不同腐爛病發(fā)病程度核桃根區(qū)土壤微生物多樣性分析

顧美英，徐萬(wàn)里，張志東，唐光木，唐琦勇，雇玉忠，宋素琴，古麗尼沙·沙依木，楊 波，馮 雷

(1.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所，烏魯木齊 830091；2.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料與農(nóng)業(yè)節(jié)水研究所，烏魯木齊 830091；3.烏魯木齊市永豐天農(nóng)農(nóng)業(yè)科技公司，烏魯木齊 830000；4.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所，烏魯木齊 830091)

0 引 言

【研究意義】核桃(JuglansregiaL.)是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)樹(shù)種，新疆憑借得天獨(dú)厚的水土光熱資源和豐富的特色品種資源，已成為核桃的主產(chǎn)區(qū)之一。目前，新疆核桃種植面積約為2.8 × 105hm2(420萬(wàn)畝)，居全國(guó)第3位，產(chǎn)量近2.4 × 105t[1]。近年來(lái)，新疆核桃產(chǎn)業(yè)向基地化、規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化方向發(fā)展，但由于栽培技術(shù)落后和水肥管理粗放，多年種植的核桃園出現(xiàn)盛果期縮短、樹(shù)體早衰、抗逆性差、病蟲(chóng)害加重，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力降低等生長(zhǎng)障礙問(wèn)題[2-3]。在核桃病害中，發(fā)病比較嚴(yán)重的核桃腐爛病是典型的潛伏浸染的真菌病害，該病已成為影響核桃生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量的主要原因[4-5]。目前生產(chǎn)中仍以化學(xué)防治為主，但化學(xué)殺菌劑存在易污染環(huán)境，對(duì)人畜不安全，農(nóng)藥殘留等問(wèn)題[6]。對(duì)果樹(shù)根區(qū)微生物生態(tài)研究不僅對(duì)土壤微生態(tài)理論研究有重要意義，而且通過(guò)調(diào)控果樹(shù)根區(qū)微生物多樣性，可以實(shí)現(xiàn)果樹(shù)持續(xù)健康生長(zhǎng)。【前人研究進(jìn)展】土壤微生物多樣性與植物健康狀況之間的關(guān)系已成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，土壤微生物生態(tài)是生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，其健康與否，將直接關(guān)系到植株的生長(zhǎng)發(fā)育以及品質(zhì)，影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展[7-9]。國(guó)內(nèi)外的一些研究表明，植物病害與土壤微生物生態(tài)失衡有一定的關(guān)系[10-13]，果樹(shù)土壤微生物群落結(jié)構(gòu)及其組成變化與果樹(shù)抗逆性和病害的發(fā)生密切相關(guān)。已有研究表明，土壤可培養(yǎng)細(xì)菌、放線菌的減少及優(yōu)勢(shì)細(xì)菌分布不均，以及酶活性的降低可能是影響櫻桃樹(shù)"黑疙瘩"病發(fā)生的原因之一[14]。與健康的晚棱臍橙相比，在感染黃龍病前期其土壤生物學(xué)性質(zhì)的變化不大；在感染的中后期，由于根系在營(yíng)養(yǎng)缺乏和病害的雙重影響下逐漸壞死，根系生態(tài)系統(tǒng)遭到破壞，晚棱臍橙土壤的微生物數(shù)量、土壤酶活性及土壤微生物功能多樣性均明顯下降[15]。但也有研究表明，土壤中微生物多樣性和微生物總體數(shù)目與果樹(shù)根癌病的發(fā)生沒(méi)有顯著相關(guān)性，但土壤中存在的個(gè)別菌種對(duì)病害發(fā)生有顯著影響[16]。吳斌等[17]研究發(fā)現(xiàn)小麥黃花葉病毒病發(fā)病嚴(yán)重地塊的土壤微生物總量均高于輕病地塊，真菌數(shù)量和種類的增加尤為顯著，其次為細(xì)菌，放線菌基本無(wú)變化?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】土壤微生物和病原體宿主特異性在植物健康中發(fā)揮重要作用[18]，果園土壤微生物多樣性下降導(dǎo)致果樹(shù)病害的加重已成為威脅果園生態(tài)健康的一個(gè)重要問(wèn)題[19-20]。研究土壤微生物數(shù)量和功能多樣性與核桃腐爛病之間的關(guān)系。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以不同腐爛病發(fā)病程度的核桃樹(shù)為研究對(duì)象，以健康植株為對(duì)照，采用可培養(yǎng)微生物計(jì)數(shù)和Biolog微平板的方法，探索核桃土壤微生物群落多樣性與腐爛病發(fā)生的關(guān)系，為核桃腐爛病微生物調(diào)控技術(shù)的研究奠定良好的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

