基于雙殼貝類的多環(huán)芳烴生物標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)的研究

卓藝蓉

(平潭綜合實(shí)驗(yàn)區(qū)海洋與漁業(yè)執(zhí)法支隊(duì)，福建 平潭 350400)

多環(huán)芳烴(PAHs)主要來(lái)源于有機(jī)物的熱解或不完全燃燒，是最早被發(fā)現(xiàn)和研究的致癌類化合物之一，其中以苯并(a)芘{B[a]P}最具代表性，該污染物會(huì)對(duì)海洋生物產(chǎn)生嚴(yán)重危害[1-2]。隨著海上石油和輪船運(yùn)輸業(yè)的發(fā)展，我國(guó)海洋PAHs的污染日益加重，如青島膠州灣近岸海水和表層沉積物中的PAHs的含量分別為8.23～272.03 ng/L、82～4 562 ng/g，達(dá)到或接近中等污染水平[3]。目前我國(guó)許多沿海城市已將石化、造船、港口等產(chǎn)業(yè)集群作為優(yōu)先發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)，這些都可能成為持久性有害物質(zhì)(PTS)的潛在污染源，必將對(duì)我國(guó)近海生態(tài)環(huán)境安全和人類健康帶來(lái)潛在的風(fēng)險(xiǎn)。

已有研究表明PAHs進(jìn)入生物體后首先與芳烴受體(AhR)結(jié)合，之后經(jīng)過(guò)細(xì)胞色素P450酶系(CYP450s)如芳烴羥化酶(AHH)等代謝轉(zhuǎn)化為更具極性的Ⅰ相代謝中間產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物在Ⅱ相代謝酶的催化下進(jìn)一步與內(nèi)源物質(zhì)分子結(jié)合，加快了代謝產(chǎn)物排出體外的速度[4]。另一方面在解毒代謝過(guò)程中產(chǎn)生大量的活性中間產(chǎn)物和自由基，在一定范圍內(nèi)，這些自由基能被體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)如超氧化物歧化酶(SOD)等清除，當(dāng)抗氧化防御系統(tǒng)不能消除這些活性氧時(shí)，會(huì)造成DNA損傷等毒性效應(yīng)[5]。呂晏鋒等[6]的研究結(jié)果表明多環(huán)芳烴類污染物中的菲鯉魚的亞急性毒性作用顯著；崔培等[7]通過(guò)研究萘暴露下牙鲆肝臟抗氧化防御系統(tǒng)相關(guān)指標(biāo)的變化，發(fā)現(xiàn)SOD、CAT及LZM的響應(yīng)較AKP更為敏感。目前這些研究主要集中在哺乳動(dòng)物和魚類中，有關(guān)貝類方面的研究較少[8-12]，而PAHs對(duì)菲律賓蛤仔分子生物標(biāo)志物的研究報(bào)道也較少。本文擬研究B[a]P對(duì)菲律賓蛤仔消化盲囊和鰓絲毒理學(xué)指標(biāo)的影響及DNA損傷效應(yīng)，探討PAHs對(duì)菲律賓蛤仔的致毒機(jī)理，全面篩選用于PAHs毒性評(píng)定的生物標(biāo)志物，為我國(guó)近海PAHs污染評(píng)價(jià)與監(jiān)測(cè)提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用菲律賓蛤仔購(gòu)于青島南山水產(chǎn)品市場(chǎng)，在30 cm×40 cm×50 cm的塑料水槽中暫養(yǎng)10 d，海水鹽度31，pH為8.1，溫度為15℃，連續(xù)充氣，日換水100%，養(yǎng)殖密度為300～400個(gè)/m3，并在換水后投喂螺旋藻粉，日投餌量6 g/m3。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)梯度的設(shè)置

通過(guò)HPLC測(cè)定，青島近海海域自然海水中B[a]P的濃度為0.155 ng/L，實(shí)驗(yàn)中各濃度梯度的設(shè)置主要依據(jù)是污染水體中PAHs的濃度可能達(dá)到50.0 μg/L，而深?；蛭次廴舅蛑蠵AHs含量一般低于1 μg/L[13]，實(shí)驗(yàn)采用Sigma公司生產(chǎn)的B[a]P。首先將B[a]P溶解于一定量的3 μg/L丙酮(助溶劑)中，制備一定濃度的儲(chǔ)備液，再分別用自然海水配制濃度梯度為0、0.01、0.2 μg/L B[a]P實(shí)驗(yàn)組，分別以未添加PAHs和只加入3 μg/L丙酮的自然海水處理組作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，所有實(shí)驗(yàn)梯度均設(shè)3個(gè)平行組，各處理組丙酮維持相同濃度。

