake(Grifola frondosa ) protein that activates nation Killer and dendritic cells and enhances antitumor immunity in mice[J].J Agr Food Chem,2013,6l(41):9828-9838.

    [5]敖宏,黃生權(quán),陳建旭,等.赤靈芝中醇溶性蛋白提取工藝研究[J].現(xiàn)代食品科技,2009, 25 (6):661-664.

    [6]陳貴堂,王麗敏,姚舒愉,等.灰樹花子實體多糖和蛋白的同步提取工藝優(yōu)化[J].食品科技,2014,39(7):248-251,257.

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