試驗(yàn)所需土壤樣品，采集于新疆阿克蘇地區(qū)溫宿縣核桃林場(chǎng)三隊(duì)12年生核桃園。該地位于塔里木盆地北緣，全年近230 d無(wú)霜期，屬典型的溫帶大陸性氣候，晝夜溫差懸殊。年平均氣溫10.1℃，極端最高氣溫40.9℃，極端最低氣溫-27.4℃；年均日照2 747.7 h，年均降水量65.4 mm；年均無(wú)霜期185 d。采集土樣前對(duì)核桃園進(jìn)行腐爛病危害程度的調(diào)查，根據(jù)腐爛病的發(fā)病情況，按健康(J)、輕度發(fā)病(Q)、中度發(fā)病(Z)、重度發(fā)病(B)植株根區(qū)土分為4組，每組各采集7棵樹(shù)的根區(qū)土樣。健康植株為無(wú)病疤或1～2年生小枝有少量病疤；輕度病害為2～4年生側(cè)枝有較輕的病疤；中度危害為主枝上有1個(gè)病疤，寬度占枝干周長(zhǎng)的 50%以上；重度病害為主干或主枝上有3個(gè)病疤，寬度均占枝干周長(zhǎng)的50% 以上[21]。每株樹(shù)以主干為中心50 cm左右半徑的范圍，分別從東、南、西、北4個(gè)方位取土，除去表層土后取0～30 cm的土樣，每樣品采用四分法混勻后裝入保鮮袋中帶回實(shí)驗(yàn)室，置于4℃冰箱保存，用于微生物分析。

1.2 方 法

1.2.1 土壤可培養(yǎng)微生物數(shù)量測(cè)定

可培養(yǎng)微生物數(shù)量采用稀釋平板涂抹培養(yǎng)計(jì)數(shù)法分析[22]。細(xì)菌采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，放線菌采用改良的高氏一號(hào)培養(yǎng)基(每300 mL培養(yǎng)基中加3%重鉻酸鉀1 mL)，真菌采用PDA 培養(yǎng)基(每100 mL培養(yǎng)基加1%鏈霉素溶液0.3 mL)。

1.2.2 土壤微生物群落碳源代謝利用測(cè)定

采用Biolog ECO微平板法進(jìn)行[22]。稱取10 g鮮土加入100 mL無(wú)菌水中，搖勻，靜止片刻，然后將土壤樣品稀釋至10-3。取150 μL菌懸液接種到生態(tài)板的每一個(gè)孔中，25℃恒溫培養(yǎng)，每隔24 h分別在590 nm波長(zhǎng)下讀數(shù)，連續(xù)培養(yǎng)7 d。取120 h的平均光密度值進(jìn)行多樣性分析。

1.3 數(shù)據(jù)處理

微平板孔中溶液吸光值平均顏色變化率(average well color development, AWCD)用于描述土壤微生物代謝活性，計(jì)算公式如下：AWCD=∑(Ci﹣Ri)/n。式中：Ci為每個(gè)有培養(yǎng)基孔的吸光值；Ri為對(duì)照孔的吸光值；n為培養(yǎng)基孔數(shù)，Biolog Eco板n值為31。采用Simpson、Shannon和McIntosh 3個(gè)指數(shù)來(lái)表征土壤微生物群落功能多樣性。其中Simpson指數(shù)(D)用于評(píng)估某些最常見(jiàn)種的優(yōu)勢(shì)度，Shannon指數(shù)(H)用于評(píng)估物種的豐富度，McIntosh指數(shù)(U)用于評(píng)估群落物種均勻度。

計(jì)算公式如下：

Shannon指數(shù)(H)：H=﹣∑pi(pi).

