Mammaglobin 在子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸腺癌的表達及臨床意義

易靜，何蓉，李君怡

(江西省萍鄉(xiāng)市婦幼保健院病理科，萍鄉(xiāng) 337000)

子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸腺癌均為婦科常見的惡性腫瘤，兩者的臨床治療方法、手術(shù)方案的選擇以及臨床預(yù)后等各不相同。據(jù)統(tǒng)計，≤50歲年齡組子宮內(nèi)膜癌患者有增高趨勢，≤40歲和＞60歲年齡組宮頸癌患者呈增高趨勢[1]。子宮內(nèi)膜癌是婦科生殖道最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生率約占女性生殖道惡性腫瘤的20%-30%，近年來，發(fā)病率呈持續(xù)上升趨勢[2]。宮頸腺癌是宮頸癌中除宮頸鱗癌之外最常見的一種亞型，以往在宮頸癌中所占比例較小。近年來，宮頸腺癌的發(fā)病率逐年升高，且有年輕化趨勢，因此人們對宮頸腺癌的研究越來越重視[3]。子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸原發(fā)腺癌生物學(xué)行為均可向下擴展與向上延伸，宮頸腺癌多數(shù)起源于宮頸管內(nèi)膜，最常見的為頸管內(nèi)膜型，它可向子宮內(nèi)膜方向分化形成子宮內(nèi)膜樣癌和透明細胞癌，亦可向輸卵管上皮方向分化形成漿液乳頭狀腺癌[4，5]。由此可見，兩者無論從解剖學(xué)位置還是組織學(xué)形態(tài)均無一個明確的分界及區(qū)別。然而，子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸腺癌的鑒別診斷對于臨床治療和預(yù)后的判斷具有重要的臨床意義[6，7]，因此，兩者的鑒別診斷顯得尤為重要。1996年美國學(xué)者Mark A Watson和Timothy P Fleming[8]利用差式篩選和cDNA末端擴增（rapid amplification of cDNA ends，RACE）技術(shù)，從乳腺癌上皮細胞中克隆出一個分子量10.5kDa的分泌性差異表達蛋白，該蛋白是93個氨基酸殘基構(gòu)成的多肽，其氨基酸序列與子宮珠蛋白（uteroglobin，UG）超家族同源，從而將其命名為人乳腺球蛋白。2002年Darrick Carter等的研究表明hMAM與另一種子宮珠蛋白超家族成員Lipophilin B形成共價復(fù)合物，它們在乳腺癌組織中特異表達且表達水平顯著相關(guān)[9]。Mammaglobin的生理功能不明，但UG超家族的成員全都是分泌性，少有糖基化的小分子二聚體蛋白，主要在粘膜組織中表達，結(jié)構(gòu)相似，功能相近[10]。本文通過免疫組化S-P兩步法對50例子宮內(nèi)膜腺癌病例和21例宮頸腺癌病例進行Mammaglobin蛋白檢測，并分析其結(jié)果，探討Mammaglobin蛋白檢測應(yīng)用于子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸腺癌鑒別診斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院病理科2014年4月至2017年11月存檔蠟塊中抽取子宮內(nèi)膜腺癌50例，患者年齡41-67歲，平均年齡53.7歲；宮頸腺癌21例，患者年齡36-80歲，平均年齡59歲。兩組中每個病例均由2名多年資且經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師診斷。

1.2 實驗操作方法 儀器設(shè)備：不銹鋼鍋，耐高溫塑料染色架，電磁爐。所需試劑：鼠抗Mammaglobin單克隆抗體，為即用型抗體，購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；酶標羊抗小鼠/兔IgG聚合物；EDTA抗原修復(fù)液，PH=9.0，蒸餾水。操作步驟：⑴前期蠟塊制作。⑴組織處理：10%中性福爾馬林緩沖液→80%乙醇→85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→二甲苯→石蠟。⑵組織包埋、切片。⑶脫蠟和水化：①石蠟切片置于二甲苯15min×2次；②無水乙醇浸泡3min×2次；③95%乙醇浸泡3min；④85%乙醇浸泡3min；⑤自來水沖洗1min；⑥PBS沖洗3min×3次。⑷高壓鍋開鍋后加熱EDTA抗原修復(fù)液，加熱至沸騰，將功率調(diào)至最小 （處于保溫狀態(tài)），將切片置入已沸騰的修復(fù)液中，繼續(xù)加熱20min，自然冷卻。①蒸餾水沖洗3min×2次。②PBS沖洗3min×2次。③加一抗（鼠抗Mammaglobin單克隆抗體）室溫60min。④PBS沖洗3min×2次。⑤加二抗 （酶標羊抗小鼠/兔IgG聚合物）室溫15-20min。⑥PBS沖洗3min×2次。⑦DAB顯色劑3-5min。⑧蘇木素復(fù)染10-30s、脫水、封片。⑸在顯微鏡下進行觀察，每批染色均設(shè)已知陽性及陰性對照。

