抗蟲耐除草劑玉米雜交種瑞豐1號(hào)—雙抗12—5對(duì)3種主要鱗翅目害蟲的抗性

孫紅煒 徐曉輝 李凡 高瑞 楊淑珂 路興波

摘要：本試驗(yàn)用田間接蟲和室內(nèi)生測(cè)方法，研究國(guó)產(chǎn)轉(zhuǎn)基因玉米雜交種瑞豐1號(hào)-雙抗12-5（RF1-12-5）對(duì)3種主要的玉米鱗翅目害蟲亞洲玉米螟、黏蟲、棉鈴蟲的抗性。田間結(jié)果表明：RF1-12-5對(duì)亞洲玉米螟、棉鈴蟲的抗性在相應(yīng)的鑒定時(shí)期均達(dá)到高抗水平，RF1-12-5心葉期對(duì)黏蟲的抗性為抗性水平。室內(nèi)鑒定結(jié)果表明：心葉期，RF1-12-5對(duì)亞洲玉米螟抗性起效較慢，飼喂48～72 h后校正死亡率分別為63.97%、77.14%、88.00%；吐絲期飼喂48 h后校正死亡率達(dá)100%，抗性顯著；籽粒期飼喂24、48、72 h后校正死亡率分別為68.86%、83.96%、98.03%。心葉期飼喂24 h后對(duì)黏蟲基本無抗性效果，但48、72 h后的校正死亡率分別達(dá)到94.64%、100%。吐絲期飼喂24 h后對(duì)棉鈴蟲抗性達(dá)到87.59%，48 h后對(duì)棉鈴蟲校正死亡率達(dá)到100%，抗性較強(qiáng)?？傮w來看，RF1-12-5田間對(duì)亞洲玉米螟、棉鈴蟲抗性較高，對(duì)黏蟲抗性略低；室內(nèi)心葉期對(duì)亞洲玉米螟抗性較弱，但在其他時(shí)期對(duì)亞洲玉米螟、黏蟲、棉鈴蟲均表現(xiàn)了較好的抗性。因此RF-12-5具有推廣應(yīng)用的潛力。

關(guān)鍵詞：抗蟲耐除草劑玉米；瑞豐1號(hào)-雙抗12-5；鱗翅目害蟲；田間抗蟲性；室內(nèi)抗蟲性

中圖分類號(hào)：S513.037文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2018）05-0109-06

Abstract Through filed experiments and indoor bioassay， the resistances of domestic transgenic maize hybride Ruifeng 1-Double Resistance 12-5（RF1-12-5） against three major maize lepidopteran pests， Pyrausta nubilalis， Mythimna separate and Helicoverpa armigera were studied. The results of the filed experiments showed that the resistance of RF1-12-5 against Ostrinia furnacalis and Helicoverpa armigera were in high level during the corresponding identification periods. The resistance against Mythimna separate was in moderate level during the whorl stage. The indoor bioassay results showed that RF1-12-5 had slower resistance against Ostrinia furnacalis at whorl stage. After feeding with RF1-12-5 leaves for 24，48 and 72 hours， the corrected mortality rates were respectively 63.97%， 77.14% and 88.00%. At filamentous stage， the resistance was significant and the corrected mortality rate reached 100% after 48 hours. During the grain period， the corrected mortality rates were respectively 68.86%， 83.96% and 98.03% after 24，48 and 72 hours. For Mythimna separate， at whorl stage， there was no obvious resistant effect after 24 hours， but the corrected mortality rates were 94.64% and 100% respectively after 48 and 72 hours. For Helicoverpa armigera， RF1-12-5 showed obvious resistance at filamentous stage and the corrected mortality rates were 87.59% and 100% after 24 and 48 hours respectively. In all，RF1-12-5 showed obvious field resistance against Ostrinia furnacalis and Helicoverpa armigera，but lower resistance against Mythimna separate. It showed lower resistance against Ostrinia furnacalis at whorl stage during indoor bioassay， but better resistance against Ostrinia furnacalis， Mythimna separate and Helicoverpa armigera at other stages. We concluded that RF1-12-5 had the potential for popularization and application in the future.