各實(shí)驗(yàn)組分別用50 cm×40 cm×30 cm的塑料水槽盛放，從暫養(yǎng)的菲律賓蛤仔中挑選健康、活力強(qiáng)的菲律賓蛤仔放置于每個(gè)水槽中，每個(gè)水槽分別放置36只，實(shí)驗(yàn)期間的養(yǎng)殖管理與暫養(yǎng)期間完全相同，換水時(shí)分別加入相應(yīng)各實(shí)驗(yàn)梯度的養(yǎng)殖用水，實(shí)驗(yàn)期間菲律賓蛤仔無(wú)死亡現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)開始后于0、1、3、6、10 d取樣。取樣時(shí)，每個(gè)梯度各水槽隨機(jī)選取6只菲律賓蛤仔，取鰓絲和消化盲囊于-80℃冰箱內(nèi)保存，用于各實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測(cè)定。

1.2.2 樣品制備

酶液的制備：分別將菲律賓蛤仔鰓絲和消化盲囊樣品約100 mg。置于pH=7.6 預(yù)冷的緩沖液(Tris20 mmol/L、蔗糖0.5 mol/L、KCl 0.15 mol/L、EDTA 1 mmol/L、10%甘油)，在冰浴中勻漿3 min，轉(zhuǎn)速為12 000 r/min，然后將勻漿液離心25 min，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，所得上清液即為酶液。

DNA提取：取菲律賓蛤仔鰓和消化盲囊各0.5 g，研磨剪碎后分裝，加入0.45 mL裂解緩沖液(50 mmoL/L Tris、100 mmoL/L EDTA、pH 8.0)和 80 μL 10%SDS。再加入2.5～5.0 μL(一般3 μL)蛋白酶K(20 mg/mL)，使其終濃度達(dá)100 μg/mL，混勻。55℃水浴3 h至過(guò)夜。樣品中加入150 μL飽和NaCl，室溫13 000 rpm離心20 min(T=15℃)，去沉淀。配制PCI抽提液，加入等體積苯酚抽提，輕輕混勻，靜止5 min。4℃、13 000 rmp離心10 min。將上層水相移入小離心管中，用PCI抽提液(苯酚∶氯仿異∶戊醇=24∶25∶1)重復(fù)抽提2次。加二倍體積(約0.5 mL)無(wú)水乙醇和1/10體積(150 μL)醋酸鈉(3 mol/L，pH 5.2)。在-20℃冰箱中放置3 h至過(guò)夜，13 000 rmp離心15 min，棄去表面相。最后用500 μL 70%乙醇洗滌2次，干燥，溶于600 μL TE(10 mmol/L Tris、1 mmol/L EDTA)中。

1.2.3 解毒代謝酶活力的測(cè)定

芳烴羥化酶(AHH)活性的測(cè)定參照Walton(1978)[14]的方法：取170 μL 酶液，加入10 μL NADPH，200 μL Tris-HCl(0.1 mmol/L，pH 7.6，含MgCl2)緩沖液；放到30℃水浴鍋中預(yù)培養(yǎng)2 min，加入20 μL(2.5 mg/mL)PPO起始反應(yīng)，反應(yīng)液培養(yǎng)30 min；加入1 mL預(yù)冷丙酮終止反應(yīng)；加3.25 mL正己烷萃取。吸出2 mL有機(jī)相，用5 mL水溶的(1 mol/L)NaOH反相萃取，取下層水相3 mL，用熒光分光光度計(jì)測(cè)熒光值(吸收355 nm/發(fā)射515 nm)。AHH活力單位：產(chǎn)物熒光強(qiáng)度/mg 蛋白。

谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性的測(cè)定參照Habig(1974)[15]的方法：按每孔150 μL 反應(yīng)體系[0.05 mmol/L(pH 為6.9)磷酸鉀緩沖液100 μL；15.0 mmol/L CDNB 10 μL；15.0 mmol/L GSH 10 μL；20 μL 重蒸水；10 μL 勻漿液]和10 μL粗酶液加入96 孔微孔板，加入樣品30 s后，在溫度30℃、波長(zhǎng)340 nm處時(shí)間間隔為20 s連續(xù)讀數(shù)6次。酶活力用每min每mg蛋白催化產(chǎn)生的2，4-dinitrophenyl glutathione 的nmol量來(lái)表示，單位nmol·min-1·mg-1pro。

超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定參照Marklund(1974)[16]的方法：pH=8.3、50 mmol/L Tris-HCl緩沖液4.5 mL；0.1 mL樣液；10 μL 50 mmol/L連苯三酚，迅速搖勻；波長(zhǎng)325 nm處每隔30 s測(cè)一次A值，使自氧化速率△A325nm/min控制在0.070 OD/min左右。單位用nmol·min-1·mg-1pro表示。

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH)總量測(cè)定參照范崇東(2004)[17]的方法：取勻漿上清液100 μL，加入300 μL NaOH(0.15 mol/L)溶液，搖勻；加入體積分?jǐn)?shù)3%甲醛(用水配)(pH=12)100 μL，搖勻，靜置2 min；加入500 μL DTNB (10 mmol/L)分析溶液，搖勻，在25℃水浴保溫5 min；測(cè)定在波長(zhǎng)412(405、414)nm處的吸光度A，通過(guò)計(jì)算或從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出相應(yīng)GSH濃度。酶活力單位(U)表示為每mg 蛋白的熒光強(qiáng)度。

1.2.4 DNA損傷的測(cè)定

雙鏈：取分離的雙鏈DNA 100 μL于試管中，加入100 μL 50 mmol/L NaCl，5 μL含0.2%SDS的2 mmol/L EDTA，3 mL 0.2 mol/L磷酸鉀緩沖液(pH 6.9)，3 μL二苯丙咪唑，混勻后至于暗處反應(yīng)15 min后測(cè)熒光；單鏈：取DNA 100 μL，于80℃加熱30 min，取分離的單鏈DNA 100 μL于試管中，加入100 μL 50 mmol/L NaCl，5 μL含0.2%SDS的2 mmol/L EDTA，3 mL 0.2 mol/L磷酸鉀緩沖液(pH 6.9)，3 μL二苯丙咪唑，混勻后置于暗處反應(yīng)15 min后測(cè)熒光；堿解旋：將分離純化的DNA樣品100 μL，加入50 μL 0.05 mol/L NaOH，混勻后于0℃孵育30 min。取出，快速加入50 μL 0.05 mol/L HCl，及2 μL 0.5%SDS，21號(hào)針頭吸放6次混勻。在上述堿解旋后的DNA樣品中加入3 mL 0.2 mol/L磷酸鉀緩沖液(pH 6.9)，3 μL二苯丙咪唑(10 μg/L)，混勻后置于暗處反映15 min后熒光。

DNA完整性通常以F值表示，計(jì)算公式為：

F={X(auDNA)-XL(ssDNA)}/{XL(dsDNA)-XL(ssDNA)}

式中，X為熒光值；dsDNA為雙鏈DNA；ssDNA為單鏈DNA；auDNA為解旋后的DNA。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均以3個(gè)平行組數(shù)據(jù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Means±SD)表示，并采用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)和Duncan檢驗(yàn)法統(tǒng)計(jì)分析。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 B[a]P對(duì)菲律賓蛤仔組織解毒代謝酶活力的影響

由圖1可見，菲律賓蛤仔鰓絲和消化盲囊AHH、GST活力受B[a]P誘導(dǎo)發(fā)生顯著變化(P<0.05)，而對(duì)照組無(wú)明顯變化。所有處理組組織AHH活力均表現(xiàn)為顯著的誘導(dǎo)作用(P<0.05)，于3 d達(dá)到最大值，然后趨于穩(wěn)定。各處理組組織GST活力在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈先升高后下降趨勢(shì)，分別于1 d、3 d時(shí)達(dá)到最大值和最小值，然后保持穩(wěn)定，并顯著低于對(duì)照組水平(P<0.05)。同時(shí)各處理組組織AHH活力在穩(wěn)定后與B[a]P濃度呈正相關(guān)性，GST活力在穩(wěn)定后與B[a]P濃度呈負(fù)相關(guān)性。

