100份朝天椒的農(nóng)藝性狀和SRAP標(biāo)記遺傳多樣性分析

曾紹貴， 朱邦彤， 羅木旺， 邱胤暉， 羅 英， 林淑婷

(1.三明市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，福建 沙縣 365509； 2.沙縣農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，福建 沙縣 365509)

朝天椒(Capsicumannuum.L)辣味足、產(chǎn)量較高，是優(yōu)良的鮮食和加工蔬菜。朝天椒是按果實(shí)著生狀態(tài)，對椒果朝天或斜朝天生長這一類群辣椒的統(tǒng)稱，包括分類上辣椒栽培種的5個(gè)變種：簇生椒、圓錐椒(小果型)、長辣椒(短指形)、櫻桃椒和燈籠椒[1]。

種質(zhì)資源的遺傳多樣性分析是育種工作中的重要內(nèi)容，在實(shí)際工作中育種家往往憑借經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行品種的選配，這成為限制育種精準(zhǔn)性的重要因素[2]。在常規(guī)育種中，由于育種開展研究時(shí)間長和選育技術(shù)的同質(zhì)化及基礎(chǔ)育種材料在各育種單位間廣泛交換，使得育成品種的相似性很大。應(yīng)用分子標(biāo)記可以對種質(zhì)資源、雜交親本和后代個(gè)體進(jìn)行大規(guī)模的基因型鑒定，構(gòu)建遺傳圖譜，并與表型數(shù)據(jù)建立聯(lián)系，從而大大提高育種效率和規(guī)模。利用分子標(biāo)記對種質(zhì)資源進(jìn)行親緣關(guān)系分析，準(zhǔn)確性高、操作簡單，在眾多大田作物中得到了廣泛的應(yīng)用。馬榮麗等[3]對225份類型多樣的辣椒資源的11個(gè)表型性狀進(jìn)行遺傳多樣性分析。耿廣東等[4]對92份辣椒材料的11個(gè)表型性狀進(jìn)行聚類分析，將一些來源相同或相近的聚在一起。張素勤等[5]通過對貴州省不同地區(qū)的61份辣椒種質(zhì)資源進(jìn)行表型和SRAP分析，以探索貴州辣椒種質(zhì)的親緣關(guān)系和遺傳多樣性。許先松等[6]采用形態(tài)學(xué)標(biāo)記與序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性(SRAP)分子標(biāo)記相結(jié)合的手段，分別對49份和72份辣椒資源的遺傳多樣性及親緣關(guān)系進(jìn)行了分析。

為了提高親本的選擇效率，提高朝天椒新品種選育進(jìn)程中的預(yù)見性和可靠性，在現(xiàn)有的朝天椒種質(zhì)資源基礎(chǔ)上，有必要對其進(jìn)行進(jìn)一步拓展。本試驗(yàn)以100份朝天椒材料為研究對象，采用SRAP標(biāo)記技術(shù)和傳統(tǒng)表型聚類分析對朝天椒進(jìn)行親緣關(guān)系的鑒定，分別從朝天椒的形態(tài)差異及起源進(jìn)化上進(jìn)行分析，為配制雜交組合、提高新品種選育效率提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)選取的100份朝天椒是三明市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院蔬菜研究所近年來收集和自主培育的品種，分別來自中國(湖南、河南、福建等)、韓國、印度等主要國家(地區(qū))的特色品種(表1)。試驗(yàn)于2016年8月-2017年2月在福建省三明市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院蔬菜研究所試驗(yàn)田進(jìn)行。試驗(yàn)于2017年1月15日按品種單株隨機(jī)取材，采取新鮮嫩葉，每個(gè)品種單株進(jìn)行3次重復(fù)，保存-80 ℃冰箱備用。試驗(yàn)于2017年2月20日分別對100份朝天椒具有本品種典型性狀的10株植株進(jìn)行主要農(nóng)藝性狀的調(diào)查。為保證實(shí)驗(yàn)的客觀性，所有供試材料采用編號，試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)后才將編號與供試材料名稱對應(yīng)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 主要農(nóng)藝性狀觀察記載與朝天椒主要農(nóng)藝性狀表型分析 表型性狀調(diào)查和數(shù)據(jù)采集方法參考《植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南——辣椒》[7]進(jìn)行，每份材料隨機(jī)調(diào)查記錄生長正常植株10株，共測量11個(gè)表型性狀(表2)。