Keywords Insect-and herbicide-resistant maize； Ruifeng 1-Double Resistance 12-5； Lepidopteran pests； Field insect resistance； Indoor insect resistance

玉米是我國(guó)重要的糧食作物和加工原料，在我國(guó)糧食生產(chǎn)中占據(jù)重要位置。亞洲玉米螟、黏蟲和棉鈴蟲是影響玉米產(chǎn)量的三大主要鱗翅目害蟲，在個(gè)別年份，害蟲的為害甚至?xí)斐捎衩捉^收[1，2]。長(zhǎng)期以來，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中均采用化學(xué)方法對(duì)鱗翅目害蟲進(jìn)行防治。但化學(xué)防治對(duì)環(huán)境危害大，同時(shí)存在防治不及時(shí)的缺點(diǎn)。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因玉米轉(zhuǎn)化體系早已成熟，國(guó)外研發(fā)的轉(zhuǎn)基因抗蟲、耐除草劑、品質(zhì)改良玉米自1996年起相繼在美國(guó)、巴西、阿根廷等國(guó)家進(jìn)行推廣應(yīng)用，取得較好的防治效果，大大減少農(nóng)藥的使用，減輕環(huán)境污染，降低勞動(dòng)力成本。近20年來，轉(zhuǎn)基因作物種植面積不斷擴(kuò)大[3]。我國(guó)自2008年啟動(dòng)轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)，目前已有眾多的轉(zhuǎn)基因玉米進(jìn)入不同階段試驗(yàn)，轉(zhuǎn)植酸酶玉米于2009年底取得生物安全證書[4]。而對(duì)轉(zhuǎn)基因抗蟲及耐除草劑玉米的研究最多，也最成熟[5-7]。從技術(shù)儲(chǔ)備、生產(chǎn)地位等各方面綜合分析，轉(zhuǎn)基因玉米是最有可能首先在我國(guó)推廣應(yīng)用的糧食作物，具有廣闊的應(yīng)用前景[8-10]。雙抗12-5是浙江大學(xué)研發(fā)的含有抗蟲基因cry1Ab/cry2Aj與耐除草劑基因G10evo的轉(zhuǎn)基因玉米新品系[11]， cry1Ab/cry2Aj對(duì)亞洲玉米螟有較高的殺蟲活性，草甘膦靶標(biāo)酶基因G10evo對(duì)草甘膦具有很高的耐受性[12-16]。本試驗(yàn)旨在研究雙抗12-5衍生品種瑞豐1號(hào)-雙抗12-5對(duì)玉米重要鱗翅目害蟲的抗性，以期為該品種在生產(chǎn)上推廣提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試玉米品種：瑞豐1號(hào)-雙抗12-5（簡(jiǎn)稱RF1-12-5，轉(zhuǎn)基因玉米）、瑞豐1號(hào)（簡(jiǎn)稱RF1，為RF1-12-5的雜交親本）、綜31（感蟲對(duì)照品種）、登海3號(hào)（簡(jiǎn)稱DH3，當(dāng)?shù)仄贩N）。RF1-12-5、RF1由浙江大學(xué)提供，綜31由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供，DH3購(gòu)自當(dāng)?shù)胤N子市場(chǎng)。

供試?yán)ハx：亞洲玉米螟、黏蟲、棉鈴蟲，均由本研究室人工繁殖。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2016年在農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因植物環(huán)境安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（濟(jì)南）環(huán)境安全試驗(yàn)基地進(jìn)行。所有玉米品種全生育期不噴施殺蟲劑，常規(guī)方式播種及管理。隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，每品種3次重復(fù)。小區(qū)面積為30 m2（5 m×6 m），行株距60 cm×25 cm，小區(qū)間設(shè)2 m間隔，以防害蟲在不同小區(qū)之間擴(kuò)散。

1.3 田間抗蟲性鑒定

亞洲玉米螟田間抗蟲鑒定：玉米心葉期（6～8葉期）和吐絲期分別間隔3 d人工傍晚接種初孵幼蟲2次。心葉期接種到心葉內(nèi)，吐絲期接種到花絲上。每小區(qū)人工接蟲40株，每株接蟲30～40頭，最后一次接蟲14 d后調(diào)查。