圖2表明，暴露于B[a]P環(huán)境中的菲律賓蛤仔鰓絲和消化盲囊GSH含量、SOD活力被顯著誘導(dǎo)和抑制(P<0.05)，而對(duì)照組無(wú)明顯變化。所有處理組組織GSH的含量均表現(xiàn)為顯著的抑制作用(P<0.05)，于1 d達(dá)到最小值，然后趨于穩(wěn)定。各處理組組織SOD活力在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈先升高后下降趨勢(shì)，分別于3 d、6 d時(shí)達(dá)到最大值和最小值，然后保持穩(wěn)定，恢復(fù)至對(duì)照組水平。

2.2 B[a]P對(duì)菲律賓蛤仔組織DNA單鏈斷裂水平的影響

圖3表明，各處理組菲律賓蛤仔鰓絲和消化盲囊DNA損傷(以F值表示)顯著(P<0.05)，而對(duì)照組無(wú)明顯變化。各染毒處理組組織F值隨著實(shí)驗(yàn)天數(shù)的增加而明顯下降。在鰓絲處理組中，染毒1 d后F值迅速降低，在3 d后達(dá)到最低值，然后趨于穩(wěn)定。而在消化盲囊處理組中，0.01 μg/L處理組在染毒后F值逐漸降低，6 d時(shí)達(dá)到最低值；0.20 μg/L處理組在染毒后F值迅速降低，在第3 d達(dá)到最低值，然后趨于穩(wěn)定。各處理組組織F值在穩(wěn)定后，均與B[a]P濃度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

注：紫色線段表示染毒3 d時(shí)各指標(biāo)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的劑量效應(yīng)關(guān)系圖；綠色線段表示染毒10 d時(shí)各指標(biāo)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的劑量效應(yīng)關(guān)系圖。

Notes：The purple line segment represented the dose-effect relation diagram of the experimental data of each index at 3 days after the exposure.The green line segment represented the dose-effect diagram of the experimental data of each index at 10 days of exposure.

表1 在染毒3 d時(shí)菲律賓蛤仔解毒代謝和DNA損傷指標(biāo)與B[a]P的相關(guān)分析

2.3 菲律賓蛤仔組織解毒代謝和DNA損傷指標(biāo)與B[a]P濃度的相關(guān)性

由圖4、表1可知，除菲律賓蛤仔鰓絲GSH含量這個(gè)指標(biāo)外，其他指標(biāo)(鰓絲的AHH、GST、SOD活力和DNA損傷，消化盲囊的AHH、GST、SOD活力和GSH含量和DNA損傷)在B[a]P暴污3 d時(shí)與B[a]P濃度均呈明顯的線性關(guān)系，其中鰓絲和消化盲囊AHH和SOD活力與B[a]P濃度呈顯著的正相關(guān)，GST活力、GSH含量、DNA損傷與B[a]P濃度表現(xiàn)為明顯的負(fù)相關(guān)。

表2 在染毒10 d時(shí)菲律賓蛤仔解毒代謝和DNA損傷指標(biāo)與B[a]P的相關(guān)分析

由圖4、表2可知，除鰓絲GSH含量和消化盲囊DNA損傷這兩個(gè)指標(biāo)外，菲律賓蛤仔在B[a]P污染環(huán)境中暴污10 d時(shí)，其組織AHH、GST、SOD活力和GSH含量、DNA損其傷與B[a]P濃度均呈明顯的線性關(guān)系，其中鰓絲和消化盲囊AHH和SOD活力與B[a]P濃度呈顯著的正相關(guān)，GST活力、GSH含量、DNA損傷與B[a]P濃度表現(xiàn)為明顯的負(fù)相關(guān)。

3 討論

3.1 B[a]P對(duì)菲律賓蛤仔組織解毒代謝酶活力的影響

研究表明，持久性有機(jī)污染物(Persistent organic pollutants，POPs)通過(guò)Ⅰ相細(xì)胞色素P450酶(Cytochromep 450，CYP450)代謝成為更具極性的代謝中間產(chǎn)物進(jìn)入生物體內(nèi)，這些代謝產(chǎn)物在Ⅱ相代謝酶谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶等催化下與內(nèi)源性分子結(jié)合，加快了代謝產(chǎn)物排出體外的速度；另一方面在POPs代謝過(guò)程中產(chǎn)生大量的自由基，可被體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)(如SOD等)清除。