為了揭示各品種性狀間的相互關(guān)系，為朝天椒新品種選育以及種質(zhì)資源創(chuàng)新提供參考信息，對收集記載的100份朝天椒農(nóng)藝性狀數(shù)據(jù)，利用SPSS Statistics 19軟件進(jìn)行相關(guān)系數(shù)的計(jì)算，主成分分析和數(shù)量性狀的表型變異分析；利用Hierarchical cluster進(jìn)行分層聚類，構(gòu)建100份朝天椒農(nóng)藝性狀表型層次聚類譜系圖。

1.2.2 DNA提取 采用改良的CTAB法提取100份朝天椒基因組DNA。用1.5%瓊脂糖檢測質(zhì)量，用紫外分光光度計(jì)將DNA質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)化為50 ng/μl。

1.2.3 SRAP反應(yīng)體系及擴(kuò)增程序 SRAP-PCR總反應(yīng)體積為20 μl：2 μl 10×Buffer，0.4 μl dNTP(10 mmol/L)，上下游特異性隨機(jī)引物組合各0.5 μl(50 pmol/μl)，0.6 μlTaqDNA聚合酶(1.5 U/μl)，1 μl模版DNA(50 ng/μl)和15.0 μl無菌ddH20。SRAP-PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃條件下預(yù)變性3 min；94 ℃變性40 s，56 ℃退火30 s，72 ℃復(fù)性5 min，40次循環(huán)，最后72 ℃延伸8 min，4 ℃條件下停止反應(yīng)。

1.2.4 引物篩選 利用表型差異較大的朝天椒材料，進(jìn)行SRAP特異引物組合的篩選，鑒定出條帶清晰、多態(tài)性高的核心引物進(jìn)行遺傳多樣性分析，淘汰擴(kuò)增效果差、帶型不易辨認(rèn)的引物組合。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 利用Microsoft Excel 2016和Ntedit1.2軟件分析相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性獲得的特異條帶，對于凝膠電泳圖上的某個(gè)相同遷移位置上有DNA條帶賦值為1，無特異性條帶的賦值為0，缺項(xiàng)賦值為9。利用NTsys2.10e軟件，根據(jù)Nei-Li計(jì)算相似系數(shù)，按非加權(quán)配對算數(shù)平均法(UPGMA)進(jìn)行SAHN聚類分析，最后利用Tree plot程序生成構(gòu)建100份朝天椒的親緣關(guān)系樹狀圖。