心葉期調(diào)查：調(diào)查接蟲株中上部葉片亞洲玉米螟為害程度，包括受害葉片上的蟲孔大小、數(shù)量及分布等，計(jì)算食葉級(jí)別及食葉級(jí)別平均值，根據(jù)食葉級(jí)別平均值判定玉米心葉期對(duì)玉米螟的抗性水平。為害程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照NY/T 1248.5—2006[17]的規(guī)定。

吐絲期調(diào)查：根據(jù)雌穗被害情況、蛀孔數(shù)量、隧道長(zhǎng)度（cm）及存活幼蟲齡期數(shù)量等，計(jì)算各小區(qū)穗期雌穗被害級(jí)別平均值。按照雌穗被害級(jí)別平均值判定玉米穗期對(duì)亞洲玉米螟的抗性水平。雌穗被害級(jí)別分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—10.1—2007[18]的規(guī)定。

黏蟲田間抗蟲鑒定：玉米4～6葉期接蟲，接蟲方法及接蟲次數(shù)同亞洲玉米螟。最后一次接蟲14 d后調(diào)查玉米葉片受黏蟲為害程度及幼蟲存活數(shù)，記錄心葉被害級(jí)別并計(jì)算心葉期食葉級(jí)別平均值，判定玉米心葉期對(duì)黏蟲的抗性水平。為害程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—10.1—2007[18]的規(guī)定。

棉鈴蟲田間抗蟲鑒定：玉米吐絲期接蟲，接蟲方法及接蟲次數(shù)同亞洲玉米螟。最后一次接蟲14 d后調(diào)查雌穗被害率、幼蟲存活數(shù)、雌穗被害長(zhǎng)度，確定雌穗被害級(jí)別并計(jì)算雌穗被害級(jí)別平均值，判定玉米對(duì)棉鈴蟲的抗性水平。雌穗被害級(jí)別分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—10.1—2007[18]的規(guī)定。

1.4 室內(nèi)抗蟲性鑒定

亞洲玉米螟： 于玉米心葉期、吐絲期、籽粒期分別采集相應(yīng)幼嫩組織飼喂2日齡幼蟲，每玉米生育期重復(fù)6次，每重復(fù)10頭幼蟲。飼喂 24、48、72 h后調(diào)查幼蟲死亡率。

黏蟲：玉米心葉期采集相應(yīng)幼嫩心葉飼喂2日齡幼蟲，重復(fù)6次，每重復(fù)10頭幼蟲，飼喂24、48、72 h后調(diào)查幼蟲死亡率。

棉鈴蟲：玉米吐絲期采集幼嫩花絲飼喂2日齡幼蟲，重復(fù)6次，每重復(fù)10頭幼蟲，飼喂24、48、72 h后調(diào)查幼蟲死亡率。

飼喂時(shí)，每天更換相應(yīng)的新鮮幼嫩組織。室內(nèi)抗蟲性鑒定時(shí)，對(duì)照組幼蟲死亡率>20%放棄試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)照組幼蟲死亡率<20%計(jì)算校正死亡率。本試驗(yàn)中，對(duì)照組幼蟲死亡率為非轉(zhuǎn)基因玉米R(shí)F1和DH3幼蟲死亡率平均值。

校正死亡率（%）=（處理組幼蟲死亡率-對(duì)照組幼蟲平均死亡率）/（1-對(duì)照組幼蟲平均死亡率）×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間抗性鑒定結(jié)果

2.1.1 亞洲玉米螟田間抗性鑒定 玉米心葉期接蟲后1周左右，非轉(zhuǎn)基因玉米葉片出現(xiàn)數(shù)量較多的1～2 mm左右蟲孔，轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米蟲孔數(shù)量很少，14 d后的調(diào)查結(jié)果如表1所示，心葉期RF1-12-5食葉級(jí)別平均值為1.87，DH3、 RF1、綜31分別為5.21、7.44、8.56。按玉米對(duì)玉米螟的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，心葉期RF1-12-5對(duì)亞洲玉米螟的田間抗性達(dá)到高抗水平， RF1、綜31達(dá)到感蟲水平， DH3達(dá)到中抗水平。