馮濤等[18]和王靜等[19]分別對(duì)大彈涂魚(Boleophthalmuspectinirostris)、櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)解毒代謝酶活力進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)多環(huán)芳烴類(PAHs)可誘導(dǎo)上述兩種水產(chǎn)動(dòng)物組織AHH活力顯著升高，并且其變化規(guī)律與PAHs暴污濃度呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。吳偉等[20-21]通過(guò)鯽魚(Carassiusauratus)暴露于BDE-47中來(lái)研究魚體的抗氧化防御系統(tǒng)，研究發(fā)現(xiàn)鯽魚肝臟GST活性呈現(xiàn)先增加后減少的變化趨勢(shì)，而總抗氧化能力(T-AOC)和超氧化歧化酶(SOD)活性隨著BDE-47濃度的增加，其活性逐漸降低，說(shuō)明BDE-47對(duì)魚體造成明顯的氧化損傷；吳偉等[22]還對(duì)羅非魚(Oreochromisaurea)肝臟組織非酶類抗氧化劑進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)在溴氰菊酯的污染下，羅非魚肝臟組織GSH含量呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，說(shuō)明溴氰菊酯對(duì)羅非魚抗氧化防御系統(tǒng)產(chǎn)生了影響。因此認(rèn)為解毒代謝酶活力和抗氧化防御系統(tǒng)可以在環(huán)境污染監(jiān)測(cè)體系中起到預(yù)警作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菲律賓蛤仔鰓絲和消化盲囊解毒代謝酶AHH活力對(duì)B[a]P污染比較敏感，能夠在短時(shí)間內(nèi)被迅速誘導(dǎo)上升，且誘導(dǎo)水平與污染濃度呈現(xiàn)正相關(guān)，這個(gè)結(jié)果和其他研究者在魚類和櫛孔扇貝AHH活力的研究結(jié)果相似[18-19，23-24]。而抗氧化防御系統(tǒng)的標(biāo)志物GST活力、SOD活力和GSH含量，在受低濃度B[a]P污染時(shí)，GST和SOD活力首先呈現(xiàn)被誘導(dǎo)升高的趨勢(shì)，接著受到抑制下降，分別在3 d和6 d達(dá)到穩(wěn)定值，達(dá)到平衡以后GST活力與B[a]P的濃度呈負(fù)相關(guān)，SOD活力最終恢復(fù)到對(duì)照組水平；GSH含量在一開始染毒就呈現(xiàn)出被顯著抑制的趨勢(shì)，在1 d后達(dá)到穩(wěn)定值，穩(wěn)定后GSH含量與B[a]P濃度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。菲律賓蛤仔鰓絲和消化盲囊AHH、GST、SOD活力和GSH含量對(duì)B[a]P污染表現(xiàn)出了較強(qiáng)的敏感性，且變化出現(xiàn)較強(qiáng)的規(guī)律性，這顯示菲律賓蛤仔解毒代謝酶和抗氧化防御系統(tǒng)的標(biāo)志物能指示外界B[a]P的污染程度，具有重要的參考意義。

3.2 B[a]P對(duì)菲律賓蛤仔組織DNA單鏈斷裂水平的影響

正常的遺傳方式下，DNA半保留復(fù)制的特性將遺傳物質(zhì)傳遞給下一代，確保了DNA基因組的穩(wěn)定性，也確保了有機(jī)體的正常新陳代謝和繁殖。但當(dāng)正常的生長(zhǎng)環(huán)境被破壞時(shí)，例如存在化學(xué)誘變物、電離輻射、代謝過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧自由基或發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)、氧化還原反應(yīng)等，生物細(xì)胞內(nèi)的DNA分子可能會(huì)被損傷。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)研究了化學(xué)物誘導(dǎo)的DNA損傷，化學(xué)物進(jìn)入生物體內(nèi)，經(jīng)細(xì)胞新陳代謝產(chǎn)生中間產(chǎn)物，與DNA結(jié)合形成加合物，導(dǎo)致DNA單鏈斷裂。B[a]P進(jìn)入生物體，經(jīng)細(xì)胞新陳代謝生成具化學(xué)活性中間產(chǎn)物，如二醇環(huán)氧化物{B[a]PDE}[25]，B[a]PDE可與DNA形成穩(wěn)定或不穩(wěn)定加合物，導(dǎo)致DNA鏈上的堿性不穩(wěn)定位點(diǎn)，引發(fā)DNA鏈斷裂[26]。