表1供試材料編號與名稱

Table1Thenumberandnameofmaterial

編號 親本名稱親本來源類型編號 親本名稱親本來源親本類型1沙縣東門黃朝天椒福建沙縣單生朝天椒51永安青水子彈頭福建永安單生朝天椒2沙縣東門紅朝天椒福建沙縣單生朝天椒52將樂朝天椒福建將樂單生朝天椒3沙縣大洲大子彈頭福建沙縣單生朝天椒53建寧朝天椒福建建寧單生朝天椒4沙縣大洲小子彈頭福建沙縣單生朝天椒54清流小米椒福建清流單生朝天椒5沙縣西霞小米辣福建沙縣單生朝天椒55清流指天椒福建清流單生朝天椒6沙縣夏茂朝天椒福建沙縣單生朝天椒56寧化指天椒福建寧化單生朝天椒7永安朝天黃椒福建永安單生朝天椒57寧化小米椒福建寧化單生朝天椒8永安青水朝天椒福建永安單生朝天椒58寧化治平朝天椒福建寧化單生朝天椒9大田梅山王中王福建大田單生朝天椒59寧化曹坊朝天椒福建寧化單生朝天椒10大田子彈頭福建大田單生朝天椒60寧化安遠(yuǎn)朝天椒福建寧化單生朝天椒11大田簇生朝天椒福建大田簇生朝天椒61湖南汝城小米辣湖南汝城單生朝天椒12尤溪管前朝天椒福建尤溪單生朝天椒62貴州朝天椒貴州遵義單生朝天椒13尤溪簇生朝天椒福建尤溪簇生朝天椒63韓國朝天椒韓國單生朝天椒14尤溪小米辣福建尤溪單生朝天椒64泰國朝天椒泰國單生朝天椒15尤溪單生朝天椒福建尤溪單生朝天椒65韓國單生朝天椒韓國單生朝天椒16尤溪子彈對福建尤溪單生朝天椒66韓國簇生朝天椒韓國簇生朝天椒17沙縣東門子彈頭福建沙縣單生朝天椒67貴州遵義朝天椒貴州遵義單生朝天椒18沙縣東門朝天黃椒福建沙縣單生朝天椒68貴州遵義小米辣椒貴州遵義單生朝天椒19河南三鷹椒河南鐵門簇生朝天椒69日本山鷹椒日本簇生朝天椒20湖南小米辣湖南衡陽單生朝天椒70河南三鷹椒河南鐵門簇生朝天椒21湖南圓錐椒湖南衡陽單生朝天椒71河大果三鷹椒河南鐵門簇生朝天椒22湖南朝天黃椒湖南衡陽簇生朝天椒72河南散生子彈頭河南鐵門單生朝天椒23政和朝天椒福建政和單生朝天椒73安徽朝天椒安徽亳州單生朝天椒24政和小米辣福建政和單生朝天椒74高棵簇生子彈頭安徽亳州簇生朝天椒25政和單生朝天椒福建政和單生朝天椒75安徽簇生子彈頭安徽懷遠(yuǎn)簇生朝天椒26永安朝天黃椒福建永安單生朝天椒76安徽櫻桃椒安徽懷遠(yuǎn)單生朝天椒27永安櫻桃椒福建永安單生朝天椒77安徽圓錐椒安徽懷遠(yuǎn)單生朝天椒28永安簇生朝天黃椒福建永安78安徽燈籠椒安徽懷遠(yuǎn)單生朝天椒29政和朝天椒福建政和單生朝天椒79安徽三鷹椒安徽懷遠(yuǎn)簇生朝天椒30政和子彈頭福建政和單生朝天椒80河南燈籠椒河南鐵門單生朝天椒31政和小米辣福建政和單生朝天椒81河南朝天黃椒河南鐵門單生朝天椒32政和朝天椒福建政和單生朝天椒82河南長辣椒河南鐵門單生朝天椒33海南圓錐椒海南樂東單生朝天椒83河南單生朝天椒河南鐵門單生朝天椒34海南新一代朝天椒海南樂東單生朝天椒84河南長辣椒河南鐵門單生朝天椒35屏南朝天椒福建屏南單生朝天椒85河南櫻桃椒河南鐵門單生朝天椒36重慶小米辣椒重慶長壩單生朝天椒86建甌朝天椒福建建甌單生朝天椒37重慶大果朝天椒重慶長壩單生朝天椒87建陽簇生朝天黃椒福建建陽簇生朝天椒38重慶石柱紅重慶長壩單生朝天椒88建陽朝天黃椒福建建陽單生朝天椒39重慶特辣石柱紅重慶長壩單生朝天椒89建陽圓錐椒福建建陽單生朝天椒40重慶子彈頭重慶長壩單生朝天椒90建陽朝天椒福建建陽單生朝天椒41云南小米辣云南硯山單生朝天椒91建陽子彈頭福建建陽單生朝天椒42云南朝天椒云南硯山單生朝天椒92沙縣西霞櫻桃椒福建沙縣單生朝天椒43云南指天椒云南硯山單生朝天椒93沙縣西霞子彈頭福建沙縣單生朝天椒44云南子彈頭云南硯山單生朝天椒94沙縣西霞燈籠椒福建沙縣單生朝天椒45云南野山椒云南硯山單生朝天椒95寧化小米辣福建寧化單生朝天椒46云南燈籠椒云南硯山單生朝天椒96寧化朝天黃椒福建寧化單生朝天椒47云南櫻桃椒云南硯山單生朝天椒97海南簇生朝天椒海南樂東簇生朝天椒48重慶圓錐椒重慶長壩單生朝天椒98海南單生朝天椒海南樂東單生朝天椒49重慶櫻桃椒重慶長壩單生朝天椒99海南小米辣海南樂東單生朝天椒50重慶燈籠椒重慶長壩單生朝天椒100海南大果朝天椒海南樂東單生朝天椒

表2測量的農(nóng)藝性狀

Table2Theagronomictraitsmeasuredinthisstudy

標(biāo)號名稱說明備注X1株高 (cm)地面植株基部至全株最高處X2開展度 (cm)植株左右寬度X3莖粗 (cm)第一朵花下橫徑X4葉長 (cm)葉片的長度于植株中部隨機(jī)取10片葉測量X5葉寬 (cm)葉片的寬度X6果縱徑 (cm)果最長部分縱徑于盛收期隨機(jī)取10個(gè)果實(shí)測量X7果橫徑 (cm)果最長部分橫徑X8果肉厚 (cm)果肉的厚度在果實(shí)的果肩部橫切后測量X9果柄長 (cm)果實(shí)和莖連接的部位的長度X10單果質(zhì)量 (g)成熟期的果實(shí)質(zhì)量X11單株果數(shù)單株上所有的果實(shí)數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 朝天椒主要農(nóng)藝性狀表型遺傳多樣性分析