吐絲期，RF1-12-5接蟲株雌穗及花絲基本未受害，僅少量花絲枯死，雌穗被害級(jí)別平均值為1.07，而DH3、 RF1、綜31的花絲及雌穗受害嚴(yán)重，部分有活蟲，花絲枯死，穗尖大部分籽粒被啃食，三者雌穗被害級(jí)別平均值分別為5.77、7.13、5.67。按玉米雌穗對(duì)亞洲玉米螟的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)判斷，吐絲期DH3、 RF1、綜31對(duì)亞洲玉米螟均為感蟲水平，而RF1-12-5達(dá)到高抗水平（表1）。

2.1.2 黏蟲田間抗性鑒定結(jié)果 接種黏蟲后，4個(gè)品種玉米均有黏蟲為害癥狀。 RF1、綜31為害重，DH3略輕，表現(xiàn)為蟲孔多，單個(gè)蟲孔較大，甚至有缺刻。RF1-12-5黏蟲為害癥狀輕，表現(xiàn)為單個(gè)蟲孔較小，蟲孔數(shù)量較少。RF1、綜31食葉級(jí)別平均值分別為6.31、6.64，均達(dá)到感蟲水平， DH3平均值略低，為5.88，達(dá)到中抗水平，RF1-12-5則為2.67，到達(dá)抗性水平（表2）。

2.1.3 棉鈴蟲田間抗性鑒定結(jié)果 接種棉鈴蟲后，DH3、RF1、綜31棉鈴蟲為害癥狀明顯，表現(xiàn)為花絲完全受害，禿穗，穗尖被棉鈴蟲啃食，有活蟲；而RF1-12-5花絲基本未受害，雌穗完整，未受害。DH3、RF1、綜31雌穗被害級(jí)別平均值均大于5.1，對(duì)棉鈴蟲抗性均表現(xiàn)為感蟲水平，雌穗被害率93.33%～100%，5級(jí)以上為害較多，平均每株活蟲數(shù)為0.5頭以上； RF1-12-5雌穗被害級(jí)別平均值僅為0.30，對(duì)棉鈴蟲的抗性達(dá)到高抗水平，雌穗被害率雖然為20.00%，但均為1級(jí)、2級(jí)為害，未發(fā)現(xiàn)活蟲存在（表3）。

2.2 室內(nèi)抗蟲性鑒定結(jié)果

2.2.1 亞洲玉米螟室內(nèi)抗蟲性鑒定 由表4可知，玉米心葉期葉片飼喂亞洲玉米螟24 h后，DH3、RF1幼蟲死亡率在10%以內(nèi)， RF1-12-5的幼蟲死亡率為66.67%，校正死亡率為63.97%。48 h后，DH3、RF1幼蟲死亡率大于10%， RF1-12-5則為80.00%，校正死亡率為77.14%；72 h后，DH3、RF1幼蟲死亡率接近20%， RF1-12-5達(dá)90.00%，校正死亡率為88.00%。

吐絲期DH3、RF1飼喂亞州玉米螟24 h后死亡率在5%左右， RF1-12-5為93.33%，校正死亡率為93.02%；48 h后DH3、RF1飼喂玉米螟死亡率在10%以內(nèi)， RF1-12-5飼喂玉米螟死亡率為100%；72 h后DH3RF1飼喂亞洲玉米螟死亡率在15%左右，RF1-12-5達(dá)100%。（表4）。

籽粒期飼喂亞州玉米螟24 h后，DH3、RF1幼蟲死亡率在10%以內(nèi)， RF1-12-5則為71.33%，校正死亡率為68.86%；48 h后DH3、RF1幼蟲死亡率10%左右，RF1-12-5為85.67%，校正死亡率為83.96%；72 h后DH3、RF1幼蟲死亡率接近20%，RF1-12-5為98.37%，校正死亡率為98.03%（表4）。

總體來看， 室內(nèi)RF1-12-5吐絲期對(duì)亞洲玉米螟抗性高于心葉期和籽粒期。

2.2.2 黏蟲室內(nèi)抗蟲性鑒定 飼喂24 h后，RF1-12-5對(duì)黏蟲有一定抗蟲效果，校正死亡率為8.47%； 48 h后，DH3、RF1黏蟲幼蟲死亡率在10%以內(nèi)，RF1-12-5則為95.00%，校正死亡率為94.64%，表現(xiàn)較強(qiáng)的抗性效果； 72 h后，DH3、RF1黏蟲幼蟲死亡率分別為6.67%、13.33%， RF1-12-5為100%（表5）?？傮w來看，RF1-12-5對(duì)黏蟲室內(nèi)抗性起效較慢，飼喂48 h后才有明顯的抗性，但后續(xù)抗性效果較好，飼喂48～72 h后可明確判斷抗性效果。