本實(shí)驗(yàn)采用了堿解旋技術(shù)測(cè)定了受到不同濃度及時(shí)間B[a]P脅迫的菲律賓蛤仔鰓及消化盲囊的DNA單鏈斷裂程度，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，B[a]P可誘導(dǎo)菲律賓蛤仔鰓和消化盲囊DNA產(chǎn)生明顯的損傷效應(yīng)，隨著B[a]P濃度和染毒時(shí)間的增加，F(xiàn)值逐漸減小，即DNA受損傷的程度加深，并表現(xiàn)出較好的時(shí)間-劑量效應(yīng)。因此，作者認(rèn)為菲律賓蛤仔組織暴露于B[a]P污染物中DNA損傷效應(yīng)明顯，DNA損傷水平可以作為B[a]P污染程度的生物效應(yīng)指標(biāo)。

3.3 基于菲律賓蛤仔多環(huán)芳烴生物標(biāo)志物的篩選

近年來(lái)，大量的染毒實(shí)驗(yàn)證明生物體的某些指標(biāo)與環(huán)境中的污染物呈現(xiàn)較好的敏感性和相關(guān)性，因此利用生物體的某些指標(biāo)來(lái)反映污染物污染程度的方法已經(jīng)得到了廣泛的認(rèn)可和應(yīng)用。Versteeg等[27]和Cooper等[28]提出了評(píng)估生物標(biāo)志物的14條通用標(biāo)準(zhǔn)；Cheung等[29]將這14條標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步簡(jiǎn)化概括總結(jié)為四條：1)生物標(biāo)志物可以被環(huán)境中污染物的實(shí)際濃度所誘導(dǎo)；2)生物標(biāo)志物的變化與不同污染物濃度之間存在明顯的劑量效應(yīng)；3)生物標(biāo)志物具有穩(wěn)定性；4)生物標(biāo)志物不受季節(jié)變化的影響。

根據(jù)菲律賓蛤仔的解毒代謝過(guò)程和B[a]P對(duì)機(jī)體的毒性效應(yīng)，本文逐步篩選和分析AHH活力、GST活力、GSH含量、SOD活力和DNA損傷這5項(xiàng)指標(biāo)。本文前兩個(gè)討論結(jié)果表明，在外界環(huán)境被B[a]P污染的情況下，上述5項(xiàng)指標(biāo)均被誘導(dǎo)，并呈現(xiàn)時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.05)，這一變化情況符合Cheung等[29]所提出的生物標(biāo)志物的第一、第二兩點(diǎn)要求。但海洋環(huán)境的多變和生物體自身的復(fù)雜，導(dǎo)致單一的生物標(biāo)志物可能很難準(zhǔn)確地評(píng)估環(huán)境污染程度，因此可以考慮結(jié)合兩個(gè)或三個(gè)生物標(biāo)志物形成綜合生物標(biāo)志物?？偨Y(jié)本次研究，依據(jù)實(shí)驗(yàn)中菲律賓蛤仔兩種組織各項(xiàng)解毒代謝酶活力被誘導(dǎo)的情況以及DNA損傷情況，認(rèn)為可以整合解毒代謝酶AHH活力和DNA單鏈斷裂水平兩項(xiàng)生物標(biāo)志物形成一個(gè)組合作為評(píng)估B[a]P污染程度的生物標(biāo)志物，將AHH活力作為防御型生物標(biāo)志物，DNA單鏈斷裂水平作為損傷型生物標(biāo)志物，在兩個(gè)方面、雙重保障的情況下對(duì)環(huán)境中B[a]P的污染程度作出精確地評(píng)估，為我國(guó)海洋環(huán)境中多環(huán)芳烴的污染監(jiān)測(cè)提供有效、確實(shí)可行的技術(shù)支撐。