2.1.1 朝天椒表型變異分析 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明(表3)，表型性狀存在不同程度的變異，變異系數(shù)平均值為24.80%。

2.1.2 朝天椒表型相關(guān)性分析 通過對朝天椒11個(gè)表型性狀間的相關(guān)性分析可知(表4)，株高、果橫徑、果肉厚、莖粗和開展度間呈顯著正相關(guān)，葉長、葉寬、果柄長和株高間呈極顯著正相關(guān)，開展度與單果質(zhì)量間呈極顯著正相關(guān)，葉寬、果柄長、單果質(zhì)量和葉長呈極顯著正相關(guān)，葉寬和單果質(zhì)量呈顯著相關(guān)，葉寬和果柄長呈極顯著正相關(guān)，果橫徑和果縱徑呈顯著負(fù)相關(guān)，果柄長和果縱徑呈極顯著正相關(guān)，單果質(zhì)量和果縱徑呈顯著相關(guān)，果肉厚、單果質(zhì)量和果橫徑呈極顯著正相關(guān)，果橫徑和果柄長呈極顯著負(fù)相關(guān)，果肉厚和果柄長呈顯著負(fù)相關(guān)，果肉厚和單株果數(shù)呈極顯著負(fù)相關(guān)，果肉厚和單果質(zhì)量呈極顯著正相關(guān)，單果質(zhì)量和單株果數(shù)呈極顯著負(fù)相關(guān)。由此可以推斷，果肉較厚、果實(shí)橫徑和縱徑較大的品種，對產(chǎn)量和單果質(zhì)量影響較大。

表3朝天椒資源數(shù)量性狀的表型變異分析

Table3PhenotypicvariationanalysisofquantitativecharactersinCapsicumannuum

形態(tài)學(xué)性狀極小值極大值均值標(biāo)準(zhǔn)差株高 (cm)30.095.058.94011.930開展度 (cm)26.075.052.70010.520莖粗 (cm)0.71.50.9710.178葉長 (cm)6.521.511.9292.601葉寬 (cm)3.09.05.6101.186果縱徑 (cm)0.613.56.0031.895果橫徑 (cm)0.83.51.9110.452果肉厚 (cm)0.10.30.1890.044果柄長 (cm)1.24.02.3100.555單果質(zhì)量 (g)3.116.67.4672.569單株果數(shù)12.072.032.96011.171

表4朝天椒各性狀間的相關(guān)系數(shù)

Table4CorrelationcoefficientofmainagronomiccharactersinCapsicumannuum

X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X11.000X20.212*1.000X30.1160.248*1.000X40.355**0.0930.1781.000X50.341**0.1050.0650.877**1.000X60.126-0.1100.0850.1690.1691.000X70.1390.251*0.005-0.060-0.062-0.250*1.000X80.0960.248*0.0880.019-0.014-0.0460.431**1.000X90.275**-0.1130.1430.392**0.298**0.384**-0.299**-0.224*1.000X100.1260.346**0.0630.270**0.220*0.236*0.312**0.501**-0.0631.000X110.1340.061-0.005-0.1040.069-0.060-0.165-0.267**0.153-0.469**1.000

X1～X11見表2。**表示在0.01水平相關(guān)性顯著；*表示在0.05水平相關(guān)性顯著。

2.1.3 朝天椒表型聚類分析 100份朝天椒材料的11個(gè)農(nóng)藝性狀聚類分析結(jié)果見圖1,在歐式距離為20處，100份朝天椒材料劃分為2大類群：第一類群包含42份材料，第二類包括58份材料。在歐式距離為14處則被分為4個(gè)群組，分別依次命名為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ。

第Ⅰ群組包含18份材料(85、96、83、84、7、88、78、91、77、86、87、44、89、95、92、43、94和93)。第Ⅱ群組包含24份材料(60、70、65、33、53、39、61、64、74、29、30、31、45、90、56、79、72、81、17、76、36、50、35和6)。第Ⅲ群組包含5份材料(58、69、59、67和68)。第Ⅳ群組包含53份材料(57、82、18、51、10、32、49、14、9、16、34、20、38、52、11、54、13、47、12、22、48、55、73、71、42、75、41、1、26、23、62、40、46、97、98、99、100、3、27、66、28、80、8、37、15、19、4、5、2、21、25、24和63)。