2.2.3 棉鈴蟲室內(nèi)抗蟲性鑒定 飼喂24 h后， DH3、RF1幼蟲死亡率低于10%，RF1-12-5則為88.33%，校正死亡率為87.59%；48 h后，DH3、RF1幼蟲死亡率均增加至10%左右，RF1-12-5則為100%（表6）。RF1-12-5室內(nèi)對(duì)棉鈴蟲同樣表現(xiàn)出明顯的抗性。飼喂24～48 h后可明確判斷抗蟲效果高低。

3 討論與結(jié)論

轉(zhuǎn)基因作物目標(biāo)性狀是否如期高效表達(dá)，并在實(shí)踐中對(duì)靶標(biāo)生物起到切實(shí)作用，是決定一種轉(zhuǎn)基因作物能否進(jìn)行后期推廣、應(yīng)用的關(guān)鍵。RF1-12-5中的抗蟲基因cry1Ab/cry2Aj表達(dá)的Bt蛋白理論上對(duì)鱗翅目害蟲具有較高的殺蟲活性，本研究采用田間人工接蟲及室內(nèi)組織飼喂兩種方式就RF1-12-5對(duì)3種主要玉米鱗翅目害蟲亞洲玉米螟、黏蟲、棉鈴蟲的抗性進(jìn)行研究，明確其對(duì)3種害蟲的抗性效果。

亞洲玉米螟6月上、中旬為第1代卵盛期，第1代幼蟲群居于玉米心葉喇叭口處或嫩葉上取食葉片表皮及葉肉后潛入心葉內(nèi)蛀食心葉，使被害葉呈半透明薄膜狀或成排的小圓孔。 8月上、中旬第3代卵盛期，第3代幼蟲發(fā)生在夏玉米穗期，在玉米打苞后鉆入苞內(nèi)，抽雄后即向下轉(zhuǎn)移，蛀入莖內(nèi)為害。因此，兩次發(fā)生盛期即夏玉米6～8葉期、花絲期是控制亞洲玉米螟為害的關(guān)鍵時(shí)期。本研究田間鑒定結(jié)果表明，瑞豐1號(hào)-雙抗12-5在這兩個(gè)時(shí)期對(duì)玉米螟抗性表現(xiàn)明顯，蟲孔極少且孔徑小，食葉級(jí)別平均值分別為1.87、1.07，遠(yuǎn)低于瑞豐一號(hào)和登海3號(hào)，對(duì)亞洲玉米螟均表現(xiàn)為高抗水平，抗蟲效果顯著，這與常雪等的研究結(jié)果一致[19]。本研究對(duì)亞洲玉米螟室內(nèi)抗蟲鑒定表明，心葉期飼喂72 h后校正死亡率為88.00%；籽粒期飼喂72 h后校正死亡率達(dá)到98.03%，吐絲期飼喂48 h后校正死亡率即可達(dá)100%，吐絲期對(duì)亞洲玉米螟抗性高于心葉期和籽粒期。常雪的室內(nèi)鑒定結(jié)果[19]同樣表明，雙抗12-5在心葉期對(duì)亞洲玉米螟抗性較吐絲期和雌穗期低，這與常雪發(fā)現(xiàn)Bt蛋白表達(dá)量在吐絲期高于心葉期的研究結(jié)果相符。王江等[20]對(duì)雙抗12-5的研究表明，雙抗12-5對(duì)玉米螟田間達(dá)高抗水平，室內(nèi)生測(cè)表明心葉期、吐絲期接蟲后第5 d幼蟲死亡率達(dá)90%，最終效果與本研究基本一致，抗性發(fā)揮時(shí)間差異可能是蟲源不同或者飼養(yǎng)條件差異所致。與國(guó)外廣泛推廣品種Bt11相比，RF1-12-5對(duì)玉米螟的抗性并不遜色[21]。