式中：pi為第i孔的相對(duì)吸光值與所有整個(gè)微平板的相對(duì)吸光值總和的比值(Ci﹣Ri)/∑(Ci﹣Ri)；ni為第i孔的相對(duì)吸光值(Ci﹣Ri)；N為相對(duì)吸光值的總和。

數(shù)據(jù)采用DPS v9.50 版軟件進(jìn)行方差分析、平均吸光值(AWCD)、多樣性指數(shù)和主成分分析等工作。采用單因素方差分析(one-way ANOVA)、最小顯著差數(shù)法(LSD)進(jìn)行多重比較差異顯著性檢驗(yàn)(P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1不同發(fā)病程度核桃根際土壤可培養(yǎng)微生物特征

研究表明，不同發(fā)病程度核桃根際土壤三大可培養(yǎng)微生物類群數(shù)量差異顯著。與健康土壤對(duì)照相比，微生物總數(shù)輕、中度發(fā)病土壤分別升高了13.69%和10.88%，重度發(fā)病土壤則降低了33.06%。腐爛病病害由輕到重的根際土壤細(xì)菌數(shù)量呈先上升后下降趨勢(shì)，輕度、中度腐爛病發(fā)病土壤數(shù)量分別是健康土壤的15.67%和12.28%，重度腐爛病發(fā)病土壤則下降了33.46%。放線菌和真菌數(shù)量健康土壤數(shù)量最多，不同發(fā)病土壤放線菌數(shù)量分別下降了47.33%、32.98%和19.27%，真菌數(shù)量分別下降了49.32%、22.68%和42.68%。圖1

Ⅰ: 細(xì)菌Bacteria (107CFU/g) ; Ⅱ: 放線菌Actinomycetes(105CFU/g) ; Ⅲ: 真菌Fungi (104CFU/g) J：健康土壤 health soil，Q：輕度發(fā)病土壤 mild disease soil、Z：中度發(fā)病土壤 moderate degree soil、B：重度發(fā)病土壤 severe disease soil

圖1 不同樣地核桃根際土壤可培養(yǎng)微生物數(shù)量

Fig.1 Culturable microbial quantities in rhizosphere soil of Walnut under different soil samples

2.2不同發(fā)病程度核桃根際土壤微生物功能多樣性

2.2.1平均顏色變化率

研究表明，Biolog ECO微平板培養(yǎng)過(guò)程中，各處理根區(qū)土壤微生物對(duì)碳源的利用程度隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而增加，表明微生物活性也增加。在培養(yǎng)初期的24 h內(nèi)，AWCD值變化不明顯，從24～96 h，AWCD值呈快速增長(zhǎng)，96 h后增長(zhǎng)速度減慢并延續(xù)到144 h，144 h后趨于穩(wěn)定。168 h的AWCD值總體表現(xiàn)為腐爛病發(fā)病較輕和健康的核桃根區(qū)土壤中，微生物活性高于中度和重度的發(fā)病土壤。從差異變化較顯著的144 h的AWCD值可以看出，不同發(fā)病程度的根區(qū)土壤間存在一定的差異。腐爛病發(fā)病較輕的核桃根區(qū)土壤中，微生物活性最高，健康土壤降低了12.03%，中、重度發(fā)病土壤分別降低了14.56%和18.42%。圖2

2.2.2 多樣性指數(shù)

根據(jù)AWCD值隨培養(yǎng)時(shí)間的變化曲線，選取144 h的AWCD值計(jì)算土壤微生物群落的Simpson、Shannon和McIntosh多樣性指數(shù)。結(jié)果表明，不同腐爛病發(fā)病程度的核桃根區(qū)土壤微生物群落功能多樣性指數(shù)存在一定差異。從AWCD值可以看出，在健康和腐爛病發(fā)病程度較輕的土壤中均表現(xiàn)出較高的微生物活性，隨著發(fā)病程度的加重，微生物活性顯著降低。但不同發(fā)病程度的土壤微生物群落Simpson優(yōu)勢(shì)度指數(shù)(D)和McIntosh均勻度指數(shù)(U)差異不顯著，輕度發(fā)病土壤的Shannon豐富度指數(shù)(H)高于健康和中、重度發(fā)病土壤。 表1