2.2 朝天椒SRAP遺傳多樣性分析

2.2.1 分子標(biāo)記在朝天椒群體中擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性分析 利用4份表型差異較大的朝天椒DNA樣品對SRAP引物組合進(jìn)行篩選，最終確定8對引物序列組合(表5)用于SRAP-PCR反應(yīng)以研究100份朝天椒材料的遺傳多樣性。PCR擴(kuò)增累計(jì)擴(kuò)增出76條譜帶，其中多態(tài)性譜帶有61條，總的多態(tài)性比率為80.3%，各引物多態(tài)性比率為 71.4%～87.5%。

2.2.2 朝天椒遺傳多樣性分析及聚類分析 根據(jù)朝天椒種質(zhì)資源材料的SRAP擴(kuò)增結(jié)果，按非加權(quán)配對算數(shù)平均法(UPGMA)進(jìn)行SAHN聚類分析，得到親緣關(guān)系聚類分析樹狀圖(圖2)。以遺傳相似系數(shù)0.77為閥值，利用NTsys2.10e軟件，根據(jù)Nei-Li計(jì)算的相似系數(shù)為 0.77～1.00，在相似系數(shù)為0.815處，100份朝天椒材料被明顯地分為2大類：第一類包括47份材料，第二類包括53份材料。在遺傳相似系數(shù)為0.810處，朝天椒材料被分為7個(gè)群組，分別依次命名為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ。

第Ⅰ群組包含40份材料(1、2、4、16、17、18、3、19、14、15、13、5、25、27、26、28、31、66、76、37、73、38、64、62、63、53、89、6、7、41、42、43、61、54、49、51、52、50、88和90)。第Ⅱ群組包含5份材料(65、74、75、77和87)。第Ⅲ群組包含2份材料(29和39)。第Ⅳ群組包含37份材料(8、11、12、35、9、10、20、81、80、82、21、24、22、23、40、44、57、58、59、67、68、69、79、93、95、45、84、47、48、55、56、91、92、94、60、83和86)。第Ⅴ群組包含10份材料(30、32、33、34、36、46、97、98、99和100)。第Ⅵ群組包含3份材料(71、72和78)。第Ⅶ群組包含3份材料(70、96和85)。

材料1～100見表1。圖1 100份朝天椒材料表型性狀聚類圖Fig.1 Cluster graph of phenotypic traits in Capsicum annuum

表5不同SRAP引物組合和100份朝天椒種質(zhì)中擴(kuò)增出的多態(tài)性

Table5Polymorphismin100samplesofCapsicumannuumamplifiedbydifferentSRAPprimers

引物組合總帶數(shù)多態(tài)性帶數(shù)多態(tài)性比率(%)EM1-EM56583.3EM10-EM48787.5EM11-EM1211981.8EM13-EM77571.4EM13-EM810990.0EM13-EM109777.8EM13-EM12131076.9EM13-EM1312975.0總計(jì)766180.3

圖2 100份朝天椒種質(zhì)資源材料的SRAP聚類分析Fig.2 SRAP cluster analysis of Capsicum annuum

3 討 論

植物種質(zhì)資源是發(fā)展農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，開展作物育種和進(jìn)行生物技術(shù)研究的物質(zhì)基礎(chǔ)[8]。植物的農(nóng)藝性狀是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用表現(xiàn)出的結(jié)果。

3.1 表型相關(guān)分析

表型性狀兼具穩(wěn)定性和變異性，既是遺傳變異的特征，也易受環(huán)境的影響[9]。葉長和葉寬相關(guān)系數(shù)最大(0.877)，呈極顯著正相關(guān)，說明葉長較長的朝天椒品種其葉寬也較寬。單株果數(shù)和單果質(zhì)量是朝天椒產(chǎn)量構(gòu)成的重要因素，而單株果數(shù)與果肉厚和單果質(zhì)量呈極顯著負(fù)相關(guān)，單果質(zhì)量與開展度、葉長、果橫徑、果肉厚呈極顯著正相關(guān)，說明朝天椒產(chǎn)量是一個(gè)較為綜合的指標(biāo)。因此，從高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的育種目標(biāo)出發(fā)，良種選育過程雖然產(chǎn)量受到諸多因素的影響，但也應(yīng)優(yōu)先選擇單株果數(shù)、果肉厚、單果質(zhì)量這3個(gè)性狀指標(biāo)。