黏蟲是我國(guó)著名的遷飛性、暴食性及雜食性害蟲，本身具有較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力。黏蟲在山東1年發(fā)生3代，第2代危害夏玉米。1、2齡幼蟲啃食葉肉成天窗，3齡以后沿葉緣蠶食成缺刻，危害嚴(yán)重時(shí)吃光大部葉片，只殘留很短的中脈。常雪等[22]對(duì)國(guó)外轉(zhuǎn)cryIAb基因玉米Yield Gard的黏蟲抗性研究發(fā)現(xiàn)，接種黏蟲10 d后黏蟲死亡率接近100%。本研究田間鑒定結(jié)果表明，瑞豐1號(hào)-雙抗12-5對(duì)黏蟲抗性較玉米螟低，接蟲196 h食葉級(jí)別平均值為2.67，達(dá)到抗性水平，而室內(nèi)鑒定雖然抗性起效較慢，但隨著飼喂時(shí)間延長(zhǎng)，同樣表現(xiàn)出較好的抗性效果。由于黏蟲幼蟲為多食性害蟲，具有遷移危害的習(xí)性，因此，各齡期幼蟲均有可能發(fā)生，抗蟲玉米不同生育期、不同器官Bt蛋白表達(dá)量均有差異[19]，因此有必要采用不同生育期的相應(yīng)組織器官對(duì)各齡期黏蟲幼蟲進(jìn)行抗性鑒定，以便更全面地研究抗蟲玉米對(duì)黏蟲的抗性。

棉鈴蟲一般第4代為害夏玉米。夏玉米棉鈴蟲卵80%左右落在夏玉米抽出但未散粉的雄穗上，卵孵化后幼蟲集中在雌穗頂端花絲上取食。從吐絲期鑒定結(jié)果看，瑞豐1號(hào)-雙抗12-5 田間及室內(nèi)對(duì)棉鈴蟲均有很好的抗性效果，田間雌穗被害率低，為20.00%，且多為低級(jí)別為害，未調(diào)查到活蟲，抗性達(dá)高抗水平；室內(nèi)鑒定校正死亡率48 h后達(dá)100%。常雪等[22]對(duì)國(guó)外品種Yield Gard的田間鑒定結(jié)果表明，雌穗被害率為3.5%，危害級(jí)別為0.007，百株存活幼蟲14.3頭。盡管二者之間存在一定差異，但差異是由接蟲數(shù)量及調(diào)查方法不同所致。本試驗(yàn)中，瑞豐1號(hào)-雙抗12-5田間接蟲并未調(diào)查到活蟲存在，表明瑞豐1號(hào)-雙抗12-5可以很好地控制棉鈴蟲為害，且抗蟲效果完全達(dá)到國(guó)外品種水平。

田間抗性鑒定受田間自然條件的影響，接蟲后幼蟲存活率較低，但存活下來的幼蟲生活力強(qiáng)，在非轉(zhuǎn)基因植株及感蟲品種上很容易造成可見的、明顯的為害癥狀，能夠直接反映出植物的田間抗性表現(xiàn)。室內(nèi)抗性鑒定由于飼養(yǎng)條件變化較大，不同昆蟲對(duì)環(huán)境適應(yīng)性差別較大，有時(shí)對(duì)照死亡率較高，影響抗性的判斷。但由于Bt蛋白發(fā)揮作用較快，一般接蟲后24～48 h可看到明顯的效果。本研究表明，國(guó)產(chǎn)轉(zhuǎn)基因玉米瑞豐1號(hào)-雙抗12-5對(duì)亞洲玉米螟、黏蟲、棉鈴蟲具有理想的抗性效果。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 聶繼東，汪宏偉.黏蟲對(duì)玉米的危害與防治[J].吉林農(nóng)業(yè)， 2017（8）：84.

[2] 王紅軍，郭書亞.玉米螟對(duì)夏玉米果穗的危害及產(chǎn)量的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（8）：95-97.

[3] James C.2015 年全球生物技術(shù)/轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化發(fā)展態(tài)勢(shì)[J]. 中國(guó)生物工程雜志，2016，36（4）：1-11.

[4] 張琪，陳茹梅，楊文竹，等.組成型表達(dá)轉(zhuǎn)植酸酶基因（phyA2）玉米的獲得[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2010，18（4）：623-629.