2.2.3 土壤微生物對(duì)不同種類碳源的利用

將Biolog-Eco板上的31種碳源分為6類，健康和發(fā)病的核桃樹(shù)根區(qū)土壤微生物對(duì)這6類碳源的利用情況，研究表明，輕度發(fā)病土壤中的微生物對(duì)這6類碳源的利用均較高，說(shuō)明微生物的活性最高；健康土壤中的微生物對(duì)糖類和氨基酸類碳源也有較好的利用；但中、重度發(fā)病土壤中微生物活性降低，對(duì)糖類、氨基酸類和酚酸類碳源的利用較低。核桃腐爛病的發(fā)病程度與土壤微生物對(duì)碳源的利用情況有一定的相關(guān)性，健康和輕度發(fā)病的土壤微生物對(duì)糖類和氨基酸類碳源有較強(qiáng)的利用能力，而腐爛病發(fā)病較重的土壤中利用糖類、氨基酸類和酚酸類碳源的微生物在減少。圖3

圖2 不同樣地土壤微生物群落平均顏色變化率

Fig.2 Average well color development (AWCD) of soil microbial communities under different soil samples

表1 不同樣地土壤微生物群落功能多樣性指數(shù)

Table 1 Diversity indexes of soil microbial communities under different soil samples

Soil samplesAWCDSimpson(D)Shannon(H)McIntosh(U)J1.323±0.105b0.980±0.001a3.190±0.040b0.936±0.004aQ1.504±0.134a0.982±0.003a3.298±0.053a0.940±0.011aZ1.285±0.224b0.980±0.000a3.211±0.064ab0.939±0.005aB1.227±0.177b0.981±0.001a3.197±0.076b0.941±0.002a

圖3 不同樣地土壤微生物對(duì)六類碳源的利用強(qiáng)度

Fig.3 Utilization intensity of soil microbial community to six types of carbon source under different soil samples

2.2.4 主成分分析

為了進(jìn)一步了解腐爛病不同發(fā)病程度核桃根區(qū)土壤微生物群落功能的差異，對(duì)健康和發(fā)病的核桃樹(shù)根區(qū)土壤微生物31種碳源的利用情況進(jìn)行主成分分析。采用培養(yǎng)第144 h的數(shù)據(jù)，共提取出3個(gè)主成分，主成分1 (PC1)、主成分2 (PC2)分別解釋變量方差的41.57%和32.78%。PC1和PC2的累積貢獻(xiàn)率為74.36%，是分異的主要來(lái)源，可以解釋分異的大部分信息。研究表明，不同腐爛病發(fā)病程度的土壤在PC軸上出現(xiàn)了明顯的分化，除健康土和中度發(fā)病土均分布在第四象限外，輕度和重度發(fā)病土分別分布在第一和第二象限。從整體上看，發(fā)病程度不同的核桃根區(qū)土壤微生物群落有一定的差異。圖4

圖4 不同樣地土壤微生物群落主成分分析

Fig.4 Principal component analysis of soil microbial communities under different soil samples

研究表明，對(duì)PC1和PC2具有較高利用率的碳源分析，對(duì)PC1和PC2的貢獻(xiàn)率在±0.6以上的碳源能反應(yīng)其中大部分信息。31種碳源中有6種碳源與PC1相關(guān)性較強(qiáng)，它們分別屬于糖類的D、L-a-甘油，氨基酸類的L-精氨酸、L-天冬酰胺酸和L-絲氨酸，羧酸類的D-蘋果酸，酚酸類的4-羥基苯甲酸。說(shuō)明這6種碳源使不同樣地間土壤微生物群落代謝功能多樣性在PC1上差異顯著，決定PC1的分異。與PC2相關(guān)性強(qiáng)的碳源有5種，分別屬于糖類的D-纖維二糖、I-赤藻糖醇、a-D-乳糖和N-乙?；?D-葡萄胺，多聚物類的吐溫80。說(shuō)明這5種碳源使不同樣地間土壤微生物群落代謝功能多樣性在PC2上差異顯著，決定PC2的分異。表2

