兒童哮喘發(fā)作期血清調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞表達(dá)分析

郝亮亮， 趙雅娟， 楊曉彤， 李哲

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究顯示，支氣管哮喘發(fā)生、進(jìn)展與體內(nèi)各種細(xì)胞免疫失衡關(guān)系密切，屬于祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“哮病”范疇[1-3]。兒童時(shí)期是支氣管哮喘疾病好發(fā)年齡段，較為常見(jiàn)的支氣管哮喘中醫(yī)證型為寒哮證和熱哮證[4-5]，但迄今為止，國(guó)內(nèi)涉及不同中醫(yī)證型的支氣管哮喘患兒免疫學(xué)相關(guān)研究報(bào)道不多。為此，我們選擇了一組近期來(lái)本院就診和住院治療的寒哮證和熱哮證患兒為對(duì)象，觀察血清調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和輔助性T細(xì)胞(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)表達(dá)濃度，并與同期參加體檢結(jié)論健康兒童(對(duì)照組)比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年10月至12月沈陽(yáng)市兒童醫(yī)院收治的支氣管哮喘患兒55例為研究對(duì)象，根據(jù)臨床表現(xiàn)所屬的中醫(yī)證候類(lèi)型分為寒哮證組26例和熱哮證組29例。同期選取參加體檢結(jié)論健康兒童為對(duì)照組28例。3組兒童在年齡、性別方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 3組對(duì)象基線參數(shù)資料比較

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸學(xué)組2008年修訂的《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》關(guān)于兒童支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。

1.2.2 中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn) 參照《中醫(yī)兒科學(xué)》[7]和其他文獻(xiàn)[8]擬定中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)，主癥:(1)反復(fù)發(fā)作、喘促氣急；(2)喉間痰鳴；(3)咳嗽。次癥：(1)寒性哮喘：①形寒怕冷；②鼻塞、涕清或有噴嚏；③痰白、易咯、泡沫多；④渴喜熱飲或不渴；⑤無(wú)汗；⑥大便溏薄、小便清長(zhǎng)；⑦舌淡紅；⑧脈浮緊或浮滑、舌苔薄白或白滑、指紋紅。(2)熱性哮喘：①面赤身熱；②鼻塞、涕濁；③痰多、黏濁稠厚、色黃；④煩躁不寧；⑤口渴喜飲；⑥大便干、小便赤黃；⑦舌質(zhì)紅；⑧苔黃膩或薄黃、脈滑數(shù)或浮數(shù)、指紋紫。入選患兒具備主癥3項(xiàng)加次癥4項(xiàng)，同時(shí)參考舌苔脈象、指紋，即可明確證型。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合兒童支氣管哮喘的中西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)病情為哮喘急性發(fā)作期；(3)年齡3～14歲；(4)患兒家屬知情同意。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)近期患有急、慢性感染性疾病者；(2)心、肝、腎功能異常者；(3)近期接受過(guò)激素或免疫抑制劑治療者。

1.5 外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞表達(dá)水平測(cè)定 各組入選對(duì)象均在空腹8 h后采集靜脈血8 mL，然后高速離心、分離血清，并保存于-18 ℃低溫冰箱待檢。各類(lèi)T細(xì)胞濃度檢測(cè)機(jī)器采用美國(guó)FC-500-M型PL流式細(xì)胞儀，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)檢測(cè)使用E-Bioscience公司提供的試劑盒；輔助性T細(xì)胞(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)檢測(cè)使用北京江晨宏偉生物科技有限責(zé)任公司提供的試劑盒。操作分別依據(jù)各試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對(duì)象血清調(diào)節(jié)性T細(xì)胞濃度比較 見(jiàn)表2。

表2 3組研究對(duì)象血清調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)濃度比較

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與寒哮證組比較，bP<0.05。

表2結(jié)果表明，寒哮證組和熱哮證組血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg濃度顯著低于對(duì)照組，寒哮證組血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg濃度顯著低于熱哮證組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 3組研究對(duì)象血清輔助性T細(xì)胞濃度比較 見(jiàn)表3。