1.3 結(jié)果判讀 Mammaglobin以細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。判定標準：陽性細胞＜5%為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)采用χ2檢驗，檢驗標準取P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Mammaglobin陽性表達率在子宮內(nèi)膜腺癌為72%（36/50），宮頸腺癌為 4.8%（1/21），子宮內(nèi)膜腺癌Mammaglobin陽性率明顯高于宮頸腺癌，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

表1 Mammaglobin在子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸腺癌中的表達[n（%）]

3 討論

子宮內(nèi)膜腺癌占女性生殖道惡性腫瘤20%-30%，近年來發(fā)病率不斷上升，晚期癌灶可向下擴展侵及宮頸，其組織學(xué)類型主要分為子宮內(nèi)膜樣腺癌、黏液腺癌、漿液性癌及透明細胞癌[11]。宮頸癌為最常見的婦科惡性腫瘤，而宮頸腺癌占宮頸癌15%-20%，極少部分宮頸腺癌可向上延伸累及子宮內(nèi)膜。其組織學(xué)類型分為普通型腺癌、黏液腺癌、微偏腺癌、絨毛管狀腺癌、透明細胞癌、漿液性癌、中腎管癌和一些少見的亞型，其中普通型宮頸腺癌是最常見的組織類型，其形態(tài)類似子宮內(nèi)膜腺癌，腺體形態(tài)既有宮頸內(nèi)膜樣分化，又有子宮內(nèi)膜樣分化[12]。因此，從癌灶發(fā)生的部位以及組織形態(tài)學(xué)方面均不能十分準確的區(qū)分子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸腺癌。近年來，免疫組織化學(xué)技術(shù)逐步發(fā)展成為臨床病理診斷不可缺少的技術(shù)手段[13]，當組織形態(tài)不能做出明確的病理診斷時，免疫組化起著至關(guān)重要的作用。經(jīng)過臨床研究顯示，已經(jīng)有一些免疫組化標記物被證明對兩者的鑒別診斷有一定的臨床意義，如 P16、CEA、ER 等[14，15]，但特異性及敏感性都不是特別顯著。我們需要研究并探討，是否有更特異及更敏感的免疫組化標記物能應(yīng)用于兩者的鑒別診斷。由于Mammaglobin對乳腺癌的敏感性和特異性較高，已成為診斷外科病理的一種有效的免疫組織化學(xué)標志物[16-19]。有研究表明該蛋白與大鼠前列腺素蛋白具有42%的序列同一性，與兔和人的子宮分泌球蛋白家族1A成員1（SCGB1A1）具有高度同源性[20]。并且，子宮內(nèi)膜癌是在Bhargava等人的研究中表達Mammaglobin最常見的非乳腺病變[20]。到目前為止，只有少數(shù)研究在惡性或良性的人體子宮內(nèi)膜組織中檢測到Mammaglobin[21-24]。一項研究報告稱Mammaglobin存在于9個子宮內(nèi)膜癌中的一個[16]，而另項研究報告在39個子宮內(nèi)膜癌中存在30例[19]。本文研究結(jié)果顯示，50個子宮內(nèi)膜癌中存在36例Mammaglobin表達陽性。不可否認，Mammaglobin應(yīng)用于子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸腺癌的鑒別診斷，具有重要的臨床應(yīng)用價值，盡管不是絕對特異，但仍可以作為一個重要參考指標，幫助判斷子宮腺癌的原發(fā)部位，究竟是子宮內(nèi)膜來源還是宮頸來源，尤其是當子宮內(nèi)膜及宮頸均有癌灶時，能夠進一步明確是子宮內(nèi)膜腺癌侵及宮頸，還是宮頸腺癌累及內(nèi)膜，還是雙原發(fā)癌，從而提高病理診斷的準確性，并影響患者的治療及預(yù)后，值得我們進一步研究推廣。