表2 PC1和PC2貢獻(xiàn)率較高的部分碳源(︱r︱﹥0.6)

Table 2 The carbon source with high contribution rate for PC1 and PC2(︱r︱﹥0.6)

碳源類型Type of carbon sourcePC1PC2糖類CarbohydratesD-纖維二糖0.1630.626I-赤藻糖醇-0.4540.618a-D-乳糖-0.1050.648N-乙?；?D-葡萄胺-0.2430.843D,L-a-甘油0.7080.28氨基酸類Amino ocidsL-精氨酸0.9380.061L-天冬酰胺酸0.790-0.201L-絲氨酸0.7580.241羧酸類 Carboxylic acidsD-蘋果酸0.7110.021酚酸類 Phenolic acids4-羥基苯甲酸0.7510.445多聚物 Polymers吐溫80-0.070.762

3 討 論

土壤生態(tài)系統(tǒng)對(duì)于植物的生長(zhǎng)和發(fā)育是至關(guān)重要的，土壤生物之間相互依賴、彼此制約，同時(shí)又與周圍環(huán)境因子相互作用、往復(fù)調(diào)控，才能維系土壤生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定和健康[23]。雖然核桃腐爛病病原菌主要危害核桃樹(shù)枝干，并不會(huì)直接污染土壤，但核桃根區(qū)土壤養(yǎng)分及微生物多樣性的變化是腐爛病發(fā)生的主要原因。由于核桃在生長(zhǎng)過(guò)程中需不斷從土壤中吸取養(yǎng)分，在管理粗放、土壤貧瘠、排水不良、肥水不足等的土壤中的營(yíng)養(yǎng)元素相對(duì)缺乏和比例失調(diào)，導(dǎo)致核桃根區(qū)土壤微生物多樣性降低及其群落結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致樹(shù)勢(shì)衰弱，腐爛病加重[24、25]。

土壤微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)變化的敏感指標(biāo)之一，其活性和群落結(jié)構(gòu)變化能反映出土壤生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性和健康狀況[26、27]。病原菌的入侵使得植物-土壤-微生物原有的健康生態(tài)遭到破壞，導(dǎo)致土壤微生物多樣性發(fā)生變化[28、29、30]，土壤微生物群落結(jié)構(gòu)變化在一定程度上也影響病害的發(fā)生[31、32、33、34]。李雪萍等[35]的研究表明，根腐病的發(fā)生會(huì)使青稞根際土壤微生物組成發(fā)生改變，細(xì)菌和放線菌數(shù)量因根腐病的發(fā)生而減少，真菌的數(shù)量則增多。吳斌等[17]的研究也表明發(fā)病嚴(yán)重地塊的土壤微生物總量均高于輕病地塊，其中發(fā)病嚴(yán)重地塊的真菌數(shù)量和種類增加的最為顯著。

研究對(duì)三大可培養(yǎng)微生物類群的分析表明，由于細(xì)菌數(shù)量占微生物總數(shù)的大部分，故微生物總數(shù)呈輕度發(fā)病>中度發(fā)病>健康>重度發(fā)病土壤，而放線菌和真菌數(shù)量健康土壤高于發(fā)病土壤。微生物數(shù)量與土壤養(yǎng)分含量關(guān)系密切，馮雷等[21]的研究表明，核桃健康土壤養(yǎng)分含量大于腐爛病發(fā)病土壤，這可能導(dǎo)致重度發(fā)病土壤微生物數(shù)量少于健康土壤。同時(shí)輕度發(fā)病植株可能產(chǎn)生一些應(yīng)激反應(yīng)來(lái)抵御病害的入侵，進(jìn)而對(duì)土壤微生物也產(chǎn)生了一定的影響。發(fā)病較重的土壤中真菌數(shù)量并沒(méi)有顯著增多，由于腐爛病并非土傳病害，土壤細(xì)菌、放線菌和真菌數(shù)量減少說(shuō)明土壤中養(yǎng)分含量減少，土壤質(zhì)量下降，樹(shù)勢(shì)可能變?nèi)?，進(jìn)而導(dǎo)致腐爛病發(fā)病嚴(yán)重。土壤環(huán)境的改變誘發(fā)各種微生物的生長(zhǎng)和繁殖，同時(shí)病原微生物的大量繁殖也可能侵入寄主后改變植株生理代謝，造成其分泌物中一些成分及含量發(fā)生變化，從而可能導(dǎo)致不同發(fā)病程度的土壤微生物數(shù)量及種類明顯不同[17]。核桃腐爛病的發(fā)生與土壤微生物的相關(guān)性研究，還應(yīng)結(jié)合高通量測(cè)序等分子生物學(xué)手段對(duì)土壤微生物的種類和數(shù)量進(jìn)行深入分析。