[5] 劉洋，劉相國(guó)，汪洋洲，等.抗蟲抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米HiII-NGc-1 的遺傳穩(wěn)定性分析 [J].生物技術(shù)進(jìn)展， 2016，6（6）：428-434.

[6] 王慧，楊小艷，翁建峰，等.抗玉米螟基因Cry1A.301 原核表達(dá)和玉米遺傳轉(zhuǎn)化[J].作物雜志， 2014（2）：34-38.

[7] 戴軍，李秀影，朱莉，等.轉(zhuǎn)Bt cry1Ah基因抗蟲玉米的分子檢測(cè)及農(nóng)藝性狀分析[J].生物技術(shù)通報(bào)，2014（5）：62-68.

[8] 李寧，何康來，崔蕾，等.轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米環(huán)境安全性及我國(guó)應(yīng)用前景[J].植物保護(hù)， 2011，37（6）：18-26.

[9] 沈平，章秋艷，林友華，等.推進(jìn)我國(guó)轉(zhuǎn)基因玉米產(chǎn)業(yè)化的思考[J].中國(guó)生物工程雜志，2016，36（4）：24-29.

[10]張彥琴，董春林，楊麗莉，等.轉(zhuǎn)基因玉米的產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2016，44（30）：215-216，244.

[11]沈志成，林朝陽(yáng)，張先文，等.玉米轉(zhuǎn)化事件“雙抗12-5”及其特異性鑒定方法：CN201510267044.5[P].

[12]Kota M， Daniell H， Varma S， et al. Overexpression of the Bacillus thuringiensis （Bt） Cry2Aa2 protein in chloroplasts confers resistance to plants against susceptible and Bt-resistant insects[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1999，96（5）： 1840-1845.

[13]Bravo A， Soberón M. How to cope with insect resistance to Bt toxins[J]. Trends in Biotechnology，2008，26（10）： 573-579.

[14]Gouffon C ，Van Vliet A ，Van Rie J ，et al. Binding sites for Bacillus thuringiensis Cry2Ae toxin on heliothine brush border membrane vesicles are not shared with Cry1A， Cry1F， or Vip3A toxin[J]. Appl. Environ. Microbiol.，2011，77（10）：3182-3188.

[15]林擁軍，張啟發(fā).改造合成的蘇云金芽胞桿菌殺蟲晶體蛋白基因Cry2A：CN143823[P].2004-03-10.

[16]Tan S Y， Cayabyab B F， Alcantara E P，et al. Comparative susceptibility of Ostrinia furnacalis， Ostrinia nubilalis and Diatraea saccharalis （Lepidoptera： Crambidae） to Bacillus thuringiensis Cry1 toxins[J].Crop Protection，2011，30（9）：1184-1189.

[17]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY/T 1248.5—2006 玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第5部分：玉米抗玉米螟鑒定技術(shù)規(guī)范[S].

[18]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—10.1—2007轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品環(huán)境安全檢測(cè)抗蟲玉米第1部分：抗蟲性[S].

[19]常雪，王偉，沈志成，等.轉(zhuǎn)cry1Ab/cry2Aj玉米對(duì)亞洲玉米螟的抗性評(píng)價(jià)[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2013，40（4）：339-344.

[20]王江，武奉慈，劉新穎，等.轉(zhuǎn)基因抗蟲耐除草劑復(fù)合性狀玉米‘雙抗12-5對(duì)亞洲玉米螟的抗性及對(duì)草甘膦的耐受性研究[J].植物保護(hù)，2016，42（1）：45-50.

[21]何康來，王振營(yíng)，文麗萍，等.轉(zhuǎn)Bt 基因玉米對(duì)亞洲玉米螟的抗性評(píng)價(jià)[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2004，20（6）：240-242，246.

[22]常雪，常雪艷，何康來，等.轉(zhuǎn)cry1Ab基因玉米對(duì)黏蟲的抗性評(píng)價(jià)[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2007，34（3）：225-228.

[23]常雪艷，何康來，王振營(yíng)，等.轉(zhuǎn)Bt基因玉米對(duì)棉鈴蟲的抗性評(píng)價(jià)[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2006，33（4）：374-378.