3.2 表型變異分析

株高的標(biāo)準(zhǔn)差與方差最大，變異系數(shù)為 10%～100%，為中等變異，引進(jìn)的材料可以為品種改良提供用處。單果質(zhì)量的變異系數(shù)達(dá)到最大值，而變異系數(shù)值較大的性狀可以作為遺傳育種改良的首選特征，通過有目的的良種選育較容易獲得單果質(zhì)量較大的品種。

3.3 表型聚類分析

在第Ⅰ群組中編號為83、84、85、86、87、88、89這7份材料均由同一個(gè)系統(tǒng)選育的品種以及衍生自交分離后育成的品種，其農(nóng)藝性狀(株高、開展度和莖粗等)表現(xiàn)較為相似，在朝天椒果實(shí)色澤上表現(xiàn)不同(紅色、黃色)以及果形指數(shù)表現(xiàn)不同。第Ⅰ群組中的沙縣西霞櫻桃椒、沙縣西霞子彈頭、沙縣西霞燈籠椒、寧化小米辣、寧化朝天椒屬于三明地區(qū)引進(jìn)的親本材料，在聚類分析中與河南朝天椒分在同一個(gè)群組，說明三明地區(qū)部分朝天椒材料是通過引進(jìn)河南的親本，通過人工選育后，進(jìn)行多代自交純化而成的。第Ⅲ群組中的寧化治平朝天椒、寧化曹坊朝天椒與貴州遵義朝天椒、貴州遵義小米辣、日本山鷹椒分在同一群組，這些材料的朝天椒主要農(nóng)藝性狀較為相似，例如單果質(zhì)量、果縱徑等方面。第Ⅳ群組中的三明大田、三明尤溪、三明將樂朝天椒材料分在同一群組，表現(xiàn)為生態(tài)環(huán)境相似，地理來源相鄰地區(qū)的遺傳關(guān)系較近。海南簇生朝天椒、海南單生朝天椒、海南小米辣、海南大果朝天椒分在同一群組，這些材料葉長、株高、開展度等農(nóng)藝性狀較為相似。第Ⅱ群組的24份樣本材料只是將農(nóng)藝性狀相似的朝天椒材料聚在一起，沒有體現(xiàn)出地理相似性。

3.4 SRAP分析

每對引物擴(kuò)增出的譜帶數(shù)為6至13之間，平均每對引物擴(kuò)增出的條帶為9.5個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，擴(kuò)增位點(diǎn)的分子量主要分布于 200～2 000 bp。EM13和EM8標(biāo)記的譜帶存在明顯多態(tài)性分布，能夠較好地鑒別出不同的朝天椒DNA材料，EM13和EM8引物組合共擴(kuò)增出10條譜帶，其中9條屬于多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性比率達(dá)90%。從引物組合EM13和EM8對100份朝天椒的SRAP擴(kuò)增結(jié)果可以看出，有明顯不同片段大小的光亮條帶分布，不同品種材料之間存在差異，也有部分條帶趨于一致，可能是由于選取的100份朝天椒材料有部分是通過雜交優(yōu)勢育種后自交提純出的材料，由于基因組高度一致，因此經(jīng)引物篩選出的條帶大體一致。

3.5 SRAP聚類分析

SRAP聚類分析結(jié)果與表型聚類結(jié)果不同的是許多來源同一地區(qū)(縣、市)的朝天椒材料并沒有聚為同一類，這可能是由于在系統(tǒng)選育的過程中，不同種質(zhì)材料相互間進(jìn)行多個(gè)親本復(fù)合雜交以及多項(xiàng)選擇，產(chǎn)生了較大的遺傳變異所致。第Ⅴ群組包括10份種質(zhì)材料，這些材料具有高度的一致性，由于這些種質(zhì)材料是由同一個(gè)單株分離出的，在人工選育時(shí)可能是更多地選擇了父本的優(yōu)良性狀而較少選擇母本性狀造成的。經(jīng)大田觀察，這幾個(gè)新品種在物候期等多個(gè)形狀上與父本非常接近，這一事實(shí)也很好地解釋了上述推測。這些種質(zhì)材料的單株果數(shù)較少，對應(yīng)的折算產(chǎn)量也較低，但其生長勢較旺盛，可作為強(qiáng)株復(fù)壯的材料。

如今SRAP分子標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用在辣椒的種質(zhì)資源遺傳多樣性研究當(dāng)中，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其多態(tài)性較高，能較準(zhǔn)確聚類100份朝天椒材料，為解決朝天椒育種過程中親本選擇效率低、育種進(jìn)程慢的技術(shù)問題提供了借鑒。