表3 3組研究對(duì)象血清輔助性T細(xì)胞表達(dá)濃度比較

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與寒哮證組比較，bP<0.05。

表3結(jié)果表明，寒哮證組和熱哮證組血清CD4+濃度顯著高于對(duì)照組，而血清CD8+濃度及CD4+/CD8+比值均顯著低于對(duì)照組；寒哮證組血清CD4+和CD8+濃度顯著低于熱哮證組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為“哮病”的宿根歸結(jié)于“伏痰”，也就是“痰濁內(nèi)伏”和“膈有膠固之痰”，病機(jī)是伏痰遇感后引觸，痰隨氣長(zhǎng)，氣被痰所阻，相互黏結(jié)，壅塞于氣道后致病[9-10]?！跋　卑l(fā)作期中，素體陽(yáng)虛，外感于寒為冷哮；素體陽(yáng)盛，外感于熱為熱哮，并分別以“寒痰證”和“熱痰證”進(jìn)行辨證醫(yī)治。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，支氣管哮喘發(fā)病過(guò)程由T細(xì)胞參與，特別是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和輔助性T細(xì)胞(CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)[10-13]。CD4 CD25+Treg屬于CD4+中一個(gè)亞型，主要功能抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞及激活傳統(tǒng)T細(xì)胞，促進(jìn)特定細(xì)胞因子分泌等；CD4+CD25+Foxp3+Treg屬于X染色體結(jié)構(gòu)中Foxp3轉(zhuǎn)錄因子，提供CD4 CD25+Treg成長(zhǎng)、發(fā)育及發(fā)揮作用必需能量。哮喘患兒外周血中CD4 CD25+Treg表達(dá)數(shù)量明顯下降，誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)自身組織細(xì)胞免疫耐受能力下降，并抑制了Th1細(xì)胞優(yōu)勢(shì)表達(dá)，Th1/Th2明確失衡，促成了兒童哮喘發(fā)病。它們之間的平衡與表達(dá)濃度影響著該病發(fā)生與發(fā)展。迄今為止，一些抗哮喘藥，包括支氣管舒張劑(β-受體拮抗劑和抗膽堿能藥)、抗炎癥藥(類(lèi)固醇激素、白細(xì)胞介素拮抗劑和巨細(xì)胞穩(wěn)定劑)可快速舒張氣道平滑肌，抑制局部炎癥，療效明顯。但停藥后病情反復(fù)、長(zhǎng)期用藥毒、副作用明顯。近年來(lái)，一些研究證實(shí)了中藥(包括復(fù)方、單味藥、單體)能通過(guò)調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫而達(dá)到治療目的[15-17]。因此，調(diào)查患兒發(fā)作期血清調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞表達(dá)濃度，探討不同證型“哮癥”患兒的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制很有意義。我們選擇了一組近期來(lái)我院就診和住院治療的寒哮證和熱哮證患兒為對(duì)象，觀察其急性發(fā)作期血清調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和輔助性T細(xì)胞(CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)表達(dá)濃度，并與同期參加體檢結(jié)論健康兒童(對(duì)照組)比較。研究發(fā)現(xiàn)，寒哮證組和熱哮證組血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg表達(dá)濃度均明顯偏低，同時(shí)，寒哮證組血清CD4 CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg表達(dá)濃度也明顯低于熱哮證組。兩組證型患兒血清CD4+表達(dá)濃度均明顯高于對(duì)照組，而CD8+表達(dá)濃度及CD4+/CD8+比值均明顯低于后者，同時(shí)，寒哮證組血清CD4+和CD8+表達(dá)濃度均明顯低于熱哮證組。這些外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞變化與國(guó)內(nèi)一些涉及哮喘成年患者的同類(lèi)研究[18-19]結(jié)論一致，提示寒哮證和熱哮證患病兒童們存在著明確的血清調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞表達(dá)異常，且以寒哮證患兒更為顯著。

鑒于寒哮證和熱哮證患兒外周血存在著明確的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞異常表達(dá)失衡，這些表現(xiàn)差異可作為“哮病”各證型兒童的微觀辨證指標(biāo)及治療選擇及療效評(píng)估的判定標(biāo)識(shí)。