Biolog代謝活性研究表明，健康和腐爛病發(fā)病較輕的核桃根區(qū)土壤中，微生物活性高于中、重度發(fā)病土壤。這與管冠[15]、鄧曉[36、37]、付麗娜[38]等的研究結(jié)果一致。Biolog碳源利用分析表明，健康和輕度發(fā)病的土壤微生物對(duì)糖類和氨基酸類碳源有較強(qiáng)的利用能力，而腐爛病發(fā)病較重的土壤中利用糖類、氨基酸類和酚酸類碳源的微生物在減少。苗則彥等[39]分析認(rèn)為病原菌侵入寄主后改變植株生理代謝，導(dǎo)致其分泌物中一些成分及含量發(fā)生變化，在促進(jìn)一些微生物生長(zhǎng)的同時(shí)又抑制了另一類群微生物，從而可能導(dǎo)致健康黃瓜植株與罹病黃瓜植株根際微生物數(shù)量及種類明顯不同。因此，在腐爛病發(fā)病嚴(yán)重的土壤中增施有機(jī)肥、有益根際微生物或利用有效微生態(tài)調(diào)控措施，可增加核桃土壤養(yǎng)分和調(diào)節(jié)微生物多樣性，進(jìn)而增強(qiáng)樹(shù)勢(shì)，促進(jìn)核桃樹(shù)的健康生長(zhǎng)。

4 結(jié) 論

4.1 不同腐爛病發(fā)病程度核桃根際土壤三大可培養(yǎng)微生物類群數(shù)量差異顯著。與健康土壤對(duì)照相比，不同發(fā)病程度土壤細(xì)菌數(shù)量呈先上升后下降趨勢(shì)， 輕度、中度發(fā)病土壤分別提高了15.67%和12.28%，重度發(fā)病土壤則下降了33.46%。輕度、中度和重度發(fā)病土壤放線菌數(shù)量分別下降了47.33%、32.98%和19.27%，真菌數(shù)量分別下降了49.32%、22.68%和42.68%。

4.2 Biolog碳源利用表明，健康和腐爛病發(fā)病較輕的核桃樹(shù)土壤微生物多樣性存在顯著差異。腐爛病發(fā)病程度較重的土壤中微生物多樣性低于健康和腐爛病發(fā)病程度較輕的土壤。從144 h的AWCD值可以看出，腐爛病發(fā)病較輕的核桃根區(qū)土壤中，微生物活性最高，健康土壤降低了12.03%，中、重度發(fā)病土壤分別降低了14.56%和18.42%。輕度發(fā)病土壤的Shannon豐富度指數(shù)(H)高于健康和中、重度發(fā)病土壤。研究表明，核桃腐爛病的發(fā)病程度與土壤微生物對(duì)碳源的利用情況有一定的相關(guān)性，健康和輕度發(fā)病的土壤微生物對(duì)糖類和氨基酸類碳源有較強(qiáng)的利用能力，而腐爛病發(fā)病較重的土壤中利用糖類、氨基酸類和酚酸類碳源的微生物在減少。主成分分析表明，發(fā)病程度不同的核桃根區(qū)土壤微生物群落有一定的差異。31種碳源中，糖類和氨基酸類碳源決定著主成分的分異。