高山紅景天在藥品檢驗(yàn)中含量測(cè)定方法研究

彭振宇，隋思博

（吉林省藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130000）

參照中國(guó)藥典2015年版一部紅景天項(xiàng)下和大株紅景天注射液項(xiàng)下含量測(cè)定方法，采用高效液相色譜法測(cè)定紅景天苷和酪醇的含量。

1 方法考察與結(jié)果

1.1 儀器與試藥

Agilent 1200液相色譜儀，LC-2010CHt高效液相色譜儀，對(duì)照品購(gòu)于中檢定院，供含量測(cè)定用，高山紅景天批號(hào)：110818-201507（含量99.4%），酪醇111676-200401；乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

1.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取紅景天苷、酪醇對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇溶解，在紫外區(qū)200～400 nm掃描，結(jié)果，紅景天苷、酪醇在275 nm附近有最大吸收，與大株紅景天注射液方法所采用的檢測(cè)波長(zhǎng)（278 nm）基本一致。故選定278 nm作為本品的測(cè)定波長(zhǎng)，見圖1、圖2。

1.3 流動(dòng)相的選擇

參照2015年版藥典的方法，采用乙腈－水系統(tǒng)為本法流動(dòng)相，通過試驗(yàn)，將二者比例調(diào)至7：93，在此條件下，供試品圖譜基線平穩(wěn)，供試品色譜圖中紅景天苷和酪醇能得到很好的分離，主峰前后無雜峰。

2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.1 線性關(guān)系

取紅景天苷、酪醇對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含紅景天苷0.4536 mg（未折算純度）、酪醇0.031584 mg的混合溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液1、3、5、7、9 μL，進(jìn)樣測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，數(shù)據(jù)見圖3、圖4。結(jié)果紅景天苷在0.4536～4.0824 μg范圍內(nèi)，酪醇在0.031584～0.284256μg范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，符合外標(biāo)法定量測(cè)定的要求。

圖1 紅景天苷紫外光譜圖

圖2 酪醇紫外光譜圖

2.2 精密度試驗(yàn)

2.2.1 重復(fù)性

取同一份供試品溶液，按正文擬定的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果表明6次測(cè)定的紅景天苷峰面積平均值為612，RSD=0.38%（n=6）酪醇峰面積平均值為167，RSD=0.88%（n=6），試驗(yàn)表明本法的精密度良好。

2.2.2 重現(xiàn)性

取同一供試品依正文的方法平行測(cè)定6份，計(jì)算，6份樣品測(cè)得紅景天苷含量的平均值為0.152%，RSD=1.22%（n=6），含量的平均值為0.89%，RSD=1.3%（n=6），酪醇含量的平均值為0.094%，RSD=2.2%（n=6），試驗(yàn)結(jié)果表明本法的重現(xiàn)性良好。

2.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取紅景天苷和酪醇對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含紅景天苷0.9242 m（純度99.4%）g、含酪醇0.0848 mg的混合溶液，作為加標(biāo)對(duì)照品溶液。精密稱取同法測(cè)定已知含量的供試品6份，每份約1 g，置具塞錐形瓶中，分別精密加入加標(biāo)對(duì)照品溶液10 mL，再精密加入甲醇15 mL，按正文的方法提取、測(cè)定，計(jì)算回收率及RSD。結(jié)果：紅景天苷平均回收率為98.5%，RSD=2.26%（n=6），酪醇平均回收率為98.7%，RSD=2.83%（n=6）。

2.4 耐用性試驗(yàn)

色譜柱考察：實(shí)驗(yàn)中比較了Sepax Bio-C18（5 μm，Φ4.6×150 mm），Luna C18（5 μ，Φ4.6×25mm）兩種色譜柱，按照正文方法色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果兩者均能較好地將紅景天苷和酪醇兩種成分分離，采用上述兩種柱進(jìn)行試驗(yàn)，供試品色譜峰分離良好，根據(jù)上述兩種柱的檢測(cè)結(jié)果，參考中國(guó)藥典2015年版一部紅景天項(xiàng)下，確定本品理論板數(shù)按紅景天苷計(jì)算應(yīng)不低于4000。

3 樣品測(cè)定及含量測(cè)定的測(cè)定

按正文含量測(cè)定方法，測(cè)定了本品10批樣品中紅景天苷、酪醇的含量，見表1，上述10批樣品，紅景天苷及酪醇的含量值差異較大，最大最小值相差4、5倍，與高山紅景天性狀相近的藥材7～10四批含量均較低，且批次較少，不具有代表性。故以對(duì)照藥材測(cè)定值60%為最低限，暫定本品按干燥品計(jì)算，含紅景天苷（C14H20O7）不得少于0.15%，含酪醇（C6H10O2）不得少于0.020%。紅景天苷、酪醇HPLC圖、紅景天苷樣品HPLC圖分別見圖3、圖4。

表1 10批高山紅景天樣品含量測(cè)定結(jié)果（%）

圖3 紅景天苷、酪醇對(duì)照品HPLC圖

圖4 樣品